ARNSI ANTI-MIOSINA VA Y DESPIGMENTACIÓN DE LA PIEL.

ARNsi aislado que comprende una hebra de ARN sentido y una hebra de ARN antisentido complementaria que forman juntas un dúplex de ARN,

comprendiendo la hebra de ARN sentido una secuencia que contiene como máximo un nucleótido distinto con respecto a un fragmento de 14 a 30 nucleótidos contiguos de la secuencia nucleotídica del exón F del gen que codifica para la proteína miosina Va, caracterizado porque dicho fragmento de 14 a 30 nucleótidos contiguos de la secuencia nucleotídica del exón F del gen que codifica para la proteína miosina Va está constituido por una secuencia nucleotídica seleccionada de entre la SEC ID nº 2 y la SEC ID nº 3

ARNsi anti-miosina Va y despigmentación de la piel.

La presente invención se refiere a nuevos ARNsi aislados que comprenden una hebra de ARN sentido y una hebra de ARN antisentido complementario que forman juntas un dúplex de ARN, comprendiendo la hebra de ARN sentido una secuencia que contiene como máximo un nucleótido distinto con respecto a un fragmento de 14 a 30 nucleótidos contiguos de la secuencia nucleotídica del exón F del gen que codifica para la proteína miosina Va, caracterizado porque dicho fragmento de 14 a 30 nucleótidos contiguos de la secuencia nucleotídica del exón F del gen que codifica para la proteína miosina Va está constituido por una secuencia nucleotídica seleccionada de entre la SEC ID nº 2 y la SEC ID nº 3; así como a unas composiciones que comprenden por lo menos dicho ARNsi, y a la utilización de por lo menos dicho ARNsi como agente cosmético o terapéutico para la despigmentación de la piel.

La pigmentación de la piel es un proceso complejo que comprende numerosas etapas. Los melanocitos que están situados en la capa basal de la epidermis, pueden ser activados por unos estímulos internos o externos (por ejemplo, una exposición a los ultravioletas (UV)) para producir melanina en unos orgánulos especializados emparentados con los lisosomas denominados melanosomas. Después de la maduración, los melanosomas perinucleares son transportados a lo largo de los microtubos y del citoesqueleto de actina hasta la periferia de las dendritas de los melanocitos (Lambert J et al. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand): 45: 905-18, 1999; Hara M et al. J Invest Dermatol.: 114: 438-43, 2000; Vancoillie G et al. J Invest Dermatol.: 114: 421-9, 2000). Los melanosomas, que contienen la melanina, son transferidos a continua-ción a los queratinocitos adyacentes desde los extremos de las dendritas mediante un mecanismo todavía desconocido.

Cualquier alteración de una etapa de este proceso complejo puede conducir a unos trastornos de la pigmentación de la piel. En particular, un aumento del número de melanocitos activos, y/o un aumento de la producción de melanina, y/o un aumento de la transferencia de melanosomas de los melanocitos hacia los queratinocitos pueden conducir a una hiperpigmentación (o discromatosis) de la piel. Dicha hiperpigmentación puede ser inducida por numerosos factores, tales como los medicamentos, el Sol, unos disfuncionamientos metabólicos o nutricionales, o también por enfermedades genéticas o auto-inmunes. Esto implica generalmente unas consecuencias cosméticas y psicológicas importantes para el paciente, que en numerosos casos buscará un tratamiento adecuado.

Se han llevado a cabo numerosos esfuerzos por lo tanto para realizar unos tratamientos eficaces contra la hiperpigmentación. La mayoría de los tratamientos químicos que existen comprenden unos agentes despigmentantes que apuntan a la vía de síntesis de la melanina, en particular inhibiendo la actividad de la enzima tirosina que es necesaria para la síntesis de la melanina. Dichos agentes despigmentantes incluyen en particular la hidroquinona y sus derivados, el retinol o la tretinoina, el ácido ascórbico y sus derivados, unos extractos de placenta, el ácido kójico, el ácido ferúlico, la arbutina, unos derivados de dihidroxibenceno (WO 00/47045), unos derivados del guayacol (WO 00/47179), el 4-(2,3-dihidroxifenil)-ciclohexanol (WO 00/56279), unos derivados del resorcinol (WO 00/56702), o unas amidas fenólicas (WO 99/32077). Estas sustancias pueden adolecer de algunos inconvenientes. Pueden ser inestables, necesitar una utilización a concentraciones elevadas, carecer de especificidad en cuanto a su modo de acción, o presentar un poder citotóxico o irritante.

