PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACION DE CULTIVOS BACTERIANOS PROBIOTICOS ANALERGICOS Y USO RELACIONADO.

Uso de al menos un cultivo bacteriano probiótico analérgico para la preparación de un producto alimenticio o una formulación farmacéutica concebida para personas particularmente sensibles a las sustancias alergizantes,

en el que dicho cultivo bacteriano se obtiene por un procedimiento que incluye al menos una etapa en la que las bacterias están en contacto con un medio de cultivo analérgico

Procedimiento para la preparación de cultivos bacterianos probióticos analérgicos y uso relacionado.

El objetivo de la presente invención es un procedimiento para la preparación de cultivos bacterianos probióticos analérgicos.

Se sabe que el tracto gastrointestinal (GI) humano contiene una comunidad microbiana compleja, llamada microbiota, que consta principalmente de bacterias estrictamente anaeróbicas capaces de desempeñar diferentes acciones con efectos que afectan a nivel gastrointestinal local e indirectamente a nivel sistémico general, que implican casi todo los órganos y las funciones del huésped.

La microflora intestinal, que consta de una gran diversidad de diferentes especies (400-500) capaces de colonizar tanto la mucosa intestinal como las partículas de alimento ingerido, es entonces capaz de condicionar en gran medida la salud del individuo.

La composición de la microflora intestinal puede alterarse por varios factores, tales como la edad, el estado fisiológico del individuo, la presencia de diferentes patologías, el estrés y por encima de todo la dieta.

Como consecuencia de factores negativos endógenos y exógenos, hay una disminución de las bacterias útiles (típicamente bacterias que pertenecen al grupo ácido lácticas en el intestino delgado y bifidobacterias en el intestino grueso) y un aumento de las enterobacterias, estreptococos y clostridios patógenos.

La administración de probióticos específicos a través de especialidades medicinales, dietéticos, integradores y por encima de todo el alimento (los llamados alimentos "funcionales" o "nutracéuticos") permite re-equilibrar la microflora del huésped, restaurando una funcionalidad intestinal óptima.

El término "probiótico" se refiere habitualmente a microorganismos vivos, seleccionados entre la microflora intestinal de individuos sanos, que una vez administrados en cantidades oportunas y durante un tiempo adecuado, son capaces de colonizar, también en casos solamente temporales, los diferentes tractos del intestino y de conferir un efecto beneficioso a la salud del organismo huésped.

Pertenecen a los probióticos principalmente algunas especies de los géneros Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus, Pediococcus, Lactococcus, Propionibacterium, Leuconostoc y, en menor medida, Saccharomyces, Bacillus y Enterococcus.

Entre los efectos saludables y beneficiosos, mostrados por rigurosos ensayos clínicos realizados en todo el mundo e inducidos en el consumidor por la ingesta de probióticos pueden mencionarse:

1. Estimulación del sistema inmune;

2. Inducción de efectos antimutagénicos y antigenotóxicos;

3. Acción antitumoral y antimetastásica que se refiere, por ejemplo, a:

4. Mejora de la absorción de nutrientes;

5. Disminución de los síntomas de intolerancia a la lactosa;

6. Mejora de la motilidad intestinal debido a la disminución del pH y disminución del estreñimiento;

7. Disminución de la absorción de colesterol y grasas;

8. Actividades anti-diarréicas, anti-hipertensivas, anti-diabéticas que inhiben infecciones del sistema urogenital femenino;

9. Actividad de prevención de patologías geriátricas.

Los probióticos para uso oral deben caracterizarse por los siguientes requisitos generales y funcionales:

i) origen intestinal humano; de individuos en buen estado de salud;

ii) bio-seguridad; no deben causar efectos secundarios especialmente en personas debilitadas o inmunodeprimidas;

iii) resistencia y viabilidad; deben tener características de resistencia para ser capaces de sobrevivir al jugo gástrico, las secreciones pancreáticas y biliares de modo que alcancen el íleo y el colon de forma intacta y aún perfectamente viables.

La competición que comienza entre los microorganismos probióticos y la microflora patógena solamente puede suceder si, una vez ingeridos, los microorganismos probióticos son capaces de alcanzar el tracto intestinal y por lo tanto de sobrevivir a la acidez gástrica y la elevada concentración de sales biliares. Generalmente, una vez han alcanzado el tracto intestinal, se dice que empiezan a través de mecanismos de adhesión que implican proteínas y/o carbohidratos con funcionalidades de adhesión específica a las vellosidades intestinales.

A nivel industrial, los probióticos se producen en forma de cultivos bacterianos liofilizados, concretamente se determina el crecimiento de las células en un medio apropiado (fermentación) y después, tras la concentración y purificación de la biomasa, se realiza la deshidratación de la misma por liofilización. Dicho procedimiento es necesario para permitir que las bacterias se reproduzcan por sí mismas en una cantidad adecuada (etapa fermentativa) y para conservarse a sí mismas durante un largo tiempo (etapa de liofilización).

Para que el procedimiento fermentativo se realice satisfactoriamente y con rendimientos adecuados, es necesario proporcionar a las células fuentes de carbono y nitrógeno, oligoelementos y bioactivadores en cantidades oportunas.

