Uso de un modulador de un complejo de IL-22R e IL-20Rß, para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de un sujeto que padece un neoplasma o un queratoderma,

en el que el modulador del complejo de IL-22R e IL-20 es una forma soluble de IL-22R o un anticuerpo contra IL-22R

Receptores de citoquina de clase II y usos de los mismos.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a citocinas y al fenómeno del "intercambio de receptores". Más particularmente, se refiere a homólogos de IL-10 y a diversos receptores para estos homólogos, así como a su uso

Antecedentes y técnica anterior

La interleucina-10 ("IL-10" en lo sucesivo en este documento) es una citocina principal, antiinflamatoria, originalmente identificada por Moore, et al., Annu. Reverendo Immunol 19:683 (2001), como un factor que inhibe la producción de citocinas por linfocitos TH1 activados. Tras la identificación de IL-10, se identificaron varias citocinas adicionales, con diversos grados de homología con IL-10. La primera de estas se denominó "mda-7", un acrónimo de "gen 7 asociado con la diferenciación de melanocitos", porque su expresión se reguló positivamente durante la diferenciación in vitro de una línea celular de melanoma. Véase Jiang, et al., Oncogene 11:2477 (1995). Esta proteína presenta una identidad de secuencia del 22% con IL-10, pero originalmente no se reconoció como una proteína secretada. Se indica que la expresión de mda-7 provoca la detección del crecimiento irreversible de los tumores mediante la inducción de la apoptosis o diferenciación; sin embargo no está claro si este efecto es el resultado de un bucle paracrino que implica una ruta clásica de receptores de citocinas o de una forma citoplásmica de la molécula mda-7. Recientemente, Schaefer, et al., J. Immunol 166: 5859 (2001), identificaron el ortólogo murino de mda-7, como una citocina específica de TH2 y recibió el nombre de "proteína secretada inducida por IL-4" o "FISP". El homólogo de rata, identificado por Zhang, et al., J. Biol. Chem 275:24436 (2000), se conoce como "mob5" y se expresa por las células epiteliales intestinales al realizar la activación de ras. Zhang et al. han sugerido que mob5 desempeña un papel en la neoplasia mediada por el oncogén ras, a través de un bucle autocrino que implica un supuesto receptor de la superficie celular inducible por ras. Soo, et al., J. Cell Biochem. 74:1 (1999), han clonado el gen como un gen que se sobreexpresa en la piel durante la cicatrización de las heridas.

Los dos genes IL10 y mda7 se han asignado al mapa del cromosoma 1q31-32, que es una región donde se encuentran otros dos genes relacionados con IL-10, es decir, "IL19" e "IL20". IL-19 se expresa por las células mononucleares de sangre periférica activadas por LPS, según lo informado por Gallagher, et al., 1:442 de Immun de los genes (2000). En lo que respecta a IL-20, se han estudiado sus actividades biológicas usando ratones transgénicos que sobreexpresan la citocina, donde el gen está bajo el control de diversos promotores. Esos ratones, según lo informado por Blumberg, et al., Cell 104:9 (2001), se caracterizan por letalidad neonatal y anomalías en la piel, incluida la diferenciación epidérmica aberrante, que es una reminiscencia de lesiones de psoriasis en seres humanos. Blumberg, et al., han descrito el complejo del receptor de IL-20 como un heterodímero de dos subunidades del receptor huérfano de la citocina de clase II.

Específicamente, "CRF2-8," para la cual se ha sugerido el nombre "IL-20Ra" y "DIRS1", para la que se ha sugerido el nombre "IL-20Rß".

La solicitud PCT WO 01/46261 revela antagonistas de IL-20 que son formas solubles de IL-de IL-20Ra y/o ß o anticuerpos contra IL-20Ra o ß y su uso en el tratamiento de enfermedades en las que IL-20 desempeña un papel como dermatitis atópica y psoriasis.

