Un procedimiento para la detección de Chlamydia trachomatis (CT) y/o Mycoplasma genitalium (MG) y/o Neisseria gonorrhoeae (NG) en una muestra,

que es adecuado para dicha detección en una multiplicación múltiple en tiempo real, en que dicha detección comprende la determinación de si se ha producido, o se produce, al menos un amplicón a partir de dicha muestra, o a partir de material de ácido nucleico de la misma, mediante multiplicación por medio de cebadores de multiplicación, de modo que una determinación positiva indica que está(n) presente(s) al menos una CT y/o al menos un MG y/o al menos una NG en dicha muestra, en que dichos cebadores de multiplicación comprenden: al menos dos cebadores que están destinados a dirigirse a CT y que son adecuados para la detección de CT en una multiplicación múltiple en tiempo real, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a CT son oligonucleótidos que consisten en 14-30 nucleótidos, cuyas secuencias son adecuadas para uso como cebadores directo e inverso, respectivamente, en la multiplicación de al menos una secuencia molde de referencia de CT, en que dicha al menos una secuencia molde de referencia de CT es un fragmento que consiste en las posiciones 5571-5760 (ID. SEC. nº 5) de la secuencia de CT de ID. SEC. nº 1, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a CT que permiten una detección múltiple de CT en tiempo real, y - al menos dos cebadores que están destinados a dirigirse a MG y que son adecuados para la detección de MG en una multiplicación múltiple en tiempo real, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son oligonucleótidos que consisten en 14-30 nucleótidos, cuyas secuencias son adecuadas para uso como cebadores directo e inverso, respectivamente, en la multiplicación de al menos una secuencia molde de referencia de MG, en que dicha al menos una secuencia molde de referencia de MG es un fragmento que consiste en: - las posiciones 1-270 (ID. SEC. nº 13) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 2, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real, - las posiciones 1140-1290 (ID. SEC. nº 19) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real, - las posiciones 1060-1250 (ID. SEC. nº 25) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real, - las posiciones 1520-1710 (ID. SEC. nº 31) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real, - las posiciones 1500-1710 (ID. SEC. nº 37) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real, y - al menos dos cebadores que están destinados a dirigirse a NG y que son adecuados para la detección de NG en una multiplicación múltiple en tiempo real, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a NG son oligonucleótidos que consisten en 14-30 nucleótidos, cuyas secuencias son adecuadas para uso como cebadores directo e inverso, respectivamente, en la multiplicación de al menos una secuencia molde de referencia de NG, en que dicha al menos una secuencia molde de re­ ferencia de NG es un fragmento que consiste en las posiciones 101-380 (ID. SEC. nº 42) de la secuencia de NG de ID. SEC. nº 4 , o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a NG que permiten una detección múltiple de NG en tiempo real, en que dicha determinación de si se ha producido, o se produce, al menos un amplicón es llevada a cabo por medio de al menos una sonda que está destinada a hibridarse con dicho al menos un amplicón, y en que dicha al menos una sonda comprende: - al menos una sonda específica para CT, que es adecuada para la detección de CT en una multiplicación múltiple en tiempo real, en que dicha al menos una sonda específica para CT es: y i. un fragmento de al menos 15 nucleótidos de dicha secuencia molde de referencia de CT, o un fragmento de al menos 15 nucleótidos de la secuencia que es totalmente complementaria de dicha secuencia molde de referencia de CT por todo lo largo de dicha secuencia molde de referencia, o ii. una variante conservativa de dicho fragmento, cuya secuencia tiene al menos un 90% de identidad con un fragmento de i. por todo lo largo de dicho fragmento de i., - al menos una sonda específica para MG, que es adecuada para la detección de MG en una multiplicación múltiple en tiempo real, en que dicha al menos una sonda específica para MG es: y iii. un fragmento de al menos 15 nucleótidos de dicha secuencia molde de referencia de MG, o un fragmento de al menos 15 nucleótidos de la secuencia que es totalmente complementaria de dicha secuencia molde de referencia de MG por todo lo largo de dicha secuencia molde de referencia, o iv. una variante conservativa de dicho fragmento, cuya secuencia tiene al menos un 90% de identidad con un fragmento de iii. por todo lo largo de dicho fragmento de iii., - al menos una sonda específica para NG, que es adecuada para la detección de NG en una multiplicación múltiple en tiempo real, en que dicha al menos una sonda específica para NG es: v. un fragmento de al menos 15 nucleótidos de dicha secuencia molde de referencia de NG, o un fragmento de al menos 15 nucleótidos de la secuencia que es totalmente complementaria de dicha secuencia molde de referencia de NG por todo lo largo de dicha secuencia molde de referencia, o vi. una variante conservativa de dicho fragmento, cuya secuencia tiene al menos un 90% de identidad con un fragmento de v. por todo lo largo de dicho fragmento de v., compartiendo dichas secuencias molde de referencia de CT, MG y NG la característica técnica especial de ser secuencias molde de referencia que son adecuadas para la construcción y producción de cebadores dirigidos a CT, MG y NG, así como de sondas específicas para CT, MG y NG, que se pueden usar conjuntamente en modo múltiple en el mismo tubo para detectar específicamente CT y/o MG y/o NG, ventajosamente CT y MG y NG, en tiempo real en dicho mismo tubo.

