PROCEDIMIENTO DE AJUSTE AUTOMATIZADO DE LA DENSIDAD CELULAR PARA LA REALIZACIÓN DE UN PLACA DE ANÁLISIS.
Procedimiento de realización de una placa de análisis celular (4) que comprende una dispersión celular a analizar dispuesta sobre una placa de análisis (4),
comprendiendo dicho procedimiento las etapas siguientes: - extraer una disolución celular a partir de un frasco de extracción, - disponer dicha disolución extraída en una cámara de decantación (2) dispuesta por encima de la placa de análisis (4), - dejar decantar la disolución con el fin de obtener la dispersión celular en la placa de análisis (4). estando dicho procedimiento caracterizado porque comprende una etapa de medición de la densidad celular de la disolución extraída, siendo dicha medición realizada en la cámara de decantación (2)
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/FR2008/051808.
Solicitante: NOVACYT.
Nacionalidad solicitante: Francia.
Dirección: 13 AVENUE DE MORANE SAULNIER 78140 VELIZY VILLACOUBLAY FRANCIA.
Inventor/es: PELTIER, ERIC.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 7 de Octubre de 2008.
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N1/28F
Clasificación PCT:
- G01N1/28 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 1/00 Muestreo; Preparación de muestras para la investigación (manipulación de materiales para un análisis automático G01N 35/00). › Preparación de muestras para el análisis (montaje de muestras sobre las placas del microscopio G02B 21/34; medios de soporte para los objetos o para los materiales a examinar en un microscopio electrónico H01J 37/20).
- G01N15/06 G01N […] › G01N 15/00 Investigación de características de partículas; Investigación de la permeabilidad, del volumen de los poros o del área superficial efectiva de los materiales porosos (identificación de microorganismos C12Q). › Investigación de la concentración de suspensiones de partículas (G01N 15/04, G01N 15/10 tienen prioridad; por pesada G01N 5/00).
- G01N33/48 G01N […] › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Material biológico, p. ej. sangre, orina (G01N 33/02, G01N 33/26, G01N 33/44, G01N 33/46 tienen prioridad ); Hemocitómetros (cómputo de glóbulos repartidos sobre una superficie por barrido óptico de la superficie G06M 11/02).
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
PDF original: ES-2362818_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
La presente invención se refiere a un procedimiento de realización de una placa de análisis celular del tipo que comprende una dispersión celular a analizar dispuesta en una placa de análisis, comprendiendo dicho procedimiento las etapas siguientes:
- extraer una disolución celular a partir de un frasco de extracción,
- disponer dicha disolución extraída en una cámara de decantación dispuesta por encima de la placa de análisis,
- dejar decantar la disolución con el fin de obtener la dispersión celular en la placa de análisis.
La invención se refiere asimismo a un dispositivo de realización de una placa de análisis celular que permite realizar dicho procedimiento.
Se realizan unas placas de análisis celular por ejemplo con el fin de establecer unos diagnósticos médicos. Para ello, se efectúa un depósito de células en una lámina de vidrio.
Las células son extraídas por medio de un cepillo de extracción, por ejemplo mediante frotis, y después el cepillo se dispone en un frasco de extracción en el que las células son puestas en disolución. Una parte de la disolución celular se extrae a continuación y se dispone en una cámara de decantación situada por encima de la lámina de vidrio. Después de la decantación y de la absorción del líquido de mezcla celular, se obtiene una dispersión celular sobre la lámina de vidrio, lo cual forma la placa de análisis. Dicho procedimiento se describe, por ejemplo, en el documento FR 2 792 333.
Es deseable obtener una dispersión de densidad constante en células y sobre todo tener la presencia de células suficientes para obtener un diagnóstico pertinente. En algunas aplicaciones tales como el frotis de detección del cáncer del cuello uterino, este número de células debe satisfacer a la clasificación de Bethesda, que es una clasificación para estandarizar el resultado de diagnóstico de los frotis, y cada dispersión debe así comprender más de 5.000 células. Un ajuste del número de células extraídas puede por lo tanto resultar necesario si la densidad de las células no es suficiente en la disolución.
