Polipéptido soluble aislado que comprende los exones 8 a 16 del IL-17RC (residuos aminoacídicos 193 a 447 de la SEQ ID n.

º 2) y los exones 1 a 6 del IL-17RA, en el que dicho polipéptido soluble se une específicamente a la IL-17A y a la IL-17F

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las citocinas son proteínas pequeñas solubles que intervienen en numerosos efectos biológicos, que incluyen la regulación del crecimiento y la diferenciación de muchos tipos de células (véase por ejemplo, Arai et al., Annu. Rev. Biochem. 59: 783 (1990); Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3:311 (1991); Paul y Seder, Cell 76: 241 (1994)). Las proteínas que constituyen el grupo de citocinas incluye interleucinas, interferones, factores estimuladores de colonias, factores de necrosis tumoral y otras moléculas reguladoras. Por ejemplo, la interleucina 17 humana es una citocina que estimula la expresión de la interleucina 6, de la molécula 1 de adhesión intracelular, de la interleucina 8, del factor estimulador de colonias de macrófagos y granulocitos, y de la prostaglandina E2, y desempeña una función importante para que los precursores hematopoyéticos CD34+ maduren preferentemente en neutrófilos (Yao et al., J. Immunol. 155: 5483 (1995); Fossiez et al., J. Exp. Med. 183: 2593 (1996)).

Los receptores que se unen a las citocinas se componen típicamente de una o más proteínas membranarias integrales que se unen a la citocina con una elevada afinidad y transmiten este acontecimiento de unión a la célula a través de las porciones citoplásmicas de determinadas subunidades de los receptores. Los receptores de las citocinas se han agrupado en varias clases en función de la similitud de sus dominios extracelulares de unión al ligando.

Las actividades demostradas in vivo de las citocinas y sus receptores ilustran el potencial clínico, y que se necesitan, otras citocinas, receptores de citocinas, agonistas de citocinas y antagonistas de citocinas. Por ejemplo, la demostración de las actividades in vivo de la familia de las citocinas proinflamatorias ilustra el enorme potencial clínico, y la necesidad, de antagonistas de las moléculas proinflamatorias. La solicitud de la patente internacional WO 2005/010044 describe anticuerpos y moléculas pequeñas para inhibir la IL-17A y la IL-17F. La solicitud de patente internacional WO 2005/065711 describe receptores quiméricos de la IL-17 y sus ligandos. No obstante, no hay una descripción de un receptor soluble de la IL-17C y la IL-17F que se una específicamente a la IL-17A y la IL-17F.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

Las figuras 1A y 1B son representaciones gráficas de la estructura de los exones del IL-17RCx1 humano (SEQ ID n.º 2). Para los aminoácidos cuyo codón cae sobre la unión exón/intrón, se desplazó el sitio de ayuste para incluir el codón entero.

Las figuras 2A y 2B son representaciones gráficas de la estructura de exones del IL17RCx4 humano (SEQ ID n.º 166).

La figura 3 es una representación gráfica de la estructura de exones del IL17RA humano (SEQ ID n.º 21).

Las figuras 4A y 4B son representaciones gráficas de la estructura de exones de un polipéptido soluble preferente de la presente invención tal y como se describe en la presente memoria y en las SEQ ID n.º 157 y 158. Este polipéptido soluble comprende exones del IL-17RA humano (SEQ ID n.º 21) y el IL-17RCx1 humano (SEQ ID n.º 2).

La figura 5 es una representación gráfica de un resultado analítico típico que utiliza el protocolo perfilado en el ejemplo 34. Se generó el gráfico con el programa informático Prizm. Los valores de Y representan la IMF (intensidad media de fluorescencia) normalizada por el máximo y el mínimo (100% y 0%) en función de los pocillos de control sólo con ligando y sin ligando/sin receptor soluble y, por lo tanto, el porcentaje de unión del ligando a las células. El programa calcula el IC50 de cada curva.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Y REALIZACIONES PREFERIDAS