CAMPO TÉCNICO

El presente invento se refiere a la detección de tres especies bacterianas diferentes que son responsables de enfermedades de transmisión sexual, es decir, Chlamydia trachomatis (CT), Neisseria gonorrhoeae (NG) y Mycoplasma genitalium (MG).

Más particularmente, el presente invento se refiere a la detección de estas tres especies en una PCR en tiempo real, en una PCR múltiple o en una PCR múltiple en tiempo real.

FUNDAMENTO DEL INVENTO

La Chlamydia trachomatis (CT) es una especie de las clamidias, un grupo de bacterias forzosamente intracelulares. Causa enfermedades de transmisión sexual, tales como la clamidiasis y el linfogranuloma venéreo, así como el tracoma, una infección ocular que es causa frecuente de ceguera.

La Neisseria gonorrhoeae (NG) es una especie de bacteria Gram negativa, responsable de la gonorrea.

Son frecuentes las infecciones conjuntas por CT y NG.

El Mycoplasma genitalium (MG) es una bacteria parásita que vive en los tractos genital y respiratorio de los primates. Se piensa que el MG está implicado en la uretritis.

El diagnóstico tradicional de la presencia de CT y/o MG y/o NG implica el cultivo de muestras recogidas de los pacientes, tal como una muestra uretral, en medios de cultivo específicos para las especies. Dichos cultivos llevan mucho tiempo y son delicados. En el caso de CT, MG y NG, son los que llevan más tiempo y los más delicados porque el cultivo de CT y MG requiere un alto nivel de tecnicidad y porque NG es muy sensible a variaciones de temperatura y humedad.

Por lo tanto, se han desarrollado métodos diagnósticos basados en la multiplicación de ácido nucleico.

Por ejemplo, el kit Amplicor™ asequible de Roche Diagnostic, aprobado por la FDA, permite la detección de CT o NG. Sin embargo, no es capaz de detectar MG.

En el Documento WO 98/11259, a nombre de Visible Genetics Inc., se describe un método para la multiplicación y detección conjuntas de CT, MG y NG. Este método implica la multiplicación de dianas de CT, MG y NG por cebadores de multiplicación. La detección de los amplicones producidos por dichos cebadores es llevada a cabo por marcación directa de los cebadores o por técnicas en gel de agarosa. Sin embargo, el método del Documento WO 98/11259 no implica el uso de sondas que se hibridan con amplicones (véanse las páginas 9-10 del Documento WO 98/11259). Por consiguiente, el método del Documento WO 98/11259 no es una técnica en tiempo real.

El presente invento permite la detección de CT, MG y NG en una multiplicación en tiempo real y proporciona cebadores así como sondas, preferiblemente sondas baliza ("beacon"), que se pueden utilizar conjuntamente en modo múltiple en el mismo tubo para detectar las tres especies bacterianas en una multiplicación en tiempo real.

Así, como característica ventajosa, el invento puede ser implementado en una PCR en tiempo real, en una PCR múltiple o en una PCR múltiple en tiempo real.

SUMARIO DEL INVENTO

El invento se refiere a la detección de tres especies bacterianas diferentes que son responsables de enfermedades de transmisión sexual, es decir, Chlamydia trachomatis (CT), Neisseria gonorrhoeae (NG) y Mycoplasma genitalium (MG).

Más particularmente, el invento se refiere a la detección de estas tres especies en una PCR en tiempo real, en una PCR múltiple o en una PCR múltiple en tiempo real.

La solicitud proporciona secuencias de moldes de referencia, que están especialmente adaptadas al diseño de cebadores y sondas, que se pueden utilizar conjuntamente en el mismo tubo para detectar CT y/o MG y/o NG, ventajosamente CT y MG y NG, mediante una multiplicación múltiple en tiempo real, y el invento proporciona un método para la producción de dichos cebadores y sondas a partir de dichas secuencias molde de referencia.

El invento también se refiere a estos cebadores y sondas, así como a composiciones farmacéuticas, a composiciones biológicas, a kits de detección y a kits diagnósticos, que comprenden al menos uno de los cebadores y/o sondas del invento.

**(Ver fórmula)**

En la Tabla 1, que está al final del Ejemplo 1 posterior, se enumeran secuencias ID. SEC. que son representativas de dichos polinucleótidos molde de referencia y de cebadores y sondas del invento.

El invento se refiere además a un procedimiento para la detección de CT, MG y NG, que implica el uso de al menos una pareja de cebadores y/o al menos una sonda del invento, así como a composiciones de multiplicación.