Otras dos citocinas IL-10, es decir, "AK155" e "IL-22" se localizan en el cromosoma humano 12q15, cerca del gen IFN-?. Se sabe que AK155 se regula positivamente mediante infección por Herpes saimiri de los linfocitos T. Véase Knappe, et al., Virol J 74:3381 (2000). La molécula IL-22 se describió originalmente como un gen inducible por IL-9 y se denominó "IL-TIF," por "factor inducible derivado de células T relacionado con IL-10". Véase Dumoutier, et al., J. Immunol 164: 1814 (2000), así como la solicitud PCT WO 00/24758 y las solicitudes de prioridad de Estados Unidos contempladas en su interior. Las actividades de IL-22 incluyen la inducción de la respuesta de fase aguda, especialmente en hepatocitos y se median a través de un receptor heterodimérico que consiste en la subunidad CRF2-9/IL-22R y la cadena ß del receptor de IL-20. Véase, por ejemplo, Dumoutier, et al., Proc. Natl Acad. Sci USA 97:10144 (2000); Kotenko, et al., J. Biol. Chem 276:2725 (2000); Xie, et al., J. Biol. Chem 275:31335 (2000). La inducción de la respuesta de fase aguda se asocia con inflamación, respuestas alérgicas y cáncer, sugiriendo así que la modulación de la interacción entre IL-9 e IL-22 está asociada con estas afecciones. Además de a su receptor celular, IL-22 se une a un miembro secretado de la familia de receptores de citocinas de clase II, denominado "IL-22BP", o "proteína de unión a IL-22" que actúa como un antagonista natural de IL-22. Véase Dumoutier, et al., J. Immunol 166:7090 (2001), Kotenko, et al., J. Immunol 166:7096 (2001).

De lo anterior deberá entenderse, que hay dos clases de receptores de citocinas, es decir, clase I y clase II. Dentro de los receptores de citocinas de clase I, el uso compartido de subunidades receptoras es un fenómeno bien reconocido. Como resultado de este fenómeno se han definido subfamilias, incluyendo las familias ßc, gp130 e IL-2R?. Sin embargo, en el caso de los receptores de la clase II, el único ejemplo de un receptor compartido hasta ahora ha sido la cadena de IL-10Rß, implicada en la señalización de IL-10 e IL-22. Véase Dumoutier, et al., Proc. Natl Acad. Sci USA 97:10144 (2000); Kotenko, et al., J. Biol. Chem 276: 2725 (2000); Xie, et al., J. Biol. Chem 275:31335 (2000). Es de interés para determinar qué clase de receptores de citocinas de clase II pueden y funcionan en relación con la unión a citocinas particulares. Se trata de una característica de la invención, que se describirá junto con otras características de la invención, a continuación en la divulgación.

En la solicitud WO 02/072607 publicada el 19 de septiembre de 2002 y que reivindica una fecha de prioridad de 9 de marzo de 2001 se describe, entre otras cosas, un polipéptido heterodimérico IL-22R/IL-20Rbeta soluble que comprende los dominios extracelulares de IL-22R e IL-20R unidos entre sí. El documento también describe el uso de este polipéptido heterodimérico en el tratamiento de la psoriasis, eczema, dermatitis atópica y por contacto.

Descripción detallada de realizaciones preferidas

Ejemplo 1

Para caracterizar las interacciones entre diversos homólogos y receptores de IL-10 que pertenecen a la familia de los receptores de citocinas de clase II, se llevaron a cabo una serie de experimentos.

Para hacer esto, se amplificaron las secuencias que codifican los homólogos de IL-10, mda-7, IL-19, IL-20 e IL-22 mediante RT-PCR, usando RNA procedente de células T que se habían estimulado con anticuerpos anti-CD3, usando técnicas convencionales y reconocidas en la técnica. La secuencia que codifica a IL-20 se amplificó a partir de ARN de la piel.

Las moléculas de ADNc resultantes se clonaron después en un plásmido disponible en el mercado, es decir, pCEP4, bajo el control de un promotor de CMV. Se produjeron las proteínas de fusión, denominadas "mda-7-flag," "IL-19-flag" e "IL-22-flag". Para dar más detalles, se prepararon construcciones de ADN colocando un cebador sentido en pCEP4 antes del sitio de clonación, así como un cebador antisentido, en el que se mutó el codón de TERMINACIÓN del ADN, junto con una secuencia de nucleótidos que codifica la primera parte de la molécula flag. Las secuencias utilizadas fueron:

gtccttgtag tcacctcccc cgagcttgta gaatttctg (SEC ID Nº: 1; usada con mda-7);

gtccttgtag tcacctcccc cagctgagga catacttc (SEC ID Nº: 2; usada con IL-19);

gtccttgtag tcacctcccc cttctgtctc ctccatcca (SEC ID Nº: 3; para IL-20); y

gtccttgtag tcacctcccc cgacgcaagc atttctcag (SEC ID Nº: 4; usada con IL-22).

