PROCEDIMIENTO PARA DIFERENCIAR ENTRE CAUSAS NO INFECCIOSAS E INFECCIOSAS DE UN FALLO MULTIORGÁNICO.

Procedimiento para diferenciar entre causas no infecciosas e infecciosas de un fallo multiorgánico La presente invención se refiere a un procedimiento para la medición in vitro de perfiles de expresión génica usando genes específicos, así como fragmentos de genes de los mismos, determinándose la actividad génica de una pluralidad de genes de muestras de pacientes para constatar la presencia de una causa no infecciosa o infecciosa de un fallo multiorgánico según la reivindicación 1. Además, la presente invención se refiere a nuevas posibilidades de diferenciación entre causas no infecciosas e infecciosas de un fallo multiorgánico de pacientes que puede derivarse de hallazgos experimentalmente verificados en relación con la aparición de cambios de las actividades génicas (transcripción) en pacientes con fallo multiorgánico. A pesar de los avances en el entendimiento patofisiológico y el tratamiento de apoyo, el síndrome del fallo multiorgánico (SFMO) o el fallo multiorgánico (FMO) representa en pacientes que requieren cuidados intensivos la causa más frecuente de muerte y mundialmente sigue aumentando. Las consecuencias de este desarrollo no sólo son considerables para los pacientes individuales, sino que tienen enormes repercusiones sobre los costes de la sanidad y el avance médico en muchos campos de la medicina. Como fallo multiorgánico se designa al fallo que se produce al mismo tiempo o en un corto periodo de tiempo de dos o más sistemas de órganos vitales. El síndrome del fallo multiorgánico (SFMO) precede al FMO como fallo orgánico inicial [1]. Actualmente se habla de fallo multiorgánico cuando dos o más órganos presentan al mismo tiempo o sucesivamente fallos, descartándose un fallo orgánico crónicamente persistente [2]. El pronóstico del FMO depende estrechamente del número de sistemas orgánicos implicados. La mortalidad asciende en el fallo de un órgano dentro de las primeras 24 horas al 22%, después de 7 días al 41%. En el caso de fallo de tres sistemas de órganos la mortalidad asciende en el primer día al 80% y después de 4 días al 100% [3]. Para la puntuación clínica del grado de gravedad de SFMO y FMO se usa regularmente la puntuación de fallo multiorgánico (Multiple-Organ-Failure-Score) (puntuación de FMO, de MOF-Score) de GORIS y col. [4] o alternativamente también la puntuación de la evaluación de fallo multiorgánico relacionado con sepsis (EIMRS) (Sepsis-related Organ Failure Assessment (SOFA) Score) [5]. La puntuación de FMO permite una clasificación rápida y clínicamente sencilla de la función de los órganos en tres grados. Una puntuación de FMO > 4 designa regularmente en la bibliografía clínica FMO [6]. La puntuación de IMRS es un sistema de puntos que valora la rápida evaluación clínica de la función respectivamente en cuatro grados de gravedad, los siguientes sistemas de órganos: respiración (pulmones), coagulación, hígado, aparato circulatorio, sistema nervioso central y riñón. El FMO transcurre clínicamente en tres fases [7] 1. Órgano de choque: el mecanismo patofisiológico desencadenante es un déficit de perfusión de distinta génesis. Este acontecimiento se produce en el plazo de horas y todavía no deja daños permanentes. 2. Disfunción orgánica: un déficit de perfusión persistente en el plazo de los siguientes días conduce a la formación de un SRIS (síndrome de respuesta inflamatoria sistémica, de Systemic Inflammatory Response Syndrome, clasificado según [8]) con edemas locales y lesiones celulares. Esta fase se designa síndrome de fallo multiorgánico (SFMO). 3. Fallo orgánico: el déficit de perfusión persistente conduce a estasis en el área visceral, por lo que se produce superinfección y translocación de las endotoxinas del intestino. Esto conduce a una potenciación de los síntomas clínicos y al cuadro completo de sepsis. De la disfunción orgánica resulta un fallo orgánico. El SFMO y el FMO son cuadros clínicos con una complicada patofisiología. Hasta hoy en día sólo se han entendido insuficientemente las exactas causas moleculares de la aparición y la complejidad de la respuesta huésped inmunológica-inflamatoria en infección grave y traumatismo que puede conducir al desencadenamiento de un SRIS y a las correspondientes repercusiones cardiocirculatorias [9]. El SFMO y el FMO pueden ser de génesis tanto infecciosa como no infecciosa. El SFMO y el FMO aparecen regularmente como complicación clínicamente importante en pacientes con sepsis, después de choque traumático, en pacientes después de operaciones utilizando el sistema de circulación extracorporal, después de trasplantes de órganos, y otros (Figura 1). Un importante patomecanismo para la aparición del SFMO y el FMO es el desarrollo de un síndrome inflamatorio sistémico (SRIS, [8]). Los procesos patofisiológicos iniciados en el marco de un SRIS no implican sólo todos los componentes del sistema inmunitario, sino que perjudican al aparato cardiocirculatorio en 2 ES 2 365 978 T3 todos los niveles y no sólo se limitan a depresión miocárdica y vasodilatación. Los cambios cardiocirculatorios, sobre todo en el plano de la microcirculación, forman la distancia final común y producen una hipoxia de tejidos que se considera un cofactor importante en la patogénesis del fallo multiorgánico. La Figura 1 describe a modo de ejemplo los mecanismos más importantes desde el punto de vista actual de la aparición del SFMO y el FMO [10]: un sistema inmunitario hiperactivo parece que desempeña una función central en la aparición del fallo multiorgánico. A este respecto, el