En opinión de los inventores, el invento proporciona la primera descripción de una detección de CT y MG y NG en una multiplicación múltiple en tiempo real.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

La Figura 1 muestra la secuencia, que está disponible bajo el número de acceso J03321 (ID. SEC. nº 1), que es la secuencia del plásmido pCHL1 de CT.

La Figura 2 muestra la secuencia, que está disponible bajo el número de acceso X91704 (ID. SEC. nº 2), que es la secuencia de la región 5' del gen de la adhesina de MG.

La Figura 3 muestra la secuencia, que está disponible bajo el número de acceso M31431 (ID. SEC. nº 3), que es la secuencia del gen de la adhesina de MG.

La Figura 4 muestra la secuencia, que está disponible bajo el número de acceso AF042097 (ID. SEC. nº 4), que es la secuencia del gen pilE de NG.

DESCRIPCIÓN DETALLADA

El invento se refiere a la detección de tres especies bacterianas de transmisión sexual; a saber: Chlamydia trachomatis (CT), Mycoplasma genitalium (MG) y Neisseria gonorrhoeae (NG).

La solicitud proporciona secuencias molde de referencia de ácido nucleico que permiten la construcción y producción de cebadores y sondas que son adecuados para la detección de CT y/o MG y/o NG en una multiplicación múltiple en tiempo real.

De esta manera, el invento proporciona cebadores de CT, pares de cebadores de CT, sondas de CT, cebadores de MG, pares de cebadores de MG, sondas de MG, cebadores de NG, pares de cebadores de NG y sondas de NG, que son adecuados para la detección de CT y/o MG y/o NG en una multiplicación múltiple en tiempo real.

Los cebadores del invento pueden ser mezclados conjuntamente en modo múltiple en el mismo tubo para multiplicar CT y MG y NG en dicho mismo tubo.

Ventajosamente, el invento proporciona sondas que son adecuadas para la detección en tiempo real en dichas condiciones operativas múltiples.

Por consiguiente, los cebadores y sondas del invento se pueden mezclar conjuntamente en modo múltiple en el mismo tubo para multiplicar y detectar CT y MG y NG en tiempo real en dicho mismo tubo.

Por consiguiente, el invento permite la detección de CT y MG y NG en una sola etapa operativa (multiplicación + detección).

En opinión de los inventores, el invento es la primera descripción de una detección múltiple en tiempo real de las tres especies bacterianas (CT, MG, NG).

Además de detectar las tres especies bacterianas en la misma muestra, el invento presenta la ventaja de permitir comprobar la ausencia de inhibidores de Taq polimerasa mediante el uso de un Testigo Interno (IC; del inglés, Internal Control). Más adelante se describen con mayor detalle IC así como cebadores y sondas de IC.

Por lo tanto, el invento permite una multiplicación cuádruple (CT, MG, NG e IC).

El invento proporciona una detección de dichas tres especies bacterianas que es mucho más rápida que la de cualquier técnica del campo técnico previo, así como muy fiable ya que reduce en gran medida el riesgo de que haya muestras o cultivos contaminados para análisis.

Los medios del invento son además muy sensibles y reproducibles (véase más adelante el Ejemplo 4).

En la actualidad, no hay una detección sistémica de MG, mientras que se reconoce ahora que el MG es responsable de la uretritris no gonocócica y se asocia a menudo con cervicitis y endometritis.

El invento proporciona los primeros medios que permiten una detección sistémica de MG en un ensayo rutinario que permite la detección simultánea de CT y NG.

El invento permite por ello que el médico evite la prescripción de antibióticos inapropiados.

**(Ver fórmula)**

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1. Un procedimiento para la detección de Chlamydia trachomatis (CT) y/o Mycoplasma genitalium (MG) y/o Neisseria gonorrhoeae (NG) en una muestra, que es adecuado para dicha detección en una multiplicación múltiple en tiempo real,

en que dicha detección comprende la determinación de si se ha producido, o se produce, al menos un amplicón a partir de dicha muestra, o a partir de material de ácido nucleico de la misma, mediante multiplicación por medio de cebadores de multiplicación,

de modo que una determinación positiva indica que está(n) presente(s) al menos una CT y/o al menos un MG y/o al menos una NG en dicha muestra,

en que dichos cebadores de multiplicación comprenden:

