COMPOSICIONES OLIGONUCLEOTÍDICAS Y SU USO PARA INDUCIR LA DIFERENCIACIÓN DE CÉLULAS.

Uso de una secuencia nucleotídica de fosfodiés-ter sintética, químicamente no modificada, 3'-OH, 5'-OH SEC ID NO:

4, y un vehículo farmacéuticamente aceptable, para la preparación de un medicamento para inducir la diferen-ciación eritroide de células

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona composiciones que comprenden oligonucleótidos específicos combinados con un vehículo farmacéuticamente aceptable, en las que las compo-siciones son útiles para inducir la diferenciación de células, incluyendo células pluripotentes, células leucémicas, células de linfomas y células derivadas de la médula ósea, y para tratar enfermedades tales como leucemia, linfoma y trastornos asociados con diferenciación insuficiente de cé-lulas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Numerosas enfermedades y afecciones en animales y se-res humanos están asociadas con diferenciación insuficiente de células, o con una insuficiencia de células. Muchas de estas células derivan de la médula ósea. Tales enfermedades y afecciones incluyen, pero no se limitan a, leucemia, lin-foma, y trastornos sanguíneos no malignos tales como hemo-globinopatías, anemia drepanocítica, síndrome mielodisplá-sico e insuficiente producción de células derivadas de la médula ósea tras terapias tales como radiación y quimiote-rapia.

La terapia de diferenciación de células de leucemia en enfermedades tales como leucemia promielocítica aguda (APL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia promielocí-tica crónica (CPL) y leucemia mieloide crónica (CML) ha proporcionado una estrategia alternativa para el tratamien- to de leucemia. En la terapia de diferenciación, las células de leucemia inmaduras son inducidas mediante compuestos químicos diferentes para lograr un fenotipo maduro que da como resultado la detención de su crecimiento.

Se ha dado a conocer un número de compuestos de dife-renciación y también la radiación para inducir la diferen-ciación de células leucémicas. Se ha dado a conocer que la hemina, el ácido butírico, la 5-azacitidina, el arabinósido de citosina, la hidroxiurea, la guanosina, la guanina, el ácido retinoico, el trimidox, la radiación gamma, la mitra-micina y la cromomicina inducen la diferenciación de células de leucemia (Rutherford et al., Nature 280:164, 1979; Gambari et al., Biochem. Biophys. Acta, 886:203, 1986; Bi-anchi et al., Cancer Res. 46:6327, 1986; Adunyah et al., Biochem. Biophys. Acta, 1263:123, 1995; Osti et al., Haema-tologica 82:395, 1997; Cortesi et al., Eur. J. Haematol. 61:295, 1998; Iyamu et al., Biochem. Biophys. Res. Com. 247:759, 1998; Schwenke et al., Leuk. Res. 19:955, 1995; y Bianchi et al., Br. J. Haematol. 104:258, 1999).

Los oligonucleótidos sintéticos son secuencias polia-niónicas que se internalizan en células (Vlassov et al. Biochim. Biophys. Acta 1197:95, 1994). Se informa que los oligonucleótidos sintéticos se unen selectivamente a ácidos nucleicos (Wagner, R. Nature: 372:333, 1994), a proteínas celulares específicas (Bates et al. J. Biol. Chem. 274:26369, 1999) y a proteínas nucleares específicas (Scag-giante et al. Eur. J. Biochem. 252:207, 1998), e inhiben la proliferación de células cancerígenas. No se ha informado de que los oligonucleótidos sintéticos posean actividad di-ferenciadora sobre células de leucemia promielocítica aguda y/o crónica ni/o sobre células de leucemia mieloide. Se ha demostrado que los oligonucleótidos de fosforotioato sinté- ticos que tienen un motivo CpG (5'purina-purina-citosina (C)-guanina (G)-pirimidina-pirimidina3') inducen la proli-feración de leucemia linfocítica crónica de células B (Dec-ker et al., Blood 95:999, 2000). Se ha dado a conocer que secuencias sintéticas de 27 bases que contienen G y canti-dades variables de timina (T), en lo sucesivo oligonucleó-tido GTn, en el que n es  1 o  7 Ts (Scaggiante et al., Eur. J. Biochem. 252:207, 1998), y en el que el número de bases es >20 (Morassutti et al., Nucleosides and Nucleoti-des 18:1711, 1999), inhiben el crecimiento de células de leucemia mediante unión específica de la secuencia a una proteína nuclear de 45 kDa. Por el contrario, se da a cono-cer que las secuencias GTn, en las que el número total de bases es menor que 15, son inactivas frente a estas células (Morassutti et al. Nucleosides and Nucleotides 18:1711, 1999). Los oligonucleótidos de metilfosfonodiés-ter/fosfodiéster quiméricos de secuencia tipo CGNNN (N = A, C, G o T), introducidos en el citoplasma de células median-te 10 minutos de permeabilización reversible con estrepto-lisina O, inducen apoptosis de células de leucemia de células T humanas. No obstante, se da a conocer que los oligo-nucleótidos CGNNN son inactivos frente a tres estirpes ce-lulares de CML (K562, LAMA84 y KYO1), no mostrando ningún efecto significativo sobre el crecimiento y supervivencia de estas células (Tidd et al., Nucleic Acid Res. 28:2242, 2000).

