Una unidad de transcripción de ADN que comprende ADN que codifica ocho antígenos unidos de manera operable a una región promotora,

en la que los ocho antígenos son: Gag, Env, Vif, Vpr, Vpu, Tat, Rev y Nef del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV); o Gag, Env, Vif, Vpr, Vpx, Tat, Rev y Nef del virus de la inmunodeficiencia simia (SIV); y en la que la unidad de transcripción de ADN no codifica un antígeno Pol de HIV o SIV

Inmunización por inoculación de una unidad de transcripción de ADN.

Campo de la invención

La presente solicitud pertenece al campo de las vacunas de ADN para el virus de la inmunodeficiencia humana o simia.

Antecedentes de la invención

La vacunación con organismos inactivados o atenuados o con sus productos ha demostrado ser un método eficaz para incrementar la resistencia del hospedador, y en última instancia ha conducido a la erradicación de ciertas enfermedades infecciosas frecuentes y graves. El uso de vacunas se basa en la estimulación de respuestas inmunitarias específicas en un hospedador o en la transferencia de anticuerpos formados previamente. La prevención de ciertas enfermedades, tales como la poliomielitis, mediante las vacunas representa uno de los triunfos más importantes de la inmunología.

Se han desarrollado vacunas eficaces para un número relativamente bajo de los agentes infecciosos que provocan enfermedades en los animales domésticos y en el hombre. Esto refleja los problemas técnicos asociados al cultivo y a la atenuación de cepas virulentas de patógenos. Recientemente se han realizado esfuerzos en el desarrollo de vacunas de subunidades (vacunas que presentan solamente antígenos seleccionados de un patógeno al hospedador). Las vacunas de subunidades tienen capacidad para alcanzar niveles elevados de protección con ausencia real de efectos secundarios. Las vacunas de subunidades también posibilitan el desarrollo de vacunas que son estables, fáciles de administrar, y lo suficientemente económicas para su distribución generalizada.

El documento WO 93/17706 describe una vacuna genética para virus de inmunodeficiencia. Se describe una aproximación a la metodología de vacunas que se basa en una vacuna genética para un virus. Se transfiere una construcción genética que codifica determinantes antigénicos del virus a las células de los individuos vacunados para expresar los antígenos virales en las células sanas, para producir una respuesta inmunitaria hacia esos antígenos. El método es especialmente ventajoso para el HIV.

Wang, B. et al. describe que la inoculación de ADN induce respuestas inmunitarias neutralizantes contra el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 en ratones y en primates que no son humanos en DNA and Cell Biology, vol. 12, nº 9, 1993, págs. 799-805.

El documento WO 93/25235 describe el tratamiento del SIDA basado en los péptidos VPX de HIV-2. Se describen métodos y composiciones terapéuticas para el tratamiento de la infección por HIV-1 administrando un polipéptido VPX, en particular un polipéptido VPX de HIV-2 o de SIV.

Sumario de la invención

Según un primer aspecto de la presente invención, se proporciona una unidad de transcripción según la reivindicación 1. Según un segundo aspecto de la presente invención, se proporciona el producto según la reivindicación 2. Las características preferidas de la invención se proporcionan en las reivindicaciones dependientes.

Esta invención es útil para el uso en la vacunación con subunidades. En concreto, esta invención es útil para el uso en la inmunización de un individuo, por lo cual se va a introducir en el individuo una unidad (o unidades) de transcripción de ADN que comprende ADN que codifica un antígeno o antígenos deseados y ADN que codifica un elemento o elementos promotores transcripcionales. Se puede administrar una única unidad de transcripción o múltiples unidades de transcripción de ADN a un individuo para alcanzar la inmunización contra un antígeno o contra múltiples antígenos. La absorción de las unidades de transcripción de ADN por las células del hospedador da como resultado la expresión del antígeno o antígenos deseados, por lo que se provocan respuestas inmunitarias humorales o mediadas por células, o respuestas tanto humorales como mediadas por células. La respuesta inmunitaria humoral y mediada por células puede proporcionar protección contra la infección por agentes patógenos. El hospedador puede ser cualquier vertebrado, ave o mamífero, lo que incluye seres humanos.

La presente invención se refiere a unidades de transcripción de ADN para el uso en la generación de respuestas inmunitarias. En una realización, se inmuniza al individuo mediante vías de inoculación parenterales. Estas incluyen la administración intravenosa, intramuscular, intradérmica y subcutánea de las unidades de transcripción de ADN. Los ADNs administrados a la piel se pueden administrar con una pistola de ADN. En una segunda realización, se inmuniza al individuo poniendo en contacto una superficie mucosa, tal como una superficie mucosa respiratoria, con las unidades de transcripción de ADN de tal manera que las unidades de transcripción son absorbidas por (es decir, entran en las células de) la superficie mucosa. Los ADNs para la administración mucosa pueden estar encapsulados en microesferas.

Los antígenos deseados para ser expresados se pueden diseñar para proporcionar formas internas, superficiales, secretadas, o producidas mediante gemación y ensambladas de los antígenos a usar como inmunógenos.

Existen muchas ventajas en el uso del ADN para las inmunizaciones. Por ejemplo, la inmunización se puede llevar a cabo para cualquier antígeno codificado por ADN. Además, los antígenos codificados por ADN se expresan en forma de antígenos "puros" en sus estados nativos, y han sufrido las modificaciones de las células hospedadoras normales. Además, el ADN se manipula de forma fácil y económica, y es estable en forma de un producto seco o en disolución en un amplio intervalo de temperaturas. Así, esta técnica es valiosa para el desarrollo de vacunas de subunidades muy eficaces.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 es una representación esquemática de un plásmido bacteriano que contiene una unidad de transcripción de ADN (denominada pP1/H7) que comprende un gen de hemaglutinina de tipo 7 (H7) de virus de la gripe expresado por un vector retroviral competente para la replicación.