– al menos dos cebadores que están destinados a dirigirse a CT y que son adecuados para la detección de CT en una multiplicación múltiple en tiempo real,

en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a CT son oligonucleótidos que consisten en 14-30 nucleótidos, cuyas secuencias son adecuadas para uso como cebadores directo e inverso, respectivamente, en la multiplicación de al menos una secuencia molde de referencia de CT, en que dicha al menos una secuencia molde de referencia de CT es un fragmento que consiste en las posiciones 5571-5760 (ID. SEC. nº 5) de la secuencia de CT de ID. SEC. nº 1, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a CT que permiten una detección múltiple de CT en tiempo real,

y

– al menos dos cebadores que están destinados a dirigirse a MG y que son adecuados para la detección de MG en una multiplicación múltiple en tiempo real,

en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son oligonucleótidos que consisten en 14-30 nucleótidos, cuyas secuencias son adecuadas para uso como cebadores directo e inverso, respectivamente, en la multiplicación de al menos una secuencia molde de referencia de MG, en que dicha al menos una secuencia molde de referencia de MG es un fragmento que consiste en:

– las posiciones 1-270 (ID. SEC. nº 13) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 2, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real,

– las posiciones 1140-1290 (ID. SEC. nº 19) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real,

– las posiciones 1060-1250 (ID. SEC. nº 25) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real,

– las posiciones 1520-1710 (ID. SEC. nº 31) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real,

– las posiciones 1500-1710 (ID. SEC. nº 37) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real,

y

– al menos dos cebadores que están destinados a dirigirse a NG y que son adecuados para la detección de NG en una multiplicación múltiple en tiempo real,

en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a NG son oligonucleótidos que consisten en 14-30 nucleótidos, cuyas secuencias son adecuadas para uso como cebadores directo e inverso, respectivamente, en la multiplicación de al menos una secuencia molde de referencia de NG, en que dicha al menos una secuencia molde de referencia de NG es un fragmento que consiste en las posiciones 101-380 (ID. SEC. nº 42) de la secuencia de NG de ID. SEC. nº 4 , o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a NG que permiten una detección múltiple de NG en tiempo real,

**(Ver fórmula)**

en que dicha determinación de si se ha producido, o se produce, al menos un amplicón es llevada a cabo por medio de al menos una sonda que está destinada a hibridarse con dicho al menos un amplicón, y en que dicha al menos una sonda comprende:

– al menos una sonda específica para CT, que es adecuada para la detección de CT en una multiplicación múltiple en tiempo real, en que dicha al menos una sonda específica para CT es:

i. un fragmento de al menos 15 nucleótidos de dicha secuencia molde de referencia de CT, o un fragmento de al menos 15 nucleótidos de la secuencia que es totalmente complementaria de dicha secuencia molde de referencia de CT por todo lo largo de dicha secuencia molde de referencia, o

ii. una variante conservativa de dicho fragmento, cuya secuencia tiene al menos un 90% de identidad con un fragmento de i. por todo lo largo de dicho fragmento de i.,

y

– al menos una sonda específica para MG, que es adecuada para la detección de MG en una multiplicación múltiple en tiempo real, en que dicha al menos una sonda específica para MG es:

iii. un fragmento de al menos 15 nucleótidos de dicha secuencia molde de referencia de MG, o un fragmento de al menos 15 nucleótidos de la secuencia que es totalmente complementaria de dicha secuencia molde de referencia de MG por todo lo largo de dicha secuencia molde de referencia, o

iv. una variante conservativa de dicho fragmento, cuya secuencia tiene al menos un 90% de identidad con un fragmento de iii. por todo lo largo de dicho fragmento de iii.,

y

– al menos una sonda específica para NG, que es adecuada para la detección de NG en una multiplicación múltiple en tiempo real, en que dicha al menos una sonda específica para NG es:

v. un fragmento de al menos 15 nucleótidos de dicha secuencia molde de referencia de NG, o un fragmento de al menos 15 nucleótidos de la secuencia que es totalmente complementaria de dicha secuencia molde de referencia de NG por todo lo largo de dicha secuencia molde de referencia, o

vi. una variante conservativa de dicho fragmento, cuya secuencia tiene al menos un 90% de identidad con un fragmento de v. por todo lo largo de dicho fragmento de v.,

compartiendo dichas secuencias molde de referencia de CT, MG y NG la característica técnica especial de ser secuencias molde de referencia que son adecuadas para la construcción y producción de cebadores dirigidos a CT, MG y NG, así como de sondas específicas para CT, MG y NG, que se pueden usar conjuntamente en modo múltiple en el mismo tubo para detectar específicamente CT y/o MG y/o NG, ventajosamente CT y MG y NG, en tiempo real en dicho mismo tubo.

2. El procedimiento de detección de la Reivindicación 1, en que dicha al menos una secuencia molde de referencia de CT es el fragmento que consiste en las posiciones 5580-5754 (ID. SEC. nº 6) de la secuencia de CT de ID. SEC. nº 1.

