Uso de una secuencia de oligonucleótido-fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada del grupo constituido por SEQ ID NO:

1 a SEQ ID NO: 18 y un anticuerpo anti-Fas para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad seleccionada de una enfermedad neoplástica, una enfermedad autoinmune, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad proliferativa, una enfermedad linfoproliferativa, una enfermedad degenerativa, una enfermedad neurodegenerativa, una enfermedad cardiovascular, un rechazo de injerto o una infección, en el cual el anticuerpo anti-Fas tiene por objeto administración en una dosis de 0, 003 a 3 mg/kg, y en donde la secuencia de oligonucleótido modula la eficacia del anticuerpo anti-Fas.

Modulación de la expresión de Fas y FasL por un oligonucleótido-fosfodiéster sintético y un anticuerpo anti-Fas.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a composiciones útiles para modular la expresión de Fas y del ligando de Fas en las células y para modular la eficacia de agentes terapéuticos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

WO 01/44465 describe oligonucleótidos sintéticos terapéuticamente útiles así como el uso de los mismos, inter alia, para el tratamiento del cáncer.

El sistema Fas (Apo-1, CD95) y ligando Fas (FasL, CD95L) es uno de los sistemas de muerte celular mejor estudiados. Fas es una proteína de membrana tipo I expresada abundantemente por las células en diversos tejidos y particularmente en células T activadas, células cardiacas, células del riñón y hepatocitos. FasL es una proteína transmembranal tipo II expresada particularmente en células T activadas y células agresoras naturales (Nagata, S. Ann. Rev. Genet. 33:29, 1999) , y se expresa constitutivamente en sitios inmuno-privilegiados como, por ejemplo, el ojo y el testículo (Griffith et al. Science 270:630, 1995) .

Las interacciones de Fas y FasL (Fas/FasL) juegan un papel esencial en la regulación de las células inmunes y en la eliminación de células autorreactivas (Sabelko-Downes et al. Curr. Opin. Immunol. 12:330, 2000) . Adicionalmente, Fas/FasL media la muerte de células de cáncer y células infectadas por virus (Famularo et al. Med. Hypoth. 53:50, 1999; Owen-Schaub et al. Int. J. Oncol. 17:5, 2000) . En contraste, FasL expresada en células de cáncer, puede atacar las células del sistema inmunitario (O'Connell, J. Exp. Med. 184:1075, 1996) o facilitar la invasión de tumores locales por destrucción del tejido circundante (Yoong et al. Am. J. Pathol. 154:693, 1999) . FasL, expresada en células T activadas, puede participar también en el deterioro de los tejidos en la hepatitis fulminante y en la enfermedad de rechazo inverso (Kondo et al. Nature Med. 3:409, 1997; Braun et al. J. Exp. Med. 183:657, 1996) .

La fijación de FasL a Fas, o reticulación de Fas con anticuerpos agonistas, induce apoptosis (Nagata, S. Ann. Rev. Genet. 33:29, 1999) que da como resultado la muerte celular. La apoptosis es un proceso de muerte celular activo caracterizado por cambios morfológicos distintivos que incluyen condensación de la cromatina nuclear, contracción de las células, desintegración nuclear, formación de vesículas en la membrana plasmática, y formación de cuerpos apoptóticos fijados a la membrana (Wyllie et al. Int. Rev. Cytol. 68:251, 1980) . Un sello molecular de la apoptosis es la degradación del DNA celular nuclear en fragmentos de longitud oligonucleosómica como resultado de la activación de endonucleasas endógenas (Wyllie A. Nature 284:555, 1980) . Las caspasas (proteasas específicas cisteínaaspartilo) han sido implicadas como enzimas clave en la ejecución de la última etapa de la apoptosis. La fijación de FasL a Fas activa una cascada de caspasas por la vía de un adaptador FADD (proteína asociada a Fas con dominio de muerte) , que conduce a la escisión de diversos sustratos celulares y a fragmentación del DNA (Nagata, S. Ann. Rev. Genet. 33:29, 1999) .

Los oligonucleótidos sintéticos son secuencias polianiónicas que pueden ser internalizadas por las células (Vlassov et al. Biochim. Biophys. Acta 1197:95, 1994) y se fijan selectivamente a los ácidos nucleicos (Wagner, R. Nature: 372:333, 1994) , a proteína celulares específicas (Bates et al. J. Biol. Chem. 274:26369, 1999) y a proteínas nucleares específicas (Scaggiante et al. Eur. J. Biochem. 252:207, 1998) , e inhiben la proliferación celular. La proliferación es la culminación de la progresión de una célula a lo largo del ciclo celular, dando como resultado la división de una célula en dos células. Las alteraciones en la progresión del ciclo celular ocurren en todos los cánceres y pueden ser resultado de la sobre-expresión de genes, mutación de genes reguladores, o anulación de los puntos de comprobación del deterioro del DNA (Hochhauser D. Anti-Cancer Chemotherapeutic Agens 8:903, 1997) .

Se ha comunicado que oligonucleótidos sintéticos de fosforotioato que contienen dinucleótidos CpG no metilados flanqueados por dos 5' purina y dos 3' pirimidina (motivos CpG) inducen la síntesis de citoquinas por macrófagos y células B, para aumentar la actividad de las células NK y los linfocitos T citotóxicos, y mejorar T-Natl. Acad. Sci. USA 93:2879, 1996; Lipford et al. Eur. J. Immunol. 27:2340, 1997) . Se ha informado que un motivo sintético CpG de 20 bases bloquea la expresión de Fas en células B activadas y bloquea la apoptosis inducida por anticuerpos monoclonales anti-Fas (Wang et al. Cell. Immunol. 180:162, 1997) . Se ha informado que la irradiación regula en sentido creciente la expresión de Fas en células de cáncer (Sheard et al. Int. J. Cancer 73:757, 1997; Nishioka et al. Int. J. Mol. Med. 3:275, 1999) .