endotelio asume una función clave central mediante la secreción de citocinas mediante la mediación de la adhesión de leucocitos. En las células endoteliales se activan cascadas de transducción de señales que por último lugar conducen a la expresión y a la activación de factores de transcripción. El conocimiento todavía incompleto de los procesos en la fase temprana del SFMO y el FMO es el motivo por el que hasta hoy en día no existe ningún diagnóstico sensible/específico que pueda discriminar entre causas infecciosas y no infecciosas. Los novedosos biomarcadores y diagnósticos, a partir de ahora también en el plano de la expresión génica, pueden proporcionar informaciones diagnósticas esenciales para el reconocimiento temprano de fallo multiorgánico, así como para diferenciar entre causas infecciosas y no infecciosas, de un SFMO y un FMO, y además representan una contribución importante para la aclaración de los mecanismos patofisiológicos de inflamaciones sistémicas. Los síntomas tempranos frecuentemente usados clínicamente como fiebre, leucocitosis, taquicardia y taquipnea son completamente inespecíficos en el diagnóstico de un SFMO o un FMO, así como en la diferenciación entre causas infecciosas y no infecciosas de un SFMO y un FMO. Los parámetros que registran precozmente los trastornos de la microcirculación como cambios de pH de la mucosa intestinal [11] y el nivel de lactato en el lecho capilar [12,13], la aparición de un fallo respiratorio cuya causa no se encuentra en los pulmones [2], la subida de leucocitos-elastasa [14,15], la altura del nivel de neopterina [16], la activación de leucocitos polimorfonucleares y la altura del nivel de IL­ 6 [17] son adecuados con limitaciones como parámetros tempranos para la aparición tardía de SFMO y FMO, pero pueden no contribuir a la diferenciación entre causas infecciosas y no infecciosas de un SFMO y un FMO. Por tanto, existe una necesidad urgente de un nuevo procedimiento diagnóstico que mejore la capacidad del experto para diferenciar precozmente SFMO o FMO no infeccioso de infeccioso y para obtener información de la respuesta a tratamientos específicos. Pero precisamente la diferenciación entre causas infecciosas y no infecciosas de un SFMO y un FMO es de suma importancia médica ya que mediante una diferenciación tal pueden utilizarse más específicamente, por ejemplo, antibióticos, lo que, además de evitar efectos secundarios debido a la utilización inespecífica de antibióticos, también contribuye a un considerable ahorro de costes. Igualmente, en el caso de presencia de un SFMO o un FMO no infeccioso pueden evitarse medidas diagnósticas muy estresantes para los pacientes, así como que requieren mucho tiempo y personal (por ejemplo, transporte al CT/MRI), para la identificación del sitio de infección respectivo, la realización de amplios procedimientos microbiológicos (por ejemplo, la investigación de cultivos de sangre que también está asociada a la extracción de grandes cantidades de sangre), pero también el intercambio muy arriesgado de todos los materiales de plástico conectados al paciente como catéter venoso, etc. Por el contrario, la rápida identificación de causas infecciosas de un SFMO o un FMO puede garantizar el comienzo... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la medición in vitro de perfiles de expresión génica usando genes específicos seleccionados del grupo constituido por: SEQ ID Nº 1 a SEQ ID Nº 1297, así como fragmentos de genes de los mismos con por lo menos 20-2000 nucleótidos, caracterizado porque se determina la expresión génica de una pluralidad de genes de muestras de pacientes para constatar la presencia de una causa no infecciosa o infecciosa de un fallo multiorgánico. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque los fragmentos de genes comprenden 20 - 200, preferiblemente 20 - 80 nucleótidos. 3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque se usan por lo menos 2 a 100 genes diferentes y/o fragmentos de genes. 4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque se usan por lo menos 200 genes diferentes y/o fragmentos de genes. 5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 o 2 caracterizado porque se usan por lo menos 200 a 500 genes diferentes y/o fragmentos de genes. 6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 o 2 caracterizado porque se usan por lo menos 500 a 1000 genes diferentes y/o fragmentos de genes. 7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 o 2 caracterizado porque se usan por lo menos 1000 a 2000 genes diferentes y/o fragmentos de genes. 8. Procedimiento según la reivindicación 1 a 7, caracterizado porque la actividad génica se determina mediante procedimientos de hibridación. 9. Procedimiento según la reivindicación 8, caracterizado porque la actividad génica se determina mediante micromatrices. 10, Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la actividad génica se determina mediante procedimientos independientes de la hibridación, especialmente hidrólisis enzimática y/o química y/o procedimientos de amplificación, preferiblemente PCR, cuantificación posterior de los ácidos nucleicos y/o de derivados y/o fragmentos de los mismos. 11. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque la muestra se selecciona de: fluidos corporales, especialmente sangre, líquido cefalorraquídeo, orina, líquido ascítico, líquido seminal, saliva, líquido de punción; contenido celular o una mezcla de los mismos. 12. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque las muestras celulares se someten dado el caso a un tratamiento lítico para liberar sus contenidos celulares. 44