Actualmente, la medición de la densidad celular se realiza sobre las células presentes en el frasco de extracción. Es decir que se realiza la extracción y después se deposita en el frasco en el que se pone en disolución y en el que se realiza la medición de densidad con el fin de determinar qué cantidad de suspensión celular de las células es necesario añadir sobre la placa de análisis para obtener suficientes en el momento de la lectura de diagnóstico. La medición de la densidad se realiza, por ejemplo, mediante nefelometría, es decir mediante la medición de la difracción de la luz que atraviesa el frasco.
Sin embargo, este tipo de medición en el frasco adolece de varios inconvenientes. En primer lugar, la medición es poco fiable puesto que el cepillo de extracción presente en el frasco o la etiqueta administrativa de identificación del frasco pegada sobre éste pueden perturbar esta medición. Por otro lado, el procedimiento de medición se refiere a todos los elementos celulares presentes en el frasco, tales como las células epiteliales, los hematíes, las células inflamatorias, etc., sin ninguna distinción, y no permite una medición selectiva de las células representativas y pertinentes para el diagnóstico de la extracción. Por último, si la cantidad de suspensión celular se ajusta directamente durante la extracción en el frasco para obtener inmediatamente una placa de análisis de densidad celular óptima, no existe ninguna automatización completa del procedimiento que queda abierto, ni tampoco ningún seguimiento de la calidad que permite editar una relación que menciona la baja densidad celular de la disolución presente inicialmente en el frasco de extracción y su corrección sobre la placa de análisis mediante el enriquecimiento secundario.
Otros documentos: EP-A-1 775 571, WO 87107024 y WO 99/44743 implican unas mediciones ópticas pero en un contexto diferente.
La invención prevé evitar estos inconvenientes proponiendo un procedimiento de realización de una placa de análisis del tipo citado anteriormente que permita una medición de la densidad celular fiable, pertinente y que permita un seguimiento de calidad en caso de correcciones.
Para ello, la invención se refiere a un procedimiento de realización de una placa de análisis del tipo citado anteriormente, en el que dicho procedimiento se caracteriza porque comprende una etapa de medición de la densidad celular de la disolución extraída, siendo dicha medición realizada en la cámara de decantación.
Según otras características del procedimiento: La invención se refiere asimismo a un dispositivo de realización de una placa de análisis celular del tipo que comprende por lo menos un frasco de extracción celular, una cámara de decantación dispuesta en una placa de análisis, unos medios de extracción de una disolución celular a partir del frasco de extracción y de introducción de dicha disolución a la cámara de decantación, caracterizado porque comprende además unos medios de medición de la densidad celular en la cámara de decantación, de manera que se realiza una placa de análisis tal como la definida anteriormente.
- el procedimiento de realización comprende una etapa de comparación de la densidad celular medida a una densidad umbral; - el procedimiento de realización comprende una etapa de extracción de una disolución celular suplementaria y de adición de esta disolución extraída a la cámara de decantación si la densidad celular medida es inferior a la densidad umbral; - la densidad umbral es sustancialmente igual a 5.000 células por dispersión celular; - la densidad celular se mide mediante difracción de la luz o mediante recuento de las células sobre una superficie determinada; y - la etapa de medición de la densidad celular comprende una etapa de iluminación de la cámara de decantación.Este dispositivo comprende además unos medios de medición de la densidad celular en la cámara de extracción, de manera que se realiza una placa de análisis según un procedimiento tal como el descrito anteriormente.
Según otras características del dispositivo:
- los medios de medición de la densidad celular comprenden unos medios de iluminación de la cámara de
decantación y unos medios de medición de la difracción de la luz o de recuento de células en una superficie
determinada;
- los medios de medición de la difracción de la luz o de recuento de células sobre una superficie determinada comprenden una cámara, y
- la cámara está soportada por un brazo móvil, desplazándose dicho brazo por encima de una pluralidad de cámaras de decantación dispuestas por encima de una pluralidad de placas de análisis.