3. El procedimiento de detección de la Reivindicación 1 ó 2, en que dicha al menos una secuencia molde de referencia de MG es

– el fragmento que consiste en las posiciones 2-259 (ID. SEC. nº 14) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 2, o

– el fragmento que consiste en las posiciones 1144-1283 (ID. SEC. nº 20) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o

– el fragmento que consiste en las posiciones 1064-1249 (ID. SEC. nº 26) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o

– el fragmento que consiste en las posiciones 1527-1704 (ID. SEC. nº 32) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o

– el fragmento que consiste en las posiciones 1501-1704 (ID. SEC. nº 38) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3,

**(Ver fórmula)**

compartiendo dichas secuencias molde de referencia de MG la característica técnica específica de ser referencias adecuadas para construir y producir cebadores dirigidos a MG, así como sondas específicas para MG, que se pueden utilizar conjuntamente en modo múltiple en el mismo tubo para detectar específicamente CT y/o MG y/o NG, ventajosamente CT y MG y NG, en tiempo real en dicho mismo tubo.

4. El procedimiento de detección de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que dicha al menos una secuencia molde de referencia de NG es el fragmento que consiste en las posiciones 114-365 (ID. SEC. nº 43) de la secuencia de NG de ID. SEC. nº 4.

5. El procedimiento de detección de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a CT son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 7 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 12.

6. El procedimiento de detección de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 15 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 18, o son al menos un oligonucleótido seleccionado del grupo que consiste en las ID. SEC. números 21, 27, 33 y 39, y al menos un oligonucleótido seleccionado del grupo que consiste en las ID. SEC. números 24, 30 y 36.

7. El procedimiento de detección de la Reivindicación 6, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 15 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 18.

8. El procedimiento de detección de la Reivindicación 6, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son al menos un oligonucleótido seleccionado del grupo que consiste en las ID. SEC. números 21 y 27 y al menos un oligonucleótido seleccionado del grupo que consiste en las ID. SEC. números 24, 30 y 36.

9. El procedimiento de detección de la Reivindicación 8, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 21 y al menos un oligonucleótido seleccionado del grupo que consiste en las ID. SEC. números 24 y 36.

10. El procedimiento de detección de la Reivindicación 9, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 21 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 24.

11. El procedimiento de detección de la Reivindicación 8, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 27 y al menos un oligonucleótido seleccionado del grupo que consiste en las ID. SEC. números 24, 30 y 36.

12. El procedimiento de detección de la Reivindicación 11, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 27 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 30.

13. El procedimiento de detección de la Reivindicación 6, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 36 y al menos un oligonucleótido seleccionado del grupo que consiste en las ID. SEC. números 21, 27, 33 y 39.

14. El procedimiento de detección de la Reivindicación 13, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 33 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 36.

15. El procedimiento de detección de la Reivindicación 13, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 39 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 36.

16. El procedimiento de detección de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a NG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 44 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 47.

17. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 1-16, en que dicha al menos una sonda específica para CT es de ID. SEC. nº 8 ó 10, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC., estando dicha sonda opcionalmente enlazada con al menos una etiqueta de detección y/o al menos un brazo nucleotídico que no está relacionado con CT, MG ni NG y que está destinado a portar un agente sofocador o un agente informador.

18. El procedimiento de detección de la Reivindicación 17, en que dicha al menos una sonda está enlazada con al menos un brazo de baliza.

19. El procedimiento de detección de la Reivindicación 18, en que dicha al menos una sonda específica para CT es de ID. SEC. nº 9 u 11, o la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

20. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 17-19, en que dichos al menos dos cebado-res dirigidos a CT son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 7 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 12, y dicha al menos una sonda específica para CT es seleccionada del grupo que consiste en las ID. SEC. números 8, 9, 10 y 11.

21. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 1-20, en que dicha al menos una sonda

específica para MG es seleccionada del grupo que consiste en las ID. SEC. números 16, 22, 28, 34 y 40, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC., estando dicha sonda opcionalmente enlazada con al menos una etiqueta de detección y/o al menos un brazo nucleotídico que no está relacionado con CT, MG ni NG y que está destinado a portar un agente sofocador o un agente informador.

22. El procedimiento de detección de la Reivindicación 21, en que dicha al menos una sonda tiene al menos un brazo de baliza.

23. El procedimiento de detección de la Reivindicación 22, en que dicha al menos una sonda específica para MG es seleccionada del grupo que consiste en las ID. SEC. números 17, 23, 29, 35 y 41, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

24. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 21-23, en que dichos al menos dos cebado-res dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 15 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 18, y en que dicha al menos una sonda específica para MG es de ID. SEC. nº 16 ó 17, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

25. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 21-23, en que dichos al menos dos cebado-res dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 21 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 24, y en que dicha al menos una sonda específica para MG es de ID. SEC. nº 22 ó 23, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

26. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 21-23, en que dichos al menos dos cebado-res dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 27 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 30, y en que dicha al menos una sonda específica para MG es de ID. SEC. nº 28 ó 29, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

27. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 21-23, en que dichos al menos dos cebado-res dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 33 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 36, y en que dicha al menos una sonda específica para MG es de ID. SEC. nº 34 ó 35, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

28. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 21-23, en que dichos al menos dos cebado-res dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 39 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 36, y en que dicha al menos una sonda específica para MG es de ID. SEC. nº 40 ó 41, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

29. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 1-28, en que dicha al menos una sonda específica para NG es de ID. SEC. nº 45, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC., estando dicha sonda opcionalmente enlazada con al menos una etiqueta de detección y/o al menos un brazo nucleotídico que no está relacionado con CT, MG ni NG y que está destinado a portar un agente sofocador o un agente informador.

