COMPUESTOS BASADOS EN GLUCOSA CON AFINIDAD POR LA P-SELECTINA.

Compuestos con afinidad y/o selectividad para la P-selectina, representados por la siguiente Fórmula Ia:

** ver fórmula** y sus estereoisómeros, representados por la siguiente Fórmula Ib: ** ver fórmula** X representa -O-, -CH 2-, -OCH 2-, -S-, -SCH 2-, -NH- o -NHCH 2, R 1 representa QR 4 , donde Q representa -O-, -NH-, -NH-(C=O)-, -O-(C=O), -NH-(C=O)-O o -NH-(C=O)- NH- y donde R 4 representa un grupo alquilo lineal o ramificado o un grupo arilo o un grupo aralquilo o alcarilo lineal o ramificado; grupos que pueden contener uno o más heteroátomos; los grupos pueden estar sustituidos; R 2 es un grupo fosfato, un grupo fosfonato, un grupo carboxilato o un grupo sulfonato, y R 3 representa OH o YR 5 , donde Y es -O-, -CH 2 o -NH- y R 5 es un grupo alquilo lineal o ramificado o un grupo arilo o un grupo aralquilo o alcarilo lineal o ramificado; grupos que pueden contener uno o más heteroátomos; los grupos pueden estar sustituidos

Compuestos basados en glucosa con afinidad por la P-selectina.

La presente invención se refiere a compuestos derivados de azúcar que se unen selectivamente a la molécula de adhesión P-selectina humana, a la utilización de estos compuestos para la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de trastornos relacionados con la P-selectina, a conjugados, vehículos farmacéuticos y sistemas de suministro del medicamento que comprenden dichos compuestos y a un método para determinar si un compuesto tiene la capacidad de unirse a la P-selectina.

Antecedentes de la invención

En los últimos años, las moléculas de adhesión de la superficie celular han sido reconocidas como mediadores clave en numerosos procesos celulares, incluyendo el crecimiento celular, la diferenciación, la transmigración y la respuesta de las células inmunes y metástasis del cáncer.

Se han identificado cuatro categorías principales de moléculas de adhesión: moléculas de adhesión celular de la superfamilia de las inmunoglobulinas (CAMs), cadherinas, integrinas y selectinas.

Actualmente, las selectinas representan una familia de tres glicoproteínas transmembrana de unión a carbohidrato: E-selectina "endotelial", L-selectina "leucocitaria" y P-selectina "plaquetaria". Las tres selectinas son dependientes de cationes divalentes (por ejemplo de calcio) y poseen un dominio extracelular con un motivo de reconocimiento de carbohidrato, un motivo de tipo factor de crecimiento epidérmico y algunos dominios más pequeños relacionados con proteínas reguladoras de complemento.

La P-selectina humana (también denominada GMP-140, LECAM-3, PADGEM, CD62 y CD62P) es expresada por las plaquetas y las células endoteliales. Cuando se expresa en la superficie de estas células, su efecto más notable es la ralentización de los leucocitos cuando dejan los capilares y penetran en las vénulas postcapilares, representando esto último el principal sitio de adhesión leucocitaria al endotelio. El proceso de ralentización se observa por el rodamiento de los leucocitos, lo que significa una adhesión inicial con afinidad relativamente baja. La adhesión firme de los leucocitos rodantes es mediada esencialmente por las integrinas.

La P-selectina de las células endoteliales se almacena en los cuerpos de Weibel-Palade; en las plaquetas se encuentra en los gránulos-a. Después de la activación, la P-selectina se moviliza en las superficies celulares en pocos minutos en respuesta a una variedad de agentes inflamatorios o trombogénicos. La principal función de la P-selectina endotelial consiste en reclutar leucocitos en las vénulas postcapilares, mientras que la P-selectina plaquetaria resulta también en la formación de trombos. Uno de los ligandos naturales actualmente conocidos de la P-selectina es el PSGL-1 (ligando-1 de la glicoproteína P-selectina), sialoproteína de 120 kDa expresada en la superficie de los leucocitos, donde está concentrada en el urópodo. Descripciones más detalladas de la estructura y las funciones de la P-selectina se encuentran en numerosas publicaciones (por ejemplo J. Panes, Pathophysiology 5:271 (1999); F. Chamoun y col., Frontiers in Bioscience 5: e103 (1 de Nov., 2000) y S.-L Hayachi, Circulation 102: 1710 (2000)).