Otros aspectos y ventajas de la invención se pondrán más claramente de manifiesto a partir de la descripción siguiente, dada a título de ejemplo y realizada haciendo referencia a los dibujos adjuntos, en los que:
- la figura 1 es una representación esquemática en perspectiva parcial de un dispositivo de realización de una placa de análisis según un modo de realización de la invención,
- la figura 2 es una representación esquemática del dispositivo de la figura 1 durante una etapa de medición de la densidad celular de una disolución presente en una cámara de decantación.
En aras de la simplificación, el dispositivo de realización de una placa de análisis no ha sido representado en su totalidad en las figuras.
Este dispositivo comprende generalmente por lo menos un frasco de extracción celular (no representado), por lo menos una cámara de decantación 2 dispuesta en una placa de análisis 4, unos medios de extracción (no representados) de una disolución celular a partir del frasco de extracción y de introducción de dicha disolución a la cámara de decantación 2.
El frasco de extracción y la cámara de decantación 2 están dispuestos en un plato 6 provisto de por lo menos un alojamiento de recepción de una placa de análisis 4 debajo de la cámara de decantación 2. En la práctica, una pluralidad de cámaras de decantación 2 y de placas de análisis 4 está prevista en unas cavidades correspondientes del plato 6, para unas realizaciones en serie de placas de análisis.
La cámara de decantación 2 es un recipiente sin fondo,... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Procedimiento de realización de una placa de análisis celular (4) que comprende una dispersión celular a analizar dispuesta sobre una placa de análisis (4), comprendiendo dicho procedimiento las etapas siguientes:
- extraer una disolución celular a partir de un frasco de extracción,
- disponer dicha disolución extraída en una cámara de decantación (2) dispuesta por encima de la placa de análisis (4),
- dejar decantar la disolución con el fin de obtener la dispersión celular en la placa de análisis (4).
estando dicho procedimiento caracterizado porque comprende una etapa de medición de la densidad celular de la disolución extraída, siendo dicha medición realizada en la cámara de decantación (2).
2. Procedimiento de realización según la reivindicación 1, caracterizado porque comprende una etapa de comparación de la densidad celular medida con una densidad umbral.
3. Procedimiento de realización según la reivindicación 2, caracterizado porque comprende una etapa de extracción de una disolución celular suplementaria y de adición de esta disolución extraída a la cámara de decantación (2) si la densidad celular medida es inferior a la densidad umbral.
4. Procedimiento de realización según la reivindicación 2 ó 3, caracterizado porque la densidad umbral es sustancialmente igual a 5.000 células por dispersión celular.
5. Procedimiento de realización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque la densidad celular se mide mediante difracción de la luz o mediante recuento de las células sobre una superficie determinada.
6. Procedimiento de realización según la reivindicación 5, caracterizado porque la etapa de medición de la densidad celular comprende una etapa de iluminación de la cámara de decantación (2).
7. Dispositivo de realización de una placa de análisis celular, que comprende por lo menos un frasco de extracción celular, una cámara de decantación (2) dispuesta en una placa de análisis (4), unos medios de extracción de una disolución celular a partir del frasco de extracción y de introducción de dicha disolución a la cámara de decantación (2), caracterizado porque comprende además unos medios de medición de la densidad celular en la cámara de decantación (2), de manera que se realiza una placa de análisis (4) de acuerdo con un procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
8. Dispositivo según la reivindicación 7, caracterizado porque los medios de medición de la densidad celular comprenden unos medios de iluminación de la cámara de decantación (2) y unos medios de medición de la difracción de la luz o de recuento de células en una superficie determinada.
9. Dispositivo según la reivindicación 8, caracterizado porque los medios de medición de la difracción de la luz o de recuento de células sobre una superficie determinada comprenden una cámara de vídeo (12).
10. Dispositivo según la reivindicación 9, caracterizado porque la cámara de vídeo está soportada por un brazo móvil (10), desplazándose dicho brazo (10) por encima de una pluralidad de cámaras de decantación (2) dispuestas por encima de una pluralidad de placas de análisis (4).
11. Dispositivo según la reivindicación 10, caracterizado porque el brazo soporta además una fuente luminosa (14) dispuesta en la parte extrema de una lámina metálica elástica (16) fijada al brazo (10), constituyendo dicha fuente luminosa unos medios de iluminación lateral de la cámara de decantación (2).
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