El agotamiento de células derivadas de la médula ósea se observa en varias afecciones, incluyendo el agotamiento tras terapia de radiación o quimioterapia. La producción insuficiente de células destinadas a convertirse en eritro-citos o granulocitos está asociada con numerosos problemas, incluyendo, pero sin limitarse a, suministro reducido de oxígeno a las células, función inmunitaria reducida, y anormalidades en la coagulación. A menudo se requieren di-versas terapias, incluyendo quimioterapias caras, para es-timular la producción de glóbulos rojos y blancos.

La mayoría de las terapias de diferenciación de la técnica anterior han demostrado ser menos que adecuadas pa-ra aplicaciones clínicas. Muchas de estas terapias son in-eficaces o tóxicas, tienen efectos secundarios significati-vos, y son debilitantes para el receptor. Por lo tanto, existe una necesidad continua de nuevas composiciones y mé-todos que induzcan la diferenciación de células, tales como células de leucemia derivadas de mieloide. Lo que también se necesita son nuevas composiciones terapéuticas y métodos para estimular la producción y diferenciación de células pluripotentes tales como células derivadas de la médula ósea. También se necesitan nuevas composiciones terapéuti-cas que induzcan la diferenciación de células. Lo que tam-bién se necesita son composiciones y métodos que se pueden usar para tratar enfermedades y afecciones caracterizadas por una diferenciación insuficiente de células o una pro-ducción insuficiente de células derivadas de la médula ósea.

Los documentos WO 01/44465 y WO 02/18593 describen composiciones y métodos que comprenden oligonucleótidos sintéticos. Además, ambos documentos se refieren a la in-hibición de la proliferación celular.

El documento WO 01/47561 describe composiciones que comprenden ácido hialurónico y oligonucleótidos sintéticos.

El documento WO 03/016567 se refiere a la evaluación realizada por ordenador de moléculas en busca de la activi-dad biológica proporcionando un método a base de ordenador para predecir si los oligonucleótidos pueden poseer activi-dad biológica.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se define mediante las reivindicaciones anejas.

La descripción hace referencia a estas necesidades proporcionando un método que comprende administrar una com-posición que comprende una secuencia oligonucleotídica de fosfodiéster sintética (en lo sucesivo secuencia), química-mente no modificada, 3'-OH, 5'-OH, seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NO: 1 (5'GTG3'), SEC ID NO: 2 (5'GGGTGG3'), SEC ID NO: 3 (5'GGGAGG3') y SEC ID NO: 4 (5'CCACCC3'), y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que la composición induce la diferenciación de células. La descripción hace referencia a un método para tratar en-fermedades asociadas con el crecimiento de células que no se diferencian en un fenotipo maduro. La diferenciación terminal de células puede incluir una o más respuestas se-leccionadas del grupo que consiste en inducción de fenotipo similar a eritrocitos, fenotipo similar a monocitos, feno-tipo similar a megacariocitos, inhibición de proliferación de células de leucemia, e inducción de síntesis de hemoglo-bina.

Las composiciones que se describen se pueden usar pa-ra tratar enfermedades relacionadas con la diferenciación insuficiente de células. Tales enfermedades incluyen, pero no se limitan a, leucemia, linfoma, y trastornos sanguíneos no malignos tales como hemoglobinopatías, asma drepanocíti-ca o síndrome mielodisplásico. Se cree que las composicio-nes que se describen son útiles para el tratamiento de pan- citopenia, anemia, trombocitopenia y leucopenia. Otras afecciones que se pueden tratar con las composiciones des-critas incluyen linfoma y trastornos sanguíneos...

1. Uso de una secuencia nucleotídica de fosfodiés-ter sintética, químicamente no modificada, 3'-OH, 5'-OH SEC ID NO: 4, y un vehículo farmacéuticamente aceptable, para la preparación de un medicamento para inducir la diferen-ciación eritroide de células.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que el me-dicamento es para tratar anemia.

3. El uso de la reivindicación 1, en el que la in-ducción de la diferenciación eritroide es inducción de fe-notipo similar a eritrocito, o inducción de síntesis de hemoglobina en células.

4. Uso de una secuencia nucleotídica de fosfodiés-ter sintética, químicamente no modificada, 3'-OH, 5'-OH, seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 2 y SEC ID NO: 3, y un vehículo farmacéuticamente acep-table, para la preparación de un medicamento para incremen-tar la diferenciación de células pluripotentes.

5. El uso de la reivindicación 4, en el que las células pluripotentes derivan de médula ósea, hígado, bazo, ganglios linfáticos, timo o sangre de cordón umbilical.

6. El uso de la reivindicación 4, en el que el me-dicamento se administrará después de quimioterapia o radio-terapia.

7. Uso de una secuencia nucleotídica de fosfodiés-ter sintética, químicamente no modificada, 3'-OH, 5'-OH, seleccionada del grupo que consiste en SEC ID NO: 1, SEC ID NO: 2 y SEC ID NO: 3, y un vehículo farmacéuticamente acep-table, para la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad que se selecciona del grupo que consiste en un trastorno sanguíneo no maligno, hemoglobinopatía, asma drepanocítica, síndrome mielodisplásico, pancitopenia, ane-mia, trombocitopenia o leucopenia.