COMPOSICIÓN PARA INMUNIZAR CONTRA MYCOBACTERIUM.

La presente invención hace referencia a una composición inmunogénica para su uso en la prevención de infección o enfermedad micobacteriana induciendo una respuesta inmune de células T de memoria central que persiste durante al menos un año. También se proporcionan vacunas vectorizadas que son capaces de inducir una respuesta inmune que persiste durante al menos un año.

Antecedentes para la Invención

La tuberculosis está causada por el patógeno respiratorio Mycobacterium tuberculosis y mata dos millones de personas cada año, predominantemente en el mundo en desarrollo (http://www.who.int/gtb/publications/globrep01/index.html). La vacuna autorizada sólo contra M. tuberculosis, bacilo Calmette-Guerin (BCG) (Calmette, A., C. Guerin. (1924) Ann. Inst. Pasteur. 38:371), es un una cepa atenuada de Mycobacterium bovis, que en los países en desarrollo se administra típicamente intradérmicamente como una dosis única para niños recién nacidos. La revisión de muchos estudios sugiere que la vacunación contra BCG es protectora contra tuberculosis meningíticas pediátricas y formas sistémicas de la enfermedad. Sin embargo, la eficacia protectora es variable (oscilando desde 0 hasta 80%) (Colditz, G. A. y cols. (1994). JAMA 271:698) contra enfermedad pulmonar de adultos, la causa global principal de mortalidad por tuberculosis y declina con el tiempo (Sterne, J. A. y cols. (1998) Int. J. Tuberc. Pulmón Dis. 2:200). Las bases de la variabilidad son inciertas. Aun así, el 80% de bebés por todo el mundo reciben BCG cada año (http: //www.who.int/inf-fs/en/fact 104.html).

Mycobacterium tuberculosis es un patógeno intracelular, la eficacia protectora contra el cual está asociada con el mantenimiento de una respuesta mediada por células contra una infección que implica tanto células T CD4+ como células T CD8+ y la capacidad para responder con citocinas de tipo ThI, particularmente IFN-γ (Flynn, J. L., J. Chan. (2001) Annu. Rev. Immunol. 19:93). La vacunación contra BCG induce células T secretoras de IFN-γ, predominantemente del fenotipo de las células T CD4+, que reaccionan de forma cruzada con proteínas de M. tuberculosis (Launois P y cols., (1994) Infection and Immunity 62 (9): 3679-87). Los estudios recientes sugieren que BCG administrado parenteralmente puede fallar para inducir respuestas inmunes a células T en la mucosa del pulmón, lo que puede ser crítico para la protección contra la enfermedad pulmonar.

Existe por lo tanto la necesidad de desarrollar vacunas adicionales contra enfermedad micobacteriana.

Sumario de la invención

Sorprendentemente, se ha encontrado ahora que los vectores víricos que expresan antígeno micobacteriano 85A (Ag85A) pueden inducir una respuesta inmune de células T de memoria central en un paciente humano cuando se administra como una composición inmunógena. Por lo tanto un primer aspecto de la invención proporciona una composición inmunogénica que comprende un vector de poxvirus no replicativo o con su capacidad para replicarse dañada que expresa el producto de traducción de un gen micobacteriano Ag85A para su uso en la prevención de infección micobacteriana o enfermedad micobacteriana induciendo una respuesta inmune de células T de memoria central en un paciente, en la que el vector viral expresa Ag85A con una marca en el extremo C-terminal de PK, una secuencia líder de TPA, y una truncación C-teminal de 10-20 aminoácidos y en la que dicha respuesta inmune persiste durante al menos un año. El primer aspecto de la presente invención también proporciona el uso de una composición inmunógena que comprende un vector de poxvirus no replicativo o con su capacidad para replicarse dañada que expresa el producto de traducción de un gen micobacteriano Ag85A en la elaboración de un medicamento para la prevención de una infección micobacteriana o enfermedad micobacteriana en un paciente induciendo una memoria central de células T de respuesta inmunitaria en el paciente, , en la que el vector viral expresa Ag85A con una marca en el extremo C-terminal de PK, una secuencia líder de TPA y una truncación Cteminal de 10-20 aminoácidos y en la que dicha respuesta inmune persiste durante al menos un año. Preferentemente, la composición inmunógena es una vacuna. Este enfoque de vacuna nuevo mejora significativamente la magnitud y la duración de la respuesta inmune de células T.

