Formulación estable liofilizada preparada mediante liofilización de una formulación acuosa,

que comprende:

una solución tampón de aproximadamente 5 a 25 mM de histidina con un pH variable entre 5,5 y 6,5,

alrededor de un 0,005% a un 0,03% de polisorbato,

alrededor de 100 a 300 mM de sucrosa, y

un anticuerpo IgG con una concentración de 50 mg/ml o superior,

en la que dicha formulación puede ser reconstituida con un líquido para formar una solución exenta de partículas que contenga anticuerpo IgG con una concentración de 50 mg/ml o superior, en un tiempo de 2 minutos o inferior, en la que el anticuerpo IgG es un anticuerpo monoclonal recombinante humanizado de la subclase IgG1 denominado "Daclizumab" que se une a la subunidad p55 del receptor IL-2 expresado en células T activadas y que tiene un peso de monómero de aproximadamente 150.000 daltons

Formulación farmacológica liofilizada estable de anticuerpos IgG Daclizumab.

Ámbito de la invención

La presente invención se refiere en términos generales al campo de la formulación farmacológica de anticuerpos IgG. Concretamente, la presente invención se refiere a una formulación estable, liofilizada y de alta concentración del anticuerpo IgG, en la que el anticuerpo IgG es un anticuerpo recombinante humanizado monoclonal de la subclase IgG1 denominado "Daclizumab", que se une a la subunidad p55 del receptor IL-2.

Antecedentes de la invención

Es bien conocido que muchas preparaciones de proteína preparadas para su administración en los seres humanos requieren estabilizadores para impedir su desnaturalización, agregación y otras alternancias de las proteínas con anterioridad a la utilización de la preparación. Muchas preparaciones de proteína resultan especialmente inestables en soluciones muy diluidas o altamente concentradas. Esta inestabilidad se manifiesta en la formación de agregados solubles/insolubles, y suele aumentar cuando la preparación de proteína se almacena o se transporta. Uno de los grandes desafíos que existen en el ámbito de los medicamentos proteínicos es el desarrollo de formulaciones que mantengan simultáneamente la estabilidad y la actividad de la proteína.

Concretamente, se reconoce que las inmunoglobulinas poseen características que tienden a formar agregados y partículas en solución, lo que exige el filtrado de estas formulaciones antes de utilizarlas para su inyección intravenosa. La formación de agregados y partículas proteínicas ha sido desde hace tiempo un problema en el desarrollo de productos de inmunoglobulina para administración parenteral. Existe en la técnica la necesidad de una formulación farmacológica estable que incluya un anticuerpo.

El documento WO 89/11297 describe un compuesto liofilizado que incluye un anticuerpo monoclonal de inmunoglobulina de 1 a 25 mg/ml, 2 a 10% maltosa, y un tampón de acetato sódico, fosfato o citrato con un pH de entre 3,0 y 6,0.

El Synagis^TM (MedIinmune) es un anticuerpo monoclonal humanizado IgG1 producido mediante tecnología de ADN recombinante que se dirige a un epítopo del emplazamiento antigénico A de la proteína T del virus sincitial respiratorio (RSV). El Synagis^TM es un compuesto formado por secuencias de anticuerpos humanas (95%) y de ratón (5%). El Synagis^TM se suministra como un producto estéril liofilizado para su reconstitución con agua esterilizada para su inyección. El Synagis^TM reconstituido debe mantenerse a temperatura ambiente durante un mínimo de 20 minutos hasta que se aclare la solución. El Synagis^TM reconstituido debe administrarse exclusivamente mediante inyección intramuscular. En el momento de la reconstitución, el Synagis^TM contiene los siguientes excipientes: 47 mM de histidina, 3,0 mM de glicina y 56% de manitol, y el ingrediente activo, el anticuerpo IgG1, a una concentración de 100 miligramos por vial. (Véase Physicians' Desk Reference®, Medical Economic Company, Inc., Montvale, New Jersey).

La solicitud de patente US 2001/0014326A1 describe una formulación de anticuerpo pre-liofilizado que contiene 25 mg/ml del anticuerpo anti-IgE, 5 mM de histidina, pH 6,0, 85 mM de sucrosa y 0,01% de polisorbato 20.

La patente estadounidense Nº 6171586 describe una formulación farmacológica acuosa estable que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo no sujeto a una liofilización previa, y un buffer de acetato de entre pH 4,8 a aproximadamente 5,5, un surfactante y un poliol, en la que la formulación carece de una cantidad tonificante de cloruro sódico.

El documento WO 97/45140 describe una preparación de anticuerpo monoclonal de un anticuerpo humanizado contra el antígeno CDw52, con una concentración de 100 mg/ml o superior, estando dicha preparación sustancialmente exenta de agregados.

Cleland, et al (J. Pharm. Sci., 90:310-321 (2001)) describen que se precisa una relación molar de 360:1 entre lioprotector y proteína para almacenar de forma estable un anticuerpo monoclonal liofilizado.