La presente invención pretende satisfacer estas necesidades al dar a conocer antagonistas para las citocinas proinflamatorias IL-17A e IL-17F. Específicamente, las citocinas proinflamatorias IL-17A e IL-17F tienen un elevado grado de similitud entre sus secuencias, comparten muchas propiedades biológicas y ambas están producidas por linfocitos T activados. Se ha demostrado que están implicadas como factores que contribuyen a la progresión de diversas enfermedades autoinmunitarias e inflamatorias, que incluyen artritis reumatoide y asma. De hecho, los reactivos que anulan la función de IL-17A mejoran significativamente la incidencia de la enfermedad y la gravedad en varios modelos de ratón de la enfermedad humana. La IL-17A ejerce sus efectos a través de la interacción con su receptor cognado, el receptor de la IL-17 (IL-17R), pero todavía no se ha identificado el receptor de la IL-17F. Anteriormente, hemos descrito que el IL-17RC es un receptor de la IL-17A y la IL-17F, y que se une a ambas con una afinidad similar, muy alta. Coherentemente con esto, se ha demostrado que una forma soluble del IL-17R bloquea la unión y la señalización de la IL-17A en las células que expresan el receptor, pero no interfieren con la unión o la función de la IL-17F a la IL-17RC.

Dado que se ha propuesto que la interferencia de la IL-17A constituye un tratamiento eficaz para varias enfermedades autoinmunitarias, la utilización de los antagonistas de la presente invención, que pueden bloquear, inhibir, reducir, antagonizar o neutralizar la actividad de la IL-17A y la IL-17F, tendrá ventajas sobre los tratamientos que actúan selectivamente sólo sobre una de estas dos citocinas. La invención da a conocer además los usos de las mismas en las enfermedades inflamatorias así como composiciones y métodos relacionados.

A) Visión general

Las enfermedades inflamatorias y relacionadas con el sistema inmunitario son la manifestación o la consecuencia de vías biológicas bastante complejas, a menudo con numerosas interconexiones, que en la fisiología normal son decisivas para responder a una agresión o lesión, iniciar la reparación de la agresión o lesión, y organizar una defensa innata y adquirida contra organismos extraños. La enfermedad

o la patología se produce cuando estas vías fisiológicas normales ocasionan una agresión o lesión adicional, bien relacionada directamente con la intensidad de la respuesta, o como consecuencia de la regulación anormal o la estimulación excesiva,

o como una reacción contra lo propio, o como una combinación de ellas.

Aunque el origen de estas enfermedades implica a menudo vías de numerosas etapas y a menudo numerosas vías o sistemas biológicos diferentes, la intervención en puntos decisivos en una o más de estas vías puede tener un efecto terapéutico o de mejora. La intervención terapéutica se puede producir mediante el antagonismo de un proceso o vía perjudicial, o mediante la estimulación de un proceso o vía beneficioso.

Se conocen muchas enfermedades inmunitarias relacionadas y se han estudiado extensivamente. Estas enfermedades incluyen enfermedades inflamatorias con mediación inmunitaria (tal como la artritis reumatoide, la insuficiencia renal con mediación inmunitaria, las enfermedades hepatobiliares, las enteropatías inflamatorias, la psoriasis y el asma), las enfermedades inflamatorias sin mediación inmunitaria, las enfermedades infecciosas, las inmunodeficiencias, las neoplasias, etc.

Los linfocitos T son un componente importante de una respuesta inmunitaria en los mamíferos. Los linfocitos T reconocen los antígenos que se asocian a una molécula propia codificada por genes del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH). Se puede mostrar el antígeno junto a las moléculas del CMH en la superficie de las células presentadoras de antígenos, células infectadas por virus, células cancerosas, injertos, etc. El sistema de linfocitos T elimina estas células alteradas que suponen una amenaza para la salud de un mamífero que las hospede. Los linfocitos T incluyen linfocitos T cooperadores y linfocitos T citotóxicos. Los linfocitos T cooperadores proliferan extensivamente después del reconocimiento de un complejo antígeno-CMH sobre una célula presentadora de antígenos. Los linfocitos T cooperadores también secretan una serie de citocinas, por ejemplo, linfocinas, que desempeñan una función central en la activación de los linfocitos B, de los linfocitos T citotóxicos y de otras muchas células que participan en la respuesta inmunitaria.

Un acontecimiento central en las respuesta inmunitaria mediada por células y la respuesta humoral es la activación y la expansión clonal de los linfocitos T cooperadores. La activación de los linfocitos...