La inflamación y los procesos inflamatorios desempeñan un importante papel en la patofisiología de numerosas enfermedades y condiciones. Las condiciones del cerebro en las que se encontraron niveles incrementados de selectina y que, por tanto, pueden implicar eventos patofisiológicos mediados por la selectina, incluyen lesiones cerebrales traumáticas severas, esclerosis múltiple de recaída-remisión, oclusión de la arteria cerebral, isquemia y ataque de apoplejía. Las condiciones cardiacas en las que se sugiere que las selectinas desempeñan un papel incluyen infarto del miocardio agudo, daño arterial, tal como el producido por la angioplastia y la isquemia. De forma similar, las selectinas están implicadas en condiciones renales, tales como el daño renal por isquemia y reperfusión y la insuficiencia renal. Además, parece que las selectinas desempeñan un papel en el rechazo de los transplantes de órganos, isquemia fría, shock hemorrágico, shock séptico, metástasis tumoral, inflamación crónica, artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria del intestino, aterosclerosis, restenosis, angiogénesis, coagulación intravascular diseminada, síndrome del agotamiento respiratorio en adultos y shock circulatorio.

Por tanto, parece factible mejorar estas y otras condiciones que implican la activación de las células endoteliales así como los leucocitos y específicamente la movilización y expresión de la P-selectina mediante la interrupción específica de las cascadas de P-selectinas. Esto se puede llevar a cabo, por ejemplo, mediante la administración de ligandos que se unen selectivamente a la P-selectina humana, pero que no poseen su bioactividad. Por este método, la P-selectina movilizada podría inactivarse y se podría prevenir el daño de los tejidos inducido por los leucocitos. Potencialmente, se podría conseguir el mismo efecto mediante la terapia genética, siempre que el ligando de P-selectina o el antagonista sea un péptido o un péptido modificado. De acuerdo con este método, las células somáticas de una persona con necesidad de terapia serían transfectadas con un vector de expresión portador de una secuencia de ADN que codifica un antagonista de la P-selectina.

Los ligandos o antagonistas de la P-selectina se pueden utilizar también para la prevención de las enfermedades y condiciones descritas más arriba. Además, estos ligandos pueden ser útiles también en el diagnóstico in vivo o in vitro de estas enfermedades.

Se han realizado varios intentos en los últimos años para identificar o crear dichos ligandos selectivos de la P-selectina. Hasta ahora, se ha sometido a prueba una cantidad de sustancias, pero ningún estudio clínico ha proporcionado todavía la evidencia concluyente de que alguno de estos compuestos produce los efectos clínicos deseados al mismo tiempo que es tolerable en términos de efectos secundarios.

Por ejemplo, se descubrió que los anticuerpos P-selectina, que han sido producidos y probados en modelos animales, protegían los riñones contra el daño por isquemia-reperfusión (H.C. Rabb y col., JASN 5: 907, 1997; US-A-6.033.667). En otro estudio, una forma recombinante soluble del ligando-1 de la glicoproteína P-selectina (rPSGL-Ig) se utilizó para inhibir la trombosis en gatos (M.J. Eppihimer y col., Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology 20: 2483, 2000). La WO-A-99/41363 describe proteínas del tipo podocalixina que se unen a las selectinas. La WO-A-00/41711 describe varios péptidos más pequeños o secuencias peptídicas que se unen a miembros de la familia humana de las selectinas; la mayoría de las secuencias comprenden una o más unidades de leucina o isoleucina.

A modo de otra aproximación para inhibir la cascada de las P-selectinas, se descubrió que varios péptidos procedentes del dominio lectina de la familia de selectinas inhibían la adhesión neutrófila a la P-selectina (por ejemplo US-A-6.111.065 y la US-A-5.916.876); estos péptidos se unen probablemente a los receptores de la P-selectina en los leucocitos.