Se han realizado asimismo unos tratamientos de tipo físico, tales como la exfoliación de profundidad media, la dermoabrasión o la terapia láser. Sin embargo, estos tratamientos son generalmente menos eficaces y pueden causar unos efectos secundarios molestos tales como unos riesgos de hipo- o de hiperpigmentación posinflamatorias, una ocronosis, o una cicatrización que pueden provocar unos efectos carcinógenos (Briganti S et al. Pigment Cell Res.: 16: 101-10, 2003; Halder RM, Nootheti PK. J Am Acad Dermatol.: 48: S 143-48, 2003; Halder RM, Richards GM. Skin Therapy Lett.: 9: 1-3, 2004).

Existe por lo tanto una necesidad de realizar nuevos tratamientos cosméticos y/o terapéuticos de la hiperpigmentación que sean eficaces y seguros.

Además de los tratamientos químicos, otra posibilidad para obtener la inhibición de la expresión de un gen determinado consiste en utilizar unos ácidos nucleicos antisentido o en aprovechar un proceso denominado ARN de interferencia (Dykxhoorn DM et al. Nat Rev Mol Cell Biol.: 4: 457-67, 2003; Soutschek J et al. Nature: 432: 173-8, 2004).

El ARN de interferencia (denominado a continuación ARNi) es el proceso por el cual un ARN bicatenario (ARNds) de secuencia nucleica sentido determinada induce la degradación de todos los ARN mensajeros (ARNm) que comprenden dicha secuencia nucleica, de una manera específica de dicha secuencia nucleica. Aunque el proceso de ARNi haya sido inicialmente demostrado en Caenorhabditis elegans, está claro ahora que el proceso de ARNi es un fenómeno muy general, y que se ha obtenido la inhibición de la expresión de genes humanos por ARNi.

El proceso de ARNi se puede obtener utilizando pequeños ARN interferentes (o ARNsi). Estos ARNsi son unos ARNds de menos de 30 nucleótidos que comprenden en su secuencia sentido una secuencia plásmica altamente homóloga, preferentemente idéntica, a un fragmento del ARNm diana. Cuando un ARNsi atraviesa la membrana plásmica, la reacción de la célula es destruir el ARNsi así como todas las secuencias que comprenden una secuencia idéntica o altamente homóloga. Así, un ARNm que contiene un fragmento idéntico o altamente homólogo a la secuencia de ARNsi será destruido, siendo inhibida así la expresión de este gen.

Para el tratamiento de la hiperpigmentación, se ha propuesto en la técnica anterior utilizar unos oligonucleótidos antisentido dirigidos contra los genes de la tirosina o de la proteína TRP-1 (WO 01/58918) o contra el gen de la proteína PKC β1 que está implicada en el proceso de fosforilación de la tirosinasa (WO 2005/073243). Se ha propuesto asimismo utilizar unos ARNsi que apuntan al gen de la tirosinasa (WO 2005/060536).

Sin embargo, todos estos genes están implicados en la vía de síntesis de la melanina, y no se ha dado a conocer ni sugerido nunca ningún ARNsi que apunte a un gen implicado, no en la vía de síntesis de la melanina, sino en el transporte de los melanosomas en el seno de los melanocitos y su transferencia hacia los queratinocitos.

Se ha demostrado, en particular por los inventores, que la proteína miosina Va está implicada en el transporte de los melanosomas en el seno de los melanocitos (Lambert J et al. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand): 45: 905-18, 1999; Lambert et al. J Invest Dermatol.: 111: 835-40, 1998). Más precisamente, la proteína miosina Va contiene varias variantes de corte y empalme, y la variante que comprende el exón F es necesaria para el transporte de los melanosomas (Westbroek W et al. J Jnvest Dermatol.: 120: 465-75, 2003).