30. El procedimiento de detección de la Reivindicación 29, en que dicha al menos una sonda tiene al menos un brazo de baliza.

31. El procedimiento de detección de la Reivindicación 30, en que dicha al menos una sonda específica para NG es de ID. SEC. nº 46, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

32. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 29-31, en que dichos al menos dos cebado-res dirigidos a NG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 44 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 47, y en que dicha al menos una sonda específica para NG es de ID. SEC. nº 45 ó 46, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

33. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 1-32, en que:

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a CT son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 7 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 12, y

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 15 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 18, o un oligonucleótido de ID. SEC. nº 21 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 24, o un oligonucleótido de ID. SEC. nº 27 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 30, o un oligonucleótido de ID. SEC. nº 33 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 36, o un oligonucleótido de ID. SEC. nº 39 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 36, y

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a NG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 44 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 47.

34. El procedimiento de detección de cualquiera de las Reivindicaciones 1-33, en que:

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a CT son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 7 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 12, y dicha al menos una sonda específica para CT es de ID. SEC. nº 8, 9, 10 u 11, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC., y

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a NG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 44 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 47, y dicha al menos una sonda específica para NG es de ID. SEC. nº 45 ó 46, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC., y

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG y dicha al menos una sonda específica para MG son los siguientes:

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 15 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 18, y dicha al menos una sonda específica para MG es de ID. SEC. nº 16 ó 17, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC., o

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 21 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 24, y dicha al menos una sonda específica para MG es de ID. SEC. nº 22 ó 23, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC., o

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 27 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 30, y dicha al menos una sonda específica para MG es de ID. SEC. nº 28 ó 29, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC., o

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 33 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 36, y dicha al menos una sonda específica para MG es de ID. SEC. nº 34 ó 35, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC., o

– dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG son un oligonucleótido de ID. SEC. nº 39 y un oligonucleótido de ID. SEC. nº 36, y dicha al menos una sonda específica para MG es de ID. SEC. nº 40 ó 41, o es la secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

35. El procedimiento de detección de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que dichos al menos dos cebadores dirigidos a CT y/o dichos al menos dos cebadores dirigidos a MG y/o dichos al menos dos cebadores dirigidos a NG consisten en 17-25 nucleótidos.

36. El procedimiento de detección de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que dicha al menos una sonda específica para CT y/o dicha al menos una sonda específica para MG y/o dicha al menos una sonda específica para NG consiste(n) en 22-27 nucleótidos.

37. El procedimiento de detección de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además la multiplicación de un testigo interno (IC) cuya secuencia no está relacionada con CT, MG ni NG, tal como el IC de ID. SEC. nº 48.

38. El procedimiento de detección de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que es una multiplicación múltiple en tiempo real.

39. El procedimiento de detección de la Reivindicación 38, en que dicha multiplicación es una PCR.

40. Un método para la producción de cebadores y sondas que se pueden utilizar en el mismo tubo para la detección de CT y MG y NG en una multiplicación múltiple en tiempo real, que comprende producir al menos una pareja de cebadores y al menos una sonda,

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

en que un oligonucleótido de dicha pareja de cebadores es de 14-30 nucleótidos, cuya secuencia tiene una identidad de al menos 80% con la secuencia de la misma longitud que es el extremo terminal 5' exacto de una secuencia molde de referencia, y el otro oligonucleótido de dicha pareja de cebadores es de 14-30 nucleótidos, cuya secuencia tiene una identidad de al menos 80% con la secuencia de la misma longitud que es el extremo terminal 5' exacto de la secuencia que es totalmente complementaria de dicha secuencia molde de referencia por todo lo largo de dicha secuencia molde de referencia,

en que dicha sonda es: i. un fragmento de al menos 15 nucleótidos de dicha secuencia molde de referencia, o un fragmento de al menos 15 nucleótidos de la secuencia que es totalmente complementaria de dicha secuencia molde de referencia por todo lo largo de dicha secuencia molde de referencia, o

**(Ver fórmula)**

ii. una variante conservativa de un fragmento como el definido en i., teniendo la secuencia de dicha variante conservativa una identidad de al menos 90% con la secuencia de dicho fragmento de i. por todo lo largo de dicho fragmento de i.,

estando dicha sonda opcionalmente enlazada con al menos una etiqueta de detección y/o al menos un brazo de baliza,

en que dicha secuencia molde de referencia es:

– para el diseño de cebadores y sondas para CT: un fragmento que consiste en las posiciones 5571-5760 (ID. SEC. nº 5) de la secuencia de CT de ID. SEC. nº 1, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebado-res dirigidos a CT que permiten una detección múltiple de CT en tiempo real, o una secuencia que es totalmente complementaria de dicho fragmento o subfragmento por todo lo largo de dicho fragmento o subfragmento, en que dicho fragmento conservativo consiste en las posiciones 5580-5754 (ID. SEC. nº 6) de la secuencia de CT de ID. SEC. nº 1,

– para el diseño de cebadores y sondas para MG: un fragmento que consiste en:

– las posiciones 1-270 (ID. SEC. nº 13) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 2, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real, o una secuencia que es totalmente complementaria de dicho fragmento o subfragmento por todo lo largo de dicho fragmento o subfragmento, en que dicho fragmento conservativo consiste en las posiciones 2-259 (ID. SEC. nº 14) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 2,

– las posiciones 1140-1290 (ID. SEC. nº 19) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real, o una secuencia que es totalmente complementaria de dicho fragmento o subfragmento por todo lo largo de dicho fragmento o subfragmento, en que dicho fragmento conservativo consiste en las posiciones 1144-1283 (ID. SEC. nº 20) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3,

– las posiciones 1060-1250 (ID. SEC. nº 25) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real, o una secuencia que es totalmente complementaria de dicho fragmento o subfragmento por todo lo largo de dicho fragmento o subfragmento, en que dicho fragmento conservativo consiste en las posiciones 1064-1249 (ID. SEC. nº 26) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3,

– las posiciones 1520-1710 (ID. SEC. nº 31) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real, o una secuencia que es totalmente complementaria de dicho fragmento o subfragmento por todo lo largo de dicho fragmento o subfragmento, en que dicho fragmento conservativo consiste en las posiciones 1527-1704 (ID. SEC. nº 32) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3,

– las posiciones 1500-1710 (ID. SEC. nº 37) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebadores dirigidos a MG que permiten una detección múltiple de MG en tiempo real, o una secuencia que es totalmente complementaria de dicho fragmento o subfragmento por todo lo largo de dicho fragmento o subfragmento, en que dicho fragmento conservativo consiste en las posiciones 1501-1704 (ID. SEC. nº 38) de la secuencia de MG de ID. SEC. nº 3,

– para el diseño de cebadores y sondas para NG: un fragmento que consiste en las posiciones 101-380 (ID. SEC. nº 42) de la secuencia de NG de ID. SEC. nº 4, o de un subfragmento conservativo de la misma, que ha conservado la propiedad de ser una secuencia molde de referencia adecuada, para construir y producir cebado-res dirigidos a NG que permiten una detección múltiple de NG en tiempo real, o una secuencia que es totalmente complementaria de dicho fragmento o subfragmento por todo lo largo de dicho fragmento o subfragmento, en que dicho fragmento conservativo consiste en las posiciones 114-365 (ID. SEC. nº 43) de la secuencia de NG de ID. SEC. nº 4.

41. Un cebador, que está especialmente adaptado para la detección de CT y/o MG y/o NG en una multiplicación múltiple en tiempo real, que es:

**(Ver fórmula)**

un oligonucleótido de 14-30 nucleótidos, cuya secuencia tiene una identidad de al menos 80% con la secuencia de la misma longitud que es el extremo terminal 5' exacto de una secuencia molde de referencia o de la secuencia que es totalmente complementaria de dicha secuencia molde de referencia por todo lo largo de dicha secuencia molde de referencia,

en que dicha secuencia molde de referencia es:

– la ID. SEC. nº 6; o

– la ID. SEC. nº 14 o la ID. SEC. nº 20 o la ID. SEC. nº 26 o la ID. SEC. nº 32 o la ID. SEC. nº 38; o

– la ID. SEC. nº 43.

42. El cebador de la Reivindicación 41, que es:

– un cebador dirigido a CT, seleccionado del grupo que consiste en las ID. SEC. números 7 y 12, o

– un cebador dirigido a MG, seleccionado del grupo que consiste en las ID. SEC. números 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36 y 39, o

– un cebador dirigido a NG, seleccionado del grupo que consiste en las ID. SEC. números 44 y 47.

43. Un sistema de cebadores, que está especialmente adaptado para la detección de CT y/o MG y/o NG en una multiplicación múltiple en tiempo real, que comprende:

al menos una pareja de oligonucleótidos, cada uno de 14-30 nucleótidos,

teniendo la secuencia de un oligonucleótido de dicha pareja una identidad de al menos 80% con la secuencia de la misma longitud que es el extremo terminal 5' exacto de una secuencia molde de referencia, y

teniendo la secuencia del otro oligonucleótido de dicha pareja una identidad de al menos 80% con la secuencia de la misma longitud que es el extremo terminal 5' exacto de la secuencia que es totalmente complementaria de dicha secuencia molde de referencia por todo lo largo de dicha secuencia molde de referencia,

en que dicha secuencia molde de referencia es:

– la ID. SEC. nº 6; o

– la ID. SEC. nº 14 o la ID. SEC. nº 20 o la ID. SEC. nº 26 o la ID. SEC. nº 32 o la ID. SEC. nº 38; o

– la ID. SEC. nº 43.