La publicación de la solicitud de patente estadounidense Nº 2006/0034827 A1 presenta la descripción del producto SYNAGIS®, que hace referencia a una formulación del anticuerpo IgG "Palivizumab" que se combina inmunoespecíficamente con un antígeno del virus sincitial respiratorio (RSV). Esta formulación comprende el anticuerpo en combinación con concentraciones específicas de histidina, manitol, y glicina, mientras que la formulación no incluye polisorbato o sucrosa. Además, la formulación reconstituida del SYNAGIS® debe mantenerse a temperatura ambiente durante un mínimo de 20 minutos hasta que la solución se aclara.

Es necesaria una preparación estable, liofilizada y de alta concentración del anticuerpo para su administración a seres humanos, pudiendo reconstituirse dicho anticuerpo en un breve período de tiempo, siendo adecuado para su administración parenteral, incluyendo la inyección intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o subcutánea.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a una formulación farmacológica estable liofilizada preparada a partir de una formulación acuosa con una elevada concentración, es decir, 50 mg/ml o superior de un anticuerpo IgG, en la que el anticuerpo IgG es un anticuerpo recombinante monoclonal humanizado de la subclase IgG 1 denominado "Daclizumab" en una solución tampón de histidina de alrededor de 5 a 25 mM (pH de entre 5,5 a 6,5), alrededor de un 0,005% a un 0,003% de polisorbato, y sucrosa, opcionalmente en combinación con serina, y/o manitol. Esta formulación conserva la estabilidad del anticuerpo IgG de la presente invención e impide que las inmunoglobulinas previstas para su administración en seres humanos formen agregados/partículas en el producto final. La formulación liofilizada se reconstituye con un líquido para formar una solución clarificada que contenga el anticuerpo IgG en una concentración de 50 mg/ml o superior en un tiempo de unos 2 minutos o inferior.

Esta formulación liofilizada es estable a temperatura ambiente durante al menos 3 meses, más preferiblemente 6 meses y más preferiblemente 1 año. La formulación liofilizada es también estable a 2 a 8ºC durante un año, y preferiblemente 2 años. Esta formulación liofilizada tiene un corto período de reconstitución de menos de 2 minutos, y resulta adecuada para su administración parenteral incluyendo la inyección intravenosa, intramuscular, intraperitoneal o subcutánea.

Breve descripción de las figuras

La figura 1 muestra el efecto de los excipientes sobre la estabilidad de los anticuerpos, mediante la comprobación (A) del líquido tras su almacenamiento a 55ºC durante 10 días, y (B) del liófilo a 40ºC durante 12 días.

Las figuras 2A y 2B muestran la comparación de las predicciones modelo y de la observación experimental correspondiente a las muestras de prueba 1 a 15.

La figura 2A muestra la bajada en % de monómero. La figura 2B muestra el tiempo de reconstitución.

Las figuras 3A y 3B muestran la comparación de las predicciones modelo y de la observación experimental para las muestras de control 16 a 20. La figura 3A muestra el % de bajada de monómero. La figura 3B muestra el tiempo de reconstitución.

La figura 4 muestra los coeficientes modelo de (A) el efecto principal, y (B) el efecto de interacción.

Las figuras 5A y 5B muestran simulaciones modelo representativas de manitol frente a sucrosa, [serina]=0. La figura 5A muestra el % de bajada de monómero. La figura 5B muestra el tiempo de reconstitución.

Las figuras 6A y 6B muestran simulaciones modelo representativas de manitol frente a serina, [sucrosa]=0. La figura 6A muestra el % de bajada de monómero. La figura 6B muestra el tiempo de reconstitución.

Las figuras 7A y 7B muestran simulaciones modelo representativas de sucrosa frente a serina, [manitol]=0.

La figura 7A muestra el % de bajada de monómero. La figura 7B muestra el tiempo de reconstitución.

Las figuras 8A y 8B muestran simulaciones modelo representativas de manitol frente a serina, [sucrosa]=100 mM. La figura 8A muestra el % de bajada de monómero. La figura 8B muestra el tiempo de reconstitución.

Las figuras 9A a 9C muestran el porcentaje de monómero en las formulaciones I, II y III en función del tiempo en (A) 5ºC, (B) 25ºC, y (C)...

1. Formulación estable liofilizada preparada mediante liofilización de una formulación acuosa, que comprende:

una solución tampón de aproximadamente 5 a 25 mM de histidina con un pH variable entre 5,5 y 6,5,

alrededor de un 0,005% a un 0,03% de polisorbato,

alrededor de 100 a 300 mM de sucrosa, y

un anticuerpo IgG con una concentración de 50 mg/ml o superior,

en la que dicha formulación puede ser reconstituida con un líquido para formar una solución exenta de partículas que contenga anticuerpo IgG con una concentración de 50 mg/ml o superior, en un tiempo de 2 minutos o inferior, en la que el anticuerpo IgG es un anticuerpo monoclonal recombinante humanizado de la subclase IgG1 denominado "Daclizumab" que se une a la subunidad p55 del receptor IL-2 expresado en células T activadas y que tiene un peso de monómero de aproximadamente 150.000 daltons.