El antígeno 85A (Ag85A) (N.ºs de Acceso CAA17868 y BX842584) es un miembro del complejo Ag 85. Ésta es una familia de proteínas que comprende Ags 85A, 85B y 85C secretados porM. tuberculosis,BCG, y muchas otras especies de micobacterias (Harth, G. y cols., (1996) Infect. Immun. 64: 3038-3047). El antígeno 85A (Ag85A) está altamente conservado entre todas las especies micobacterianas y es inmunodominante en estudios de animales y de seres humanos. Ag 85A (Ag85A) está codificado por el genfbpA. El antígeno 85A (Ag85A)de Mycobacterium tuberculosis se enumera en SEC ID N.ºs 1 y 2 en el presente documento).

Estrategias recientes para inducir respuestas de células T potenciadas en investigación de la vacuna de la tuberculosis han aprovechado tecnología de ADN recombinante, utilizando vectores plasmídicos, bacterianos o víricos y proteínas recombinantes para expresar antígenos de M. tuberculosis. La vacunación de ratones con ADN de Ag85A reforzado con un vector de MVA que expresa Ag85A ha mostrado proporcionar un grado de protección equivalente a BCG tras puesta a prueba con M. tuberculosis (McShane, H. y cols., (2002). Infect. Immun. 70: 16231626). Sin embargo, las respuestas inmunitarias generadas por inmunización individual o repetida con el vector de MVA recombinante solo fueron débiles. Las vacunas dotadas de vectores que expresan el antígeno Ag85A han estado mostrando inducir respuestas inmunes a corto plazo (McShane, H. y cols. (2004) Nature Medicine, 10; 12401244 y Malin, A., y cols. (2000) Microbes and Infection, 2; 1677-1685).

Para la protección a largo plazo contra enfermedad micobacteriana tal como tuberculosis se considera importante mantener "células T de memoria", que pueden continuar estimulando inmunidad protectora por décadas.

Las respuestas inmunes de memoria se atribuyen de forma clásica a la reactivación de linfocitos T específicos de antígeno, de larga vida que surgen directamente de células T efectoras diferenciadas y persisten en un estado quiescente uniforme. Se piensa que las células T efectoras y de memoria están distribuidas por todos los tejidos del cuerpo, particularmente en las superficies epiteliales (tales como la piel y el intestino), donde es probable que se reencuentren los patógenos. Se ha encontrado que las células T de memoria son heterogéneas y que comprenden al menos dos subgrupos, dotados con diferente capacidad migratoria y función efectora (Reinhardt, R.L. y cols., (2001) Nature. 410, 101-105). Las células del primer subgrupo se asemejan a las células efectoras generadas en la respuesta principal porque ellas carecen de los receptores que los dirigen a regresar a los nódulos linfáticos Lselectina y CCR7 y porque expresan receptores para migración al interior de los tejidos inflamados. Tras en reencuentro con el antígeno, estas "células T de memoria efectoras" (TEM) pueden producir rápidamente IFN-γ o IL4 o liberar la perforina pre-almacenada. Las células del segundo subgrupo expresan L-selectina y CCR7 y carecen de función efectora inmediata. Estas "células T de memoria central" (TCM) tienen un umbral de activación bajo y después de reestimulación en los órganos linfoides secundarios, proliferan y se diferencian a efectoras (lezzi, G. y cols., (2001). J. Exp. Med. 193, 987-994).

Los inventores de la presente invención han encontrado que un vector viral dañado de replicación que expresa Ag 85 A (Ag85A) (en este caso, ejemplificado con "MVA85A") puede inducir niveles elevados de células T de memoria que segregan interferón-γ específicas de antígeno -tanto células T de memoria efectoras como células T de memoria centrales- cuando se usan solo en voluntarios sanos que no están inmunizados contra BCG.