1. Polipéptido soluble aislado que comprende los exones 8 a 16 del IL-17RC (residuos aminoacídicos 193 a 447 de la SEQ ID n.º 2) y los exones 1 a 6 del IL-17RA, en el que dicho polipéptido soluble se une específicamente a la IL-17A y a la IL-17F.

2. Polipéptido soluble aislado según la reivindicación 1, en el que el polipéptido comprende los residuos aminoacídicos 1 a 458 de la SEQ ID n.º 158.

3. Polipéptido soluble aislado según la reivindicación 2, en el que el polipéptido comprende la SEQ ID n.º 158.

4. Polipéptido soluble aislado según la reivindicación 2, en el que el polipéptido consiste en los residuos aminoacídicos 1 a 458 de la SEQ ID n.º 158.

5. Polipéptido soluble aislado según la reivindicación 3, en el que el polipéptido consiste en la SEQ ID n.º 158.

6. Polipéptido soluble aislado según la reivindicación 1, en el que el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en: SEQ ID n.º 72 y SEQ ID n.º 140.

7. Molécula de ácido nucleico aislada, que codifica un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

8. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 7, en la que la molécula de ácido nucleico comprende la secuencia nucleotídica mostrada en la SEQ ID n.º

157.

9. Vector de expresión, que comprende los siguientes elementos unidos operativamente:

a) un promotor de transcripción;

b) un segmento de ADN que codifica un polipéptido según una cualquiera de

las reivindicaciones 1 a 6; y c) un terminador de transcripción.

10. Célula aislada en la que se ha introducido un vector de expresión de la reivindicación 9, en la que la célula expresa el polipéptido codificado por el segmento de ADN.

11. Un método para producir un polipéptido que comprende:

a) cultivar una célula en la que se ha introducido un vector de expresión de la reivindicación 9, en el que la célula expresa el polipéptido codificado por el segmento de ADN; y

b) recuperar el polipéptido expresado.

12. Método según la reivindicación 11, en el que la célula es una célula eucariota, y en el que el polipéptido expresado se secreta desde la célula.

13. Método según la reivindicación 11 o 12, en el que el polipéptido codificado comprende la secuencia aminoacídica mostrada en la SEQ ID n.º 158 o los residuos 1458 de la SEQ ID n.º 158.

14. Polipéptido aislado según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el polipéptido comprende además PEGilación.

15. Polipéptido soluble según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para reducir o inhibir la inflamación en un mamífero inducida por la IL-17A o inducida por la IL-17F.

16. Polipéptido soluble según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para reducir la inflamación en un mamífero inducida por la IL-17A e inducida por la IL-17F.

17. Utilización de un polipéptido soluble según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en la fabricación de un medicamento para tratar un mamífero afectado por una enfermedad inflamatoria en la que interviene la IL-17A y/o la IL-17F.

18. Utilización según la reivindicación 17, en la que la enfermedad se selecciona entre el grupo que consiste en una enfermedad inflamatoria crónica, una enfermedad inflamatoria aguda, una enfermedad autoinmunitaria y una enfermedad inflamatoria crónica de las vías respiratorias.

19. Utilización según la reivindicación 18, en la que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica seleccionada entre el grupo que consiste en enteropatía inflamatoria, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, artritis y psoriasis.

20. Utilización según la reivindicación 18, en la que la enfermedad es una enfermedad autoinmunitaria seleccionada entre el grupo que consiste en esclerosis múltiple, artritis reumatoide y enteropatía inflamatoria (IBD).

21. Utilización según la reivindicación 18, en la que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica de las vías respiratorias seleccionada entre el grupo que consiste en asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) y fibrosis quística.

22. Utilización según la reivindicación 17, en la que la enfermedad se selecciona entre el grupo que consiste en psoriasis; artritis reumatoide; artrosis; colitis ulcerosa; enfermedad de Crohn; síndrome del intestino irritable (SII); dermatitis de contacto; esclerosis múltiple (EM); rechazo del trasplante; asma; enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC); fibrosis quística; y asma alérgica.

23. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 22, en la que el polipéptido soluble es un polipéptido producido por el método de la reivindicación

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