La capacidad para modular el sistema Fas/FasL tiene muchas aplicaciones clínicas para uso en enfermedades que incluyen, pero sin carácter limitante, enfermedades neoplásticas autoinmunes, degenerativas y cardiovasculares. Sin embargo, la mayoría de los agentes moduladores Fas/FasL de la técnica anterior han resultado no ser adecuados en aplicaciones clínicas. Además, muchos de estos agentes son ineficientes, tóxicos o tienen efectos adversos importantes.

Por consiguiente, existe una necesidad continuada de nuevas composiciones y nuevos métodos que modulen la expresión de Fas y FasL en las células. Existe también necesidad de nuevas composiciones y métodos que modulen la eficacia de los agentes moduladores de Fas y FasL en la enfermedad. Existe también la necesidad de nuevas composiciones y métodos que modulen la expresión de Fas y FasL en las células a fin de tratar enfermedades en animales o humanos asociadas con la expresión alterada de Fas o FasL en las células.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere por tanto al uso de una secuencia de oligonucleótido-fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada del grupo constituido por SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 18 y un anticuerpo anti-Fas para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad seleccionada de una enfermedad neoplástica, una enfermedad autoinmune, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad proliferativa, una enfermedad linfoproliferativa, una enfermedad degenerativa, una enfermedad neurodegenerativa, una enfermedad cardiovascular, un rechazo de injerto o una infección, en el cual el anticuerpo anti-Fas tiene por objeto administración en una dosis de 0, 003 a 3 mg/kg, y en donde la secuencia de oligonucleótido modula la eficacia del anticuerpo anti-Fas.

La presente invención se refiere adicionalmente a una secuencia de oligonucleótido-fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada del grupo constituido por SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 18 y un anticuerpo anti-Fas para uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de una enfermedad neoplástica, una enfermedad autoinmune, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad proliferativa, una enfermedad linfoproliferativa, una enfermedad degenerativa, una enfermedad neurodegenerativa, una enfermedad cardiovascular, un rechazo de injerto o una infección, en el cual el anticuerpo anti-Fas se emplea en una dosis de 0, 003 a 3 mg/kg, y en donde la secuencia de oligonucleótido modula la eficacia del anticuerpo anti-Fas.

La presente invención satisface estas necesidades por proporcionar un nuevo uso que emplea composiciones que comprenden un oligodesoxinucleótido fosfodiéster sintético (en lo sucesivo, "secuencia") seleccionado del grupo constituido por (GG) n, (GT) n, a (GT) nb, a (GA) nb, y a (GC) nb, en donde n es un número entero entre 1 y 3, y a y b son independientemente nada o uno o más de As, Cs, Gs, o Ts, o combinaciones de los mismos, en donde el número total de bases en la composición está comprendido entre 2 y 10, preferiblemente 4 a 8, más preferiblemente 5 a 7, y muy preferiblemente 6, es decir composiciones que comprenden una secuencia de oligonucleótido-fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada del grupo constituido por SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 18.

La presente invención proporciona nuevos usos para estas composiciones.

Esta composición se combina también con un portador farmacéuticamente aceptable, y se administra a un animal o un humano que sufre una enfermedad en una cantidad eficaz para modular la expresión de Fas... [Seguir leyendo]

1. Uso de una secuencia de oligonucleótido-fosfodiéster sintético de 6 bases seleccionada del grupo constituido por SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 18 y un anticuerpo anti-Fas para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad seleccionada de una enfermedad neoplástica, una enfermedad autoinmune, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad proliferativa, una enfermedad linfoproliferativa, una enfermedad degenerativa, una enfermedad neurodegenerativa, una enfermedad cardiovascular, un rechazo de injerto o una infección, en el cual el anticuerpo anti-Fas tiene por objeto administración en una dosis de 0, 003 a 3 mg/kg, y en donde la secuencia de oligonucleótido modula la eficacia del anticuerpo anti-Fas.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el cual el anticuerpo anti-Fas es para administración en una dosis de 0, 01 a 0, 1 mg/kg.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

4. Uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el cual el cáncer se selecciona del grupo constituido por cáncer de ovario, próstata, mama, vejiga y leucemia.

5. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 de una secuencia de fosfodiésteroligonucleótido sintético de 6 bases seleccionada del grupo constituido por SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 y SEQ ID NO: 18 y un anticuerpo anti-Fas para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer.

6. Una secuencia sintética de fosfodiéster-oligonucleótido de 6 bases seleccionada del grupo constituido por SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 18 y un anticuerpo anti-Fas para uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de una enfermedad neoplástica, una enfermedad autoinmune, una enfermedad inflamatoria, una enfermedad proliferativa, una enfermedad linfoproliferativa, una enfermedad degenerativa, una enfermedad neurodegenerativa, una enfermedad cardiovascular, un rechazo de injerto o una infección, en el cual el anticuerpo anti-Fas se encuentra en una dosis de 0, 003 a 3 mg/kg, y en donde la secuencia de oligonucleótido modula la eficacia del anticuerpo anti-Fas.