Alastair J. Edgar et al. (J Anat. agosto 1999; 195 (Pt 2):173-84) describen la utilización de oligonucleótidos antisentido dirigidos contra la proteína miosina Va de ratón con el fin de reducir su expresión, así como su influencia sobre la extensión de nuevas dendritas por los melanocitos. Los oligonucleótidos antisentido utilizados no están situados en el exón F de la proteína miosina Va de ratón.

Sin embargo hasta la actualidad, no se había realizado ninguna tentativa para inhibir la expresión de la variante de la proteína miosina Va que comprende el exón F utilizando unos ARNsi, ni para aplicar este enfoque al tratamiento cosmético o terapéutico de la hiperpigmentación.

Los inventores han descubierto que era posible sintetizar unos ARNsi que apuntan al exón F de la proteína miosina Va e inducir gracias a estos ARNsi un proceso de ARNi específico del exón F de la proteína miosina Va. Han demostrado asimismo que dichos ARNsi son eficaces para inhibir la expresión de la variante de la proteína miosina Va que comprende el exón F a unas concentraciones de ARNsi que no inducen ningún descenso de la viabilidad celular y que el efecto es dosis-dependiente. Además, los inventores han...

1. ARNsi aislado que comprende una hebra de ARN sentido y una hebra de ARN antisentido complementaria que forman juntas un dúplex de ARN, comprendiendo la hebra de ARN sentido una secuencia que contiene como máximo un nucleótido distinto con respecto a un fragmento de 14 a 30 nucleótidos contiguos de la secuencia nucleotídica del exón F del gen que codifica para la proteína miosina Va, caracterizado porque dicho fragmento de 14 a 30 nucleótidos contiguos de la secuencia nucleotídica del exón F del gen que codifica para la proteína miosina Va está constituido por una secuencia nucleotídica seleccionada de entre la SEC ID nº 2 y la SEC ID nº 3.

2. ARNsi según la reivindicación 1, caracterizado porque la hebra de ARN sentido comprende una secuencia idéntica a un fragmento de 14 a 30 nucleótidos contiguos de la secuencia nucleotídica del exón F del gen que codifica para la proteína miosina Va constituido por una secuencia nucleotídica seleccionada de entre la SEC ID nº 2 y la SEC ID nº 3.

3. ARNsi según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque dicho fragmento de 14 a 30 nucleótidos contiguos de la secuencia nucleotídica del exón F del gen que codifica para la proteína miosina Va está constituido por la secuencia nucleotídica SEC ID nº 3.

4. ARNsi según la reivindicación 3, caracterizado porque dicho ARNsi es un ARNsh constituido por una sola molécula de ARN monocatenario en la que dos porciones complementarias están apareadas mediante unos enlaces de tipo Watson-Crick y están unidas por un lado de manera covalente por una estructura de tipo horquilla, en el que dicho ARNsh comprende o está constituido por la secuencia SEC ID nº 17.

5. ARNsi según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque las hebras de ARN sentido y/o antisentido comprenden además un fragmento 3' en resalte de 2 a 4 nucleótidos naturales o modificados de tipo LNA.

6. ARNsi según la reivindicación 5, caracterizado porque se trata del ARNsi que comprende la secuencia ARN de la secuencia génica SEC ID nº 2 y cuyas hebras tienen por secuencias precisas:

7. ARNsi según la reivindicación 5, caracterizado porque se trata del ARNsi que comprende la secuencia ARN de la secuencia génica SEC ID nº 3 y cuyas hebras tienen por secuencias precisas:

8. ARNsi según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la hebra de ARN sentido y/o la hebra de ARN antisentido comprenden por lo menos una modificación química a nivel de sus partes azúcares, de sus partes nucleobases o de su esqueleto internucleotídico.

9. ARNsi según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, como agente cosmético.

10. ARNsi según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, como medicamento.

11. Composición que comprende por lo menos un ARNsi según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y un soporte aceptable.

12. Composición según la reivindicación 11, caracterizada porque se administra por vía tópica.

13. Composición según las reivindicaciones 11 ó 12, caracterizada porque comprende además por lo menos otro agente de despigmentación.

14. Utilización de por lo menos un ARNsi según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, como agente cosmético para la despigmentación o el blanqueamiento de la piel.

15. Utilización de por lo menos un ARNsi según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento o a la prevención de la hiperpigmentación de la piel.