Se han establecido durante los últimos 10 años nuevos ensayos inmunológicos para medir y cuantificar respuestas de células T. Los autores de la presente invención utilizaron el ensayo ELISPOT de interferón gamma (IFN-γ) como la principal lectura de salida inmunológica para ensayos clínicos con MVA85A, debido a que la secreción de IFN-γ desde las células T específicas de antígeno es el mejor correlato disponible de protección contraM. tuberculosis. Además, el ensayo ELISPOT es un procedimiento muy reproducible y sensible de cuantificar el número de células T específicas de antígeno... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunógena que comprende un vector de poxvirus no replicativo o dañado en la replicación que expresa el producto de traducción de un gen Ag85A micobacteriano para su uso en la prevención de la infección o enfermedad micobacteriana induciendo una respuesta inmune de células T de memoria central en un paciente, en la que un vector viral expresa Ag85A con una marca C-terminal de PK, una secuencia líder de TPA y una truncación C-terminal de 10-20 aminoácidos y en la que dicha respuesta inmune persiste durante al menos 1 año.

2. Uso de una composición inmunogénica que comprende un vector de poxvirus no replicativo o dañado en la replicación que expresa el producto de traducción de un gen Ag85A micobacteriano en la elaboración de un medicamento para la prevención de una infección o enfermedad micobacteriana en un paciente induciendo una respuesta inmune de células T de memoria central en el paciente, en la que el vector viral expresa Ag85A con una marca C-terminal de PK, una secuencia líder de TPA y una truncación C-terminal de 10-20 aminoácidos y en la que dicha respuesta inmune persiste durante al menos 1 año.

3. La composición o uso de cualquier reivindicación precedente en la que el vector viral no replicativo es MVA.

4. La composición o uso de cualquier reivindicación anterior en la que el vector viral expresa el producto de traducción de SEC ID N.º: 5.

5. La composición o uso de cualquier reivindicación anterior en la que la vector viral expresa adicionalmente el producto de traducción de al menos un gen(es) antigénico(s) adicional(es) de una especie micobacteriana.

6. La composición o uso de cualquier reivindicación anterior en la que la composición inmunógena es para administración con al menos un antígeno adicional y/o antimicrobiano.

7. La composición o uso de la reivindicación 5 en la que al menos un antígeno adicional y/o antimicrobiano es para administración simultáneamente, por separado o secuencialmente.

8. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el que el vector viral expresa adicionalmente el producto de traducción de al menos un gen antigénico adicional para la prevención de al menos una enfermedad adicional en un paciente.

9. La composición inmunógena de la reivindicación 1 o el uso de la reivindicación 2 en la que el medicamento es para ser administrado con al menos un antígeno adicional, adicionalmente para usar en el tratamiento o prevención de al menos una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en tuberculosis, lepra, infección con Mycobacterium avium, infección micobacteriana no tuberculótisca, úlcera de Buruli, infección o enfermedad con Mycobacterium bovis, viruela, viruela del mono, infección con Mycobacterium paratuberculosis, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfermedad autoimmune, cáncer y cáncer de vejiga.

10. La composición inmunógena o el uso de cualquier reivindicación precedente, en la que el paciente está seleccionado del grupo que consiste en niños, pacientes que tienen infección con VIH o SIDA, están inmunocomprometidos o han sufrido trasplantes de órganos.

11. El uso de composición inmunógena de cualquier reivindicación precedente, en el que el paciente ha estado expuesto previamente a micobacteria.

12. La composición inmunógena o el uso de la reivindicación 11 en el que el paciente ha estado previamente expuesto a M. tuberculosis.

13. La composición inmunógena o el uso de las reivindicaciones 11 ó 12, en el que el paciente está infectado de forma latente con la micobacteria.

14. La composición inmunógena o el uso de cualquier reivindicación precedente en el que el paciente ha sidopretratado con BCG.

15. Una vacuna vectorizada que comprende un vector de poxvirus no replicativo o dañado en la replicación que expresa el producto de traducción de la secuencia de nucleótidos de SEC ID N.º: 4 y que incluye adicionalmente una marca C-terminal de PK y una secuencia líder de TPA, en la que dicha vacuna vectorizada es capaz de inducir una respuesta inmune que persiste durante al menos un año.

16. La vacuna vectorizada de la reivindicación 15 en la que el vector vírico expresa el producto de traducción de la secuencia de nucleótidos de SEC ID N.º: 5.

17. La vacuna vectorizada de la reivindicación 15 o de la reivindicación 16, en la que el vector no replicativo viral es MVA.

18. La vacuna vectorizada de una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, en la que el vector viral expresa adicionalmente el producto de traducción de al menos un gen(es) antigénico(s) adicional(es) de una especie micobacteriana.