PEPTIDOS ASOCIADOS A TUMOR UNIDOS A MOLECULAS MHC.

Un péptido asociado a tumor con la secuencia de aminoácidos ALADGVQKV (SEQ ID n.

º 77), en donde el péptido tiene la capacidad de unirse a una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) humano de clase I

La presente invención se refiere a péptidos asociados a tumor con la capacidad de unirse a una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) humano de clase I.

Los péptidos de este tipo son utilizados, por ejemplo, en la inmunoterapia de las enfermedades tumorales.

La identificación de antígenos asociados a tumores (TAA) mediante componentes del sistema inmune desempeña un papel fundamental en la destrucción de células tumorales por parte del sistema inmune. Este mecanismo se basa en la condición de que entre las células tumorales y las células normales existen diferencias cualitativas o cuantitativas. Para desencadenar una respuesta antitumoral, las células tumorales deben expresar a los antígenos, lo cual provoca una respuesta inmunológica suficiente para la destrucción del tumor.

Los linfocitos T citotóxicos que expresan la molécula CD8 (en adelante, CTL) tienen un papel importante en el rechazo a tumores. Para que se desencadene una reacción inmune de este tipo a través de los linfocitos T citotóxicos, deben presentarse proteínas o péptidos foráneos ante los linfocitos T. Los linfocitos T sólo reconocen a los antígenos como fragmentos de péptidos cuando éstos son presentados por moléculas MHC en la superficie de la célula. Estas moléculas MHC (Major Histocompatibility Complex) son receptoras de péptidos que, normalmente, los unen dentro de la célula para transportarlos a la superficie de la célula. Este complejo formado por péptidos y moléculas MHC es reconocido por los linfocitos T. Las moléculas MHC del ser humano también se conocen como «antígenos de leucocito humano» (HLA).

Existen dos clases de moléculas MHC: Las moléculas MHC de clase I, que aparecen en la mayoría de células con núcleo, presentan

péptidos producidos por degradación proteolítica de proteínas endógenas. Las moléculas MHC de clase II sólo aparecen en células especializadas presentadoras de antígenos (APC) y presentan péptidos de proteínas exógenas que, en el transcurso de la endocitosis, son absorbidos y transformados por las APC. Los complejos formados por péptido y MHC de clase I son reconocidos por linfocitos T CD8+ citotóxicos; los complejos formados por péptido y MHC de clase II son reconocidos por linfocitos T colaboradores CD4.

Para que un péptido pueda desencadenar una respuesta celular inmune, debe estar unido a una molécula MHC. Este proceso depende del alelo de la molécula MHC y de la secuencia de aminoácidos del péptido. Los péptidos unidos a moléculas MHC de clase I suelen tener de 8 a 10 residuos y contienen en su secuencia dos residuos conservados (Anchor), que interactúan con el surco de unión correspondiente de la molécula MHC.

Para que el sistema inmune pueda desencadenar una respuesta efectiva de CTL contra los péptidos derivados de tumor, es necesario que dichos péptidos, además de poder unirse a las moléculas MHC de clase I expresadas por las células tumorales, también sean reconocidos por linfocitos T con receptores específicos de linfocitos T (TCR, T-cell receptor).

El objetivo principal para el desarrollo de una vacuna antitumoral es la identificación y caracterización de antígenos asociados a tumores que son reconocidos por CTL CD8+.

Los antígenos que son reconocidos por linfocitos T citotóxicos específicos de tumores o sus epítopos pueden ser moléculas de cualquier clase de proteína como, por ejemplo, encimas, receptores, factores de transcripción, etc. Otra clase importante de antígenos asociados a tumores son las estructuras

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Para que las proteínas sean reconocidas por los linfocitos T citotóxicos como antígenos específicos de tumores y, por lo tanto, puedan ser aplicadas como tratamiento, deben cumplirse determinadas condiciones: el antígeno debe estar expresado fundamentalmente por células tumorales, no por tejido normal o, si éste lo expresa, debe ser en cantidades inferiores a las de los tumores. En caso de que el antígeno en cuestión no sólo se exprese en un tipo de tumor, sino en varios, también es deseable que lo haga en concentraciones altas. También es esencial la presencia de epítopos en la secuencia de aminoácidos del antígeno, ya que dichos péptidos derivados de un antígeno asociado a un tumor («péptidos inmunógenos») desencadenan una respuesta de linfocitos T, ya sea in vitro o in vivo.

Los antígenos asociados a tumores (TAA) representan, por tanto, el punto de partida para el desarrollo de una vacuna antitumoral. Los métodos para la identificación y caracterización de los TAA se basan en la acción de los CTL ya inducidos en el paciente o en la creación de perfiles de transcripción diferenciados entre tumores y tejidos normales.