Se preparó un primer producto PCR y después se realizó una segunda ampliación por PCR, usando el mismo cebador sentido, así como un oligonucleótido que contenía toda la secuencia flag, así como un sitio de restricción NheI, es decir,

actgctagct cacttgtcgt catcgtcctt gtagtcacct (SEC ID Nº: 5).

Esto permitió la clonación directa en el plásmido pCEP4.

Se...

1. Uso de un modulador de un complejo de IL-22R e IL-20Rß, para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de un sujeto que padece un neoplasma o un queratoderma, en el que el modulador del complejo de IL-22R e IL-20 es una forma soluble de IL-22R o un anticuerpo contra IL-22R.

2. Modulador de un complejo de IL-22R e IL-20Rß, para usar en el tratamiento de un sujeto que padece un neoplasma o un queratoderma, en el que el modulador del complejo de IL-22R e IL-20Rß es una forma soluble de IL-22R o un anticuerpo contra IL-22R.

3. Método para determinar si una sustancia posee una actividad de inhibición de la proliferación de células epidérmicas, que comprende mezclar una muestra de células epidérmicas, que presentan un complejo de receptores que comprenden IL-20Rß e IL-22R, y una sustancia a ensayar combinada con IL-20, medir la proliferación de las células epidérmicas y comparar dicha proliferación con la proliferación resultante de mezclar una muestra de dichas células epidérmicas, que presentan dicho complejo de receptores, solo con IL-20, indicando una disminución de la proliferación que dicha sustancia posee una actividad de inhibición de la proliferación de las células epidérmicas.

4. Método de la reivindicación 3, en el que dichas células epidérmicas son células cutáneas.

5. Método para modular el efecto de la interleucina-20 (IL-20) o de mda-7 en una célula in vitro, que comprende poner en contacto dicha célula con un modulador de un complejo de IL-22R e IL-20Rß, en el que el modulador comprende una forma soluble aislada de IL-22R, siempre que dicho modulador no sea un polipéptido heterodimérico IL-22R/IL-20Rß soluble.

6. Método para modular el efecto de la interleucina-20 (IL-20) o de mda-7 en una célula cutánea in vitro, que comprende poner en contacto dicha célula con un modulador de un complejo de IL-22R e IL-20Rß, en el que el modulador comprende una forma soluble aislada de IL-22R.

7. Uso de un modelador de un complejo de IL-22R e IL-20Rß para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de un sujeto que padece una afección cutánea, en el que el modulador comprende una forma soluble de IL-22R, a condición de que cuando dicha afección cutánea sea soriasis, eczema, dermatitis atópica o de contacto, dicho modulador no sea un polipéptido heterodimérico IL-22R/IL-20Rß soluble.

8. Modulador de un complejo de IL-22R e IL-20Rß, para usar en el tratamiento de un sujeto que padece una afección cutánea, en el que el modulador comprende una forma soluble de IL-22R, a condición de que cuando dicha afección cutánea sea soriasis, eczema, dermatitis atópica o por contacto, dicho modulador no sea un polipéptido heterodimérico IL-22R/IL-20Rß soluble.

9. Uso de la reivindicación 7 o el modulador para el uso de la reivindicación 8, en el que la afección cutánea es soriasis, a condición de que dicho modulador no sea un polipéptido heterodimérico IL-22R/IL-20Rß soluble.

10. Uso de la reivindicación 7 o el modulador para el uso de la reivindicación 8, en el que la afección cutánea es dermatitis atópica, a condición de que dicho modulador no sea un polipéptido heterodimérico IL-22R/IL-20Rß soluble.

11. Uso de un modulador de un complejo de IL-22R e IL-20Rß para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de un sujeto que padece queratitis seborreica, en el que el modulador comprende una forma soluble aislada de IL-22R.

12. Modulador de un complejo de IL-22R e IL-20Rß para el uso en el tratamiento de un sujeto que padece queratitis seborreica, en el que el modulador comprende una forma soluble aislada de IL-22R.