44. El sistema de cebadores de la Reivindicación 43, que comprende:

– al menos una pareja de cebadores dirigidos a CT, de ID. SEC. nº 7 e ID. SEC. nº 12, y/o

– al menos una pareja de cebadores dirigidos a MG, seleccionada de entre las parejas siguientes: las ID. SEC. números 15 y 18; las ID. SEC. números 21 y 24; las ID. SEC. números 27 y 30; las ID. SEC. números 33 y 36; las ID. SEC. números 39 y 36, y/o

– al menos una pareja de cebadores dirigidos a NG, de ID. SEC. números 44 y 47.

45. El sistema de cebadores de la Reivindicación 43 ó 44, que comprende tres de dichas parejas de oligonucleótidos, y en que dicha secuencia molde de referencia es:

– para una de dichas tres parejas: la ID. SEC. nº 6;

– para otra de dichas tres parejas: la ID. SEC. nº 14 o la ID. SEC. nº 20 o la ID. SEC. nº 26 o la ID. SEC. nº 32 o la ID. SEC. nº 38;

– para la última de dichas tres parejas: la ID. SEC. nº 43.

46. Una sonda, que está especialmente adaptada para la detección de CT y/o MG y/o NG en una multiplicación múltiple en tiempo real, que es:

– una sonda específica para CT de ID. SEC. nº 8 ó 10, o que consiste en una secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.,

– una sonda específica para MG de ID. SEC. nº 16, 22, 28, 34 ó 40, o que consiste en una secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.,

– una sonda específica para NG de ID. SEC. nº 45, o que consiste en una secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.,

**(Ver fórmula)**

estando dicha sonda opcionalmente enlazada con al menos una etiqueta de detección y/o al menos un brazo de baliza.

47. La sonda de la Reivindicación 46, que es:

– una sonda específica para CT de ID. SEC. nº 9 u 11, o que consiste en una secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.,

– una sonda específica para MG de ID. SEC. nº 17, 23, 29, 35 ó 41, o que consiste en una secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.,

– una sonda específica para NG de ID. SEC. nº 45 ó 46, o que consiste en una secuencia que es totalmente complementaria de esta secuencia ID. SEC. por todo lo largo de esta secuencia ID. SEC.

48. Un sistema de cebadores y sondas, que está especialmente adaptado para la detección de CT y/o MG y/o NG en una multiplicación múltiple en tiempo real, que comprende al menos un sistema de cebadores de cualquiera de las Reivindicaciones 43-45 y al menos una sonda de cualquiera de las Reivindicaciones 46-47.

49. Una composición de multiplicación, que comprende al menos un amplicón obtenible por implementación del procedimiento de cualquiera de las Reivindicaciones 1-39 sobre una muestra que contiene CT y/o MG y/o NG, o por multiplicación de al menos un ácido nucleico procedente de una muestra que contiene CT y/o MG y/o NG por medio de al menos un sistema de cebadores de cualquiera de las Reivindicaciones 43-45, y

que comprende además:

– los cebadores dirigidos a CT como se definen en la Reivindicación 1 y los cebadores dirigidos a MG como se definen en la Reivindicación 1 y los cebadores dirigidos a NG como se definen en la Reivindicación 1; o

– el sistema de cebadores de la Reivindicación 45.

50. La composición de multiplicación de la Reivindicación 49, que comprende tres amplicones, en que dichos tres amplicones son obtenibles:

– por implementación del procedimiento de cualquiera de las Reivindicaciones 1-39 sobre una muestra que contiene CT y MG y NG, o

– por multiplicación de al menos un ácido nucleico de CT, y de al menos un ácido nucleico de MG y al menos un ácido nucleico de NG, por medio del sistema de cebadores de la Reivindicación 45.

51. Un kit para el diagnóstico de una infección por CT y/o MG y/o NG, que comprende:

– al menos un sistema de cebadores de cualquiera de las Reivindicaciones 43-45, y/o

– al menos una sonda de cualquiera de las Reivindicaciones 46-47, y, – opcionalmente, instrucciones para el uso de los mismos y/o nucleótidos.

52. El kit de la Reivindicación 50, que comprende además el oligonucleótido Testigo Interno (IC) de ID. SEC. nº 48, y/o la pareja de cebadores de IC de ID. SEC. números 49 y 52, y/o la sonda para IC de ID. SEC. nº 50, y/o la sonda para IC de ID. SEC. nº 51.