En la WO-A-94/05269 se describen péptidos que inhiben la unión de selectinas tales como P-selectina, E-selectina y L-selectina. Estos péptidos tienen, como región de su núcleo, partes de la secuencia de 11-18 aminoácidos de la P-selectina, la E-selectina o la L-selectina. Además, la WO-A-95/31210 se refiere a péptidos y compuestos que se unen a selectinas incluida la molécula de adhesión del leucocito al endotelio 1 (ELAM-1). Estos péptidos se utilizan para bloquear la adhesión de los leucocitos a las selectinas, es decir, especialmente la E-selectina, pero también la P-selectina o la L-selectina, con el propósito de inhibir la inflamación.

En la solicitud de patente no republicada del solicitante WO 03/020753 y la solicitud internacional pendiente WO 2004/018502 (PCT/EP03/07260), se describen nuevos compuestos con regiones de núcleo peptídico y ciertos motivos consenso que son esenciales para reconocer la P-selectina. Por contraste a la mayoría de otras sustancias conocidas, que son afines a las selectinas, estos compuestos poseen un alto grado de especificidad para la P-selectina. Se sabe poco todavía sobre la estabilidad de estos compuestos in vitro e in vivo y, como en el caso de la mayoría de los péptidos terapéuticos o de diagnóstico, para que se vuelvan eficaces estos compuestos deben...

1. Compuestos con afinidad y/o selectividad para la P-selectina, representados por la siguiente Fórmula Ia:

y sus estereoisómeros, representados por la siguiente Fórmula Ib:

donde:

        X        representa -O-, -CH₂-, -OCH₂-, -S-, -SCH₂-, -NH- o -NHCH₂,

        R¹        representa QR⁴, donde Q representa -O-, -NH-, -NH-(C=O)-, -O-(C=O), -NH-(C=O)-O o -NH-(C=O)-NH- y donde R⁴ representa un grupo alquilo lineal o ramificado o un grupo arilo o un grupo aralquilo o alcarilo lineal o ramificado; grupos que pueden contener uno o más heteroátomos; los grupos pueden estar sustituidos;

        R²        es un grupo fosfato, un grupo fosfonato, un grupo carboxilato o un grupo sulfonato, y

        R³        representa OH o YR⁵, donde Y es -O-, -CH₂ o -NH- y R⁵ es un grupo alquilo lineal o ramificado o un grupo arilo o un grupo aralquilo o alcarilo lineal o ramificado; grupos que pueden contener uno o más heteroátomos; los grupos pueden estar sustituidos.

2. Compuestos según la reivindicación 1, caracterizados porque X es -OCH₂- o -CH₂-.

3. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizados porque Q representa -NH-(C=O)-.

4. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizados porque R² es un grupo fosfato.

5. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizados porque R³ representa OH.

6. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizados porque R⁴ está sustituido con un grupo seleccionado de entre el grupo consistente en nitro, -(C=O)-alquilo, ciano, -SO₃H, CCl₃ o CF₃.

7. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizados porque R⁴ es un grupo fenilo o naftaleno.

8. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizados porque R⁵ es una fracción de anclaje capaz de anclar el compuesto a un vehículo coloidal o microparticulado de medicamento.

9. Compuestos según la reivindicación 8, caracterizados porque la fracción de anclaje es un péptido o fracción peptidomimética que tiene afinidad por la P-selectina.

10. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 como agente de diagnóstico o medicamento.

11. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 como antagonista de la P-selectina.

12. Compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 como agente diana para suministrar un compuesto farmacéuticamente activo a una célula o a un tejido que expresa la P-selectina.

13. Utilización de los compuestos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en la fabricación de un medicamento para el diagnóstico, la prevención o la inhibición de una enfermedad o condición que implica la activación o sobreexpresión de la P-selectina.

14. Composición farmacéutica que comprende, en un vehículo farmacéuticamente aceptable, un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una sal o un solvato del mismo.

15. Método in vitro para determinar si un compuesto es capaz de unirse a la P-selectina o a un equivalente funcional de la P-selectina, que comprende la puesta en contacto y la incubación del compuesto a ensayar y una cantidad predeterminada de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 con una cantidad predeterminada de P-selectina o de dicho equivalente funcional de la P-selectina y determinación posterior de la cantidad del mismo compuesto.