La Figura 2 es una representación esquemática de un plásmido bacteriano que contiene una unidad de transcripción de ADN (p188) que comprende un gen de hemaglutinina de tipo 7 (H7) de virus de la gripe expresado por un vector retroviral deficiente de replicación.

La Figura 3 es una representación esquemática de un plásmido bacteriano que comprende un vector retroviral (pRCAS) sin inserto de H7, usado como control.

La Figura 4A es una representación esquemática del vector no retroviral que comprende la unidad de transcripción de ADN de un antígeno de virus de la gripe que codifica una hemaglutinina de subtipo H7.

La Figura 4B es una representación esquemática del vector no retroviral que comprende una unidad de transcripción de ADN de control, que no codifica antígenos de virus de la gripe.

La Figura 4C es una representación esquemática del vector no retroviral que comprende la unidad de transcripción de ADN de antígeno del virus de la gripe que codifica una hemaglutinina de subtipo H1.

La Figura 5 es un gráfico de barras que representa la respuesta de células T citotóxicas de ratones inoculados mediante pistola de genes con cADN de VP7 de rotavirus EDIM en comparación con los controles. Barras oscuras, proporción efector respecto de objetivo 60:1; barras rayadas, proporción efector respecto de objetivo 30:1.

La Figura 6 es una representación esquemática del vector pJW4303 que comprende el intrón A de CMV, una secuencia líder para la proteína activadora del plasminógeno tisular (TPA), y secuencias de poliadenilación de la hormona del crecimiento bovina.

La Figura 7A es una representación esquemática de ADN proviral de HIV-1.

La Figura 7B es una representación esquemática del inserto NL4-3.dpol.

La Figura 7C es una representación esquemática del inserto HXB-2.env.

La Figura 7D es una representación esquemática del inserto NL4-3.env.

La Figura 8A es una representación esquemática del ADN de env de HIV-1.

La Figura 8B es una representación esquemática de un inserto sgp120.env.

La Figura 8C es una representación esquemática de un inserto sgp140.env.

La Figura 8D es una representación esquemática de un inserto sgp160.env.

La Figura 9 es una representación del calendario...

1. Una unidad de transcripción de ADN que comprende ADN que codifica ocho antígenos unidos de manera operable a una región promotora, en la que los ocho antígenos son:

Gag, Env, Vif, Vpr, Vpu, Tat, Rev y Nef del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV); o

Gag, Env, Vif, Vpr, Vpx, Tat, Rev y Nef del virus de la inmunodeficiencia simia (SIV);

y en la que la unidad de transcripción de ADN no codifica un antígeno Pol de HIV o SIV.

2. Un producto que comprende una primera unidad de transcripción de ADN y una segunda unidad de transcripción de ADN, y cada unidad de transcripción comprende ADN que codifica uno o más antígenos unidos de manera operable a una región promotora, en el que dicha primera unidad de transcripción de ADN del producto codifica Gag, Env, Vif, Vpr, Vpu, Tat, Rev y Nef del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) y no codifica un antígeno Pol de HIV, y en el que dicha segunda unidad de transcripción de ADN del producto codifica un antígeno Env de HIV.

3. Un producto según la reivindicación 2, en el que los antígenos Env codificados por la primera y la segunda unidades de transcripción son de diferentes subgrupos del virus de la inmunodeficiencia, o son formas estructurales diferentes de Env seleccionadas de una forma soluble de gp120, una forma soluble de gp140, y gp160.

4. La unidad de transcripción según la reivindicación 1 o un producto según las reivindicaciones 2 ó 3, en el que la unidad de transcripción o el producto está encapsulado en microesferas.

5. La unidad de transcripción según la reivindicación 1 ó 4 o el producto según las reivindicaciones 2 a 4 para el uso en la inmunización de un mamífero para provocar una respuesta inmunitaria protectora contra un virus de inmunodeficiencia.

6. La unidad de transcripción según las reivindicaciones 1, 4 ó 5 o el producto según las reivindicaciones 2 a 5 para la administración a un vertebrado por medio de una vía de administración seleccionada del grupo que consiste en la vía intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intradérmica, subcutánea y el contacto con una superficie mucosa.

7. La unidad de transcripción o el producto para el uso según la reivindicación 6, en el que la superficie mucosa es una superficie mucosa respiratoria.

8. La unidad de transcripción según las reivindicaciones 1 ó 4-7 o el producto según las reivindicaciones 2 a 7 en el que la región promotora de la unidad de transcripción es de origen retroviral o de origen no retroviral.

9. La unidad de transcripción según las reivindicaciones 1 ó 4-8 o el producto según las reivindicaciones 2 a 8 en el que la unidad de transcripción se expresa directamente mediante factores de la célula hospedadora.

10. La unidad de transcripción o el producto según la reivindicación 5 o cualquier reivindicación dependiente de ella, en el que el mamífero es un ser humano.

11. El uso de una unidad de transcripción según las reivindicaciones 1 ó 4 a 10 para la fabricación de un medicamento para el uso en la inmunización de un mamífero para provocar una respuesta inmunitaria protectora contra un virus de inmunodeficiencia.

12. El uso de la reivindicación 11, en el que se administra una segunda unidad de transcripción al mamífero, en la que la segunda unidad de transcripción comprende ADN que codifica un antígeno Env de un virus de inmunodeficiencia unido de manera operable a ADN que es una región promotora.

13. El uso de la reivindicación 12, en el que el medicamento comprende el producto de las reivindicaciones 2 a 10.