Tradicionalmente, en el tratamiento con las habitualmente llamadas bacterias "lácticas", los sustratos seleccionados usados como fuente de nitrógeno son suero, proteínas séricas de la leche, hidrolizados y peptonas de caseína, caseinatos, etc., mientras que como fuente de carbono, habitualmente se emplea lactosa y glucosa, ya que se pueden metabolizar fácilmente por casi todos los organismos vivos.

La Solicitud de Patente Europea EP 1852498 A1, describe un procedimiento para preparar bacterias ácido lácticas que tienen una elevada actividad anti-alérgica que comprende cultivar las bacterias ácido lácticas en un medio que contiene hidrolizado de caseína.

La Solicitud WO2005/010170 A2 describe un medio de fermentación que comprende un sustrato proteico altamente hidrolizado, estando dicho sustrato caracterizado porque consta de péptidos de bajo peso molecular y un elevado porcentaje de aminoácidos libres.

La Solicitud de Patente US 2005/214270 proporciona un agente anti-alérgico que contiene, como ingrediente activo, bacterias ácido lácticas seleccionadas entre el grupo constituido por bacterias ácido lácticas de las especies Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermentum, y combinaciones de las mismas. El agente anti-alérgico es capaz de mejorar la diátesis alérgica reduciendo el nivel de IgE, que contribuye al desarrollo de alergia de Tipo I, y es fácil de tomar y muy seguro.

En los últimos años, también probablemente a causa de una dieta muy poco variada y demasiado rica en proteína y lípidos, en países de Europa y países occidentales se ha registrado un sensible aumento de la cantidad de personas que padecen patologías de tipo alérgicas.

Las reacciones inmunes de tipo IV o mediadas por IgE se llaman "alérgicas", durante las cuales, después de un primer contacto de sensibilización (que puede suceder en cualquier momento de la vida, también en un momento intrauterino) se producen IgE específicas con un mecanismo mediado por histamina.

Dichas reacciones también pueden estar causadas por dosis extremadamente reducidas de moléculas llamadas "alergenos", con consecuencias clínicas que pueden cambiar desde simples reacciones cutáneas ligeras a choque anafiláctico y muerte.

Debido a la peligrosidad de estas sustancias para algunas personas, la Comunidad Europea ha adoptado una norma de modo que tiene que mostrarse claramente "el uso en la producción y la presencia en el alimento" en la etiqueta de alimentos que pertenecen a las siguientes clases (Anexo III bis del anterior mandamiento) (art. 6 sub. 10, mandamiento 2000/13/EC por tanto modificado por el mandamiento 2003/89/EC):

1. Uso de al menos un cultivo bacteriano probiótico analérgico para la preparación de un producto alimenticio o una formulación farmacéutica concebida para personas particularmente sensibles a las sustancias alergizantes, en el que dicho cultivo bacteriano se obtiene por un procedimiento que incluye al menos una etapa en la que las bacterias están en contacto con un medio de cultivo analérgico.

2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicha sustancia alergizante es de tipo gluten y/o lácteo.

3. El uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dichas personas sensibles son gente afectada por la enfermedad celíaca.

4. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que en dicha al menos una etapa, las bacterias de dicho cultivo, seleccionadas entre el grupo que incluye el género Lactobacillus, Bifidobacterium, Streptococcus, Pediococcus, Lactococcus, Propionibacterium, Bacillus, Saccharomyces, Enterococcus, Leuconostoc, se producen a través de un desarrollo en un sustrato analérgico.

5. El uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que las bacterias de dicho cultivo se seleccionan entre el grupo que comprende las siguientes especies bacterianas: L. pentosus, L. plantarum, L. casei, L. casei ssp. paracasei, L. casei ssp. rhamnosus, L. acidophilus, L. delbrueckii ssp. bulgaricus, L. fermentum, L. gasseri, B. longum. B. breve, B. lactis, B. adolescentis y B. pseudocatenulatum, L. lactis y L. lactis ssp. lactis, S. thermophilus; preferiblemente, dichas bacterias se seleccionan entre el grupo que incluye las siguientes cepas bacterianas probióticas:

6. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el sustrato de cultivo analérgico incluye al menos una peptona y/o un hidrolizado proteico, seleccionándose la peptona y/o el hidrolizado proteico preferiblemente entre el grupo que incluye peptona y/o hidrolizado proteico de origen vegetal y/o animal.

7. El uso de acuerdo con la reivindicación 6, en el que la peptona de origen vegetal se selecciona entre el grupo que incluye: arroz, patata, maíz, castañas, tapioca, mandioca, guisantes, habas, legumbres y/o sus mezclas, y la peptona de origen animal se selecciona entre las peptonas de carne.

8. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el sustrato de cultivo analérgico incluye al menos una sustancia seleccionada entre: glucosa y/o mono- o di-sacárido derivado de la hidrólisis de polisacárido complejo, obteniéndose la glucosa de almidón de maíz, almidón de patata o de sacarosa de remolacha o caña.

9. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones precedentes, en el que el sustrato de cultivo analérgico incluye: glucosa de acuerdo con la reivindicación 8, al menos una peptona de carne de acuerdo con la reivindicación 7 y al menos una peptona de origen vegetal de acuerdo con la reivindicación 7; preferiblemente peptona de arroz.

10. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones precedentes, en el que dichas bacterias en contacto con dicho sustrato de cultivo analérgico se someterte a una etapa de fermentación y posterior liofilización.

11. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones precedentes, en el que los cultivos bacterianos probióticos obtenidos son cultivos bacterianos probióticos analérgicos que contienen una cantidad de alergenos por debajo del límite de detección: 3 ppm para el gluten, 7 ppm para la lactosa y 0,05 ppm para las lactoglobulinas.

12. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho cultivo se obtiene por un procedimiento que incluye al menos una etapa en la que las bacterias se producen con un sustrato de cultivo analérgico previamente sometido a un pre-tratamiento enzimático para eliminar las trazas de alergenos existentes por contaminación cruzada o no intencionada.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que dicho pre-tratamiento enzimático prevé el uso de al menos una enzima proteolítica y/o al menos una enzima de glucósidos; preferiblemente, la enzima proteolítica se selecciona entre el grupo que incluye proteasas y/o peptidasas, y la enzima de glucósidos se selecciona entre el grupo que incluye alfa-glucosidasa y beta-glucosidasa, alfa-galactosidasa y beta-galactosidasa.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 13, en el que las proteasas y/o peptidasas se seleccionan entre el grupo que incluye: tripsina, quimiotripsina, pancreatina, pepsina, papaína y bromelaína; preferiblemente entre pepsina y/o bromelaína.

15. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 12 a 14, en el que el pre-tratamiento enzimático incluye el uso de al menos un proteasa y al menos una glucosidasa.

16. El uso de acuerdo con la reivindicación 15, en el que la proteasa se selecciona entre alcalasa y bromelaína y la glucosidasa se selecciona entre lactasa o beta-galactosidasa.

17. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 12 a 16, en el que el pre-tratamiento enzimático incluye el uso sucesivamente de: una alcalasa, una lactasa y la bromelaína.

18. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 12 a 17, en el que:

- la alcalasa y dicho sustrato analérgico se tratan a una temperatura entre 45ºC y 55ºC, durante un tiempo entre 15 y 60 minutos a un pH incluido entre 7 y 8; preferiblemente, 7,5pm0,20;

- la lactasa y dicho sustrato de cultivo analérgico se tratan a una temperatura entre 30ºC y 40ºC, durante un tiempo entre 2 y 6 horas a un pH incluido entre 6 y 7; preferiblemente, 6,5pm0,20;

- la bromelaína y dicho sustrato de cultivo analérgico se tratan a una temperatura entre 30ºC y 40ºC, durante un tiempo entre 1 y 6 horas a un pH incluido entre 5 y 6.

19. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 12 a 18, en el que al final del pre-tratamiento enzimático, se prevén una etapa en la que se restaura el pH a valores adecuados para la fermentación de las cepas individuales, una etapa de tratamiento con calor a una temperatura incluida entre 90ºC y 145ºC para desnaturalizar e inactivar las enzimas usadas en dicho pre-tratamiento enzimático y una etapa de fermentación de dichas cepas seleccionadas entre las descritas en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

20. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 12 a 19, en el que el sustrato de cultivo analérgico incluye al menos una peptona y/o un hidrolizado proteico, seleccionándose la peptona y/o el hidrolizado proteico preferiblemente entre el grupo que incluye peptona y/o hidrolizado proteico de origen vegetal y/o animal.

21. El uso de acuerdo con la reivindicación 20, en el que la peptona de origen vegetal se selecciona entre el grupo que incluye: arroz, patata, maíz, castañas, tapioca, mandioca, guisantes, habas y sus mezclas, y la peptona de origen animal se selecciona entre peptonas de carne.

22. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 12 a 21, en el que el sustrato de cultivo analérgico incluye al menos una sustancia seleccionada entre: glucosa y/o mono- o di-sacárido derivado de la hidrólisis de polisacáridos complejos, glucosa que se obtiene de almidón de maíz, patata o sacarosa de remolacha o caña.

23. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 12 a 22, en el que el sustrato de cultivo analérgico incluye: glucosa de acuerdo con la reivindicación 22, al menos una peptona de carne de acuerdo con la reivindicación 21 y al menos una peptona de origen vegetal de acuerdo con la reivindicación 21; preferiblemente peptona de arroz.

24. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 12 a 23, en el que dichas bacterias en contacto con dicho sustrato de cultivo analérgico se someten a una fermentación y a etapas posteriores de liofilización.

25. El uso de acuerdo con una o más de las reivindicaciones 12 a 24, en el que los cultivos bacterianos probióticos obtenidos son cultivos bacterianos probióticos analérgicos que contienen una cantidad de alergenos por debajo del límite de detección: 3 ppm para el gluten, 7 ppm para la lactosa y 0,05 ppm para las beta-lactoglobulinas.