El hallazgo de genes sobreexpresados en tejidos tumorales o expresados de manera selectiva en dichos tejidos no proporciona, sin embargo, información precisa sobre la acción de los antígenos transcritos por estos genes en la inmunoterapia. La causa de ello es que sólo los péptidos aislados de estos antígenos son aptos para una acción de ese tipo, ya que sólo los epítopos de los antígenos –no todo el antígeno– son capaces de provocar una respuesta de linfocitos T mediante la presentación de MHC. Por eso es importante seleccionar péptidos de proteínas sobreexpresadas o expresadas de manera selectiva, presentados

con moléculas MHC y así obtener blancos para el reconocimiento específico de tumores mediante linfocitos T citotóxicos.

Ante estos antecedentes, el objetivo de la presente invención es facilitar al menos una nueva secuencia de aminoácidos para un péptido con la capacidad de unirse a una molécula de complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) humano de clase I.

Este objetivo se alcanza, conforme a la presente invención, mediante la preparación de un péptido asociado a tumor con una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo compuesto por las secuencias SEQ ID n.º 1 a SEQ ID n.º 79 de la lista adjunta de secuencias, en donde el péptido tiene la capacidad de unirse a una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) humano de clase I.

De esta forma, se alcanza el objetivo que sirve de base para la presente invención.

Con ello se entiende que los péptidos identificados por el tumor son sintetizados para obtener mayores cantidades y para su aplicación para los fines descritos más abajo o transportados en células para su expresión.

Los inventores pudieron aislar e identificar los péptidos mencionados como ligandos específicos de moléculas MHC de clase I a partir de tejido tumoral. Se denominan péptidos «asociados a tumores» a aquellos aislados e identificados a partir de material tumoral. Estos péptidos, que son presentados en tumores auténticos (primarios) están sujetos al procesamiento de antígenos en una célula tumoral.

Los ligandos específicos se pueden aplicar en la terapia contra el cáncer; por ejemplo, para inducir una respuesta inmune contra

células tumorales que expresan los antígenos de los que proceden los péptidos.

Dicha respuesta inmune en forma de una inducción de CTL se puede obtener in vivo. Para ello, se administra el péptido por ejemplo en forma de composición farmacéutica a un paciente con una enfermedad tumoral asociada a TAA.

Por otro lado, también se puede desencadenar una respuesta CTL ex vivo en un tumor que expresa los antígenos de los que proceden los péptidos. Para ello, se incuban las células precursoras de CTL junto con células presentadoras de antígenos y los péptidos. Finalmente, se cultivan los CTL así estimulados y se administran al paciente estos CTL activados.

También existe la posibilidad de cargar ex vivo las APC con los péptidos y administrar al paciente estas APC cargadas. El antígeno se expresa en el tejido tumoral del que procede el péptido. Las APC pueden entonces presentar a los CTL el péptido y activarlos.

Los péptidos conforme a la invención también pueden ser aplicados como reactivos diagnósticos.

De esta forma, con los péptidos se puede saber si en una población de CTL existen CTL dirigidos específicamente contra un péptido o si fueron inducidos por terapia.

Además, con los péptidos también se puede comprobar el aumento...

Reivindicaciones

1. Un péptido asociado a tumor con la secuencia de aminoácidos ALADGVQKV (SEQ ID n.º 77), en donde el péptido tiene la capacidad de unirse a una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) humano de clase I.

2. El péptido conforme a la reivindicación 1, caracterizado porque en N-y/o C-terminal existe otro aminoácido.

3. El péptido conforme a las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado porque un aminoácido se ha eliminado.

4. El péptido conforme a una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque al menos un aminoácido se ha modificado químicamente.

5. La utilización del péptido conforme a las reivindicaciones 1 a 4 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades tumorales y/o enfermedades adenomatosas.

6. La utilización del péptido conforme a las reivindicaciones 1 a 4 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades tumorales y/o enfermedades adenomatosas.

7. La utilización conforme a las reivindicaciones 5 o 6, caracterizada porque la enfermedad es cáncer renal, de mama, de páncreas, de estómago, de vejiga y/o de testículo.

8. La utilización conforme a las reivindicaciones 6 o 7, caracterizada porque el péptido es aplicado junto con un adyuvante.

9. La utilización conforme a las reivindicaciones 6 o 7,

65 caracterizada porque el péptido se aplica unido a una célula presentadora de antígeno.

10. La utilización del péptido conforme a cualquiera de las

5 reivindicaciones 1 a 4 para la marcación in vitro de leucocitos, especialmente de linfocitos T.

11. La utilización conforme a la reivindicación 10 para evaluar

el desarrollo de una terapia de una enfermedad tumoral. 10

12. La utilización del péptido conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la preparación de un anticuerpo.

13. Una composición farmacéutica que contiene el péptido 15 conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

14. Una molécula de ácidos nucleicos que codifica el péptido conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o un vector que comprende la molécula de ácidos nucleicos.

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15. Células que, con ayuda de la molécula de ácidos nucleicos o del vector conforme a la reivindicación 14, son modificadas genéticamente de tal forma que producen un péptido conforme a una de las reivindicaciones 1 a 4.