2. Formulación estable liofilizada de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicha concentración de sucrosa está situada en torno a 100 a 200 mM.

3. Formulación estable liofilizada preparada mediante liofilización de una formulación acuosa, que comprende:

una solución tampón de aproximadamente 5 a 25 mM de histidina con un pH variable entre 5,5 y 6,5,

alrededor de un 0,005% a un 0,03% de polisorbato,

alrededor de 110 a 130 mM de sucrosa,

alrededor de 20 a 45 mM de manitol, y

un anticuerpo IgG con una concentración de 50 mg/ml o superior,

en la que dicha formulación puede ser reconstituida con un líquido para formar una solución exenta de partículas que contenga anticuerpo IgG con una concentración de 50 mg/ml o superior, en un tiempo de 2 minutos o inferior, en la que el anticuerpo IgG es un anticuerpo monoclonal recombinante humanizado de la subclase IgG1 denominado "Daclizumab" que se une a la subunidad p55 del receptor IL-2 expresado en células T activadas y que tiene un peso de monómero de aproximadamente 150.000 daltons.

4. Formulación estable liofilizada preparada mediante liofilización de una formulación acuosa, que comprende:

Una solución tampón de aproximadamente 5 a 25 mM de histidina con un pH variable entre 5,5 y 6,5,

alrededor de un 0,005% a un 0,03% de polisorbato,

alrededor de 80 a 130 mM de sucrosa,

alrededor de 7 a 55 mM de serina,

alrededor de 10 a 55 mM de manitol, y

un anticuerpo IgG con una concentración de 50 mg/ml o superior,

en la que dicha formulación puede ser reconstituida con un líquido para formar una solución exenta de partículas que contenga anticuerpo IgG con una concentración de 50 mg/ml o superior, en un tiempo de 2 minutos o inferior, en la que el anticuerpo IgG es un anticuerpo monoclonal recombinante humanizado de la subclase IgG1 denominado "Daclizumab" que se une a la subunidad p55 del receptor EL-2 expresado en células T activadas y que tiene un peso de monómero de aproximadamente 150.000 daltons.

5. Formulación estable liofilizada preparada mediante liofilización de una formulación acuosa, que comprende:

una solución tampón de aproximadamente 5 a 25 mM de histidina con un pH variable entre 5,5 y 6,5,

alrededor de un 0,005% a un 0,03% de polisorbato, alrededor de 100 a 130 mM de sucrosa,

alrededor de 15 a 55 mM de serina, y

un anticuerpo IgG con una concentración de 50 mg/ml o superior,

en la que dicha formulación puede ser reconstituida con un líquido para formar una solución exenta de partículas que contenga anticuerpo IgG con una concentración de 50 mg/ml o superior, en un tiempo de 2 minutos o inferior, en la que el anticuerpo IgG es un anticuerpo monoclonal recombinante humanizado de la subclase IgG1 denominado "Daclizumab" que se une a la subunidad p55 del receptor IL-2 expresado en células T activadas y que tiene un peso de monómero de aproximadamente 150.000 daltons.

6. Formulación estable liofilizada de acuerdo con la reivindicación 1, 3, 4 o 5, en la que dicha formulación es estable en torno a 22 a 28ºC durante al menos 3 meses.

7. Formulación estable liofilizada de acuerdo con la reivindicación 1, 3, 4 o 5, en la que dicha formulación es estable en torno a 2 a 8ºC durante al menos un año.

8. Formulación estable liofilizada de acuerdo con la reivindicación 1, 3, 4 o 5, en la que una solución reconstituida de la formulación es adecuada para su inyección subcutánea.

9. Formulación estable liofilizada de acuerdo con la reivindicación 1, 3, 4 o 5, en la que la solución reconstituida es isotónica.

10. Formulación estable liofilizada de acuerdo con la reivindicación 1, 3, 4 o 5, en la que la concentración de histidina varía entre 10 y 20 mM.

11. Formulación estable liofilizada de acuerdo con la reivindicación 1, 3, 4 o 5, en la que la formulación acuosa comprende 20 mM de histidina, un 0,015% de polisorbato Tween®80, 117 mM de sucrosa, y "Daclizumab" a una concentración de 50 mg/ml.

12. Formulación estable liofilizada de acuerdo con la reivindicación 1, 3, 4 o 5, en la que la formulación acuosa comprende 20 mM de histidina, un 0,025% de polisorbato Tween®80, 190 mM de sucrosa, y "Daclizumab" a una concentración de 80 mg/ml.

13. Formulación estable liofilizada de acuerdo con la reivindicación 1, 3, 4 o 5, en la que la formulación acuosa comprende 20 mM de histidina, un 0,015% de polisorbato Tween®80, 117 mM de sucrosa, y "Daclizumab" a una concentración de 80 mg/ml.