COMPOSICIONES INMUNOGENAS DE LHLR Y PROCEDIMIENTO QUE SE REFIEREN A LAS MISMAS.

Una composición que comprende un conjugado de LHRH-toxoide de difteria adsorbido en un polisacárido iónico,

en la que dicha LHRH es el péptido representado por SEQ ID NO:2

Composiciones inmunógenas de LHLR y procedimiento que se refieren a las mismas.

La presente invención se refiere, en general, a una composición inmunógena de LHLR. La presente invención es útil, entre otros, como agente profiláctico y/o terapéutico para la modificación de la fertilidad y los patrones de comportamiento de animales, la consecución de ganancias en la producción de ganado, tales como aumento del crecimiento, disminución de las proporciones de conversión de alimentos o el control de características organolépticas no deseadas o el tratamiento de trastornos de los órganos reproductores.

Detalles bibliográficos de las publicaciones a las que se hace referencia por autores en esta memoria se recogen al final de la descripción. Los Números de Identidad de Secuencia (SEQ ID NOs.) para las secuencias de aminoácidos a las que se hace referencia en la memoria se definen a continuación de la bibliografía.

A lo largo de esta memoria y las reivindicaciones que siguen, salvo que el contexto requiera otra cosa, la palabra "comprenden", y variaciones tales como "comprende" y "comprendiendo", se entenderá que implica la inclusión de una unidad completa o etapa o grupo de unidades completas o etapas declarados pero no la exclusión de cualquier otra unidad completa o etapa o grupo de unidades completas o etapas.

La vacunación contra la hormona hipotalámica hormona liberadora de hormona luteinizante (a la que se hacer referencia en este documento como "LHRH", también conocida como GnRH) se ha demostrado que es un método inmunológico de controlar la reproducción desde principio de los años 1970 (Faser 1975, Jeffcoate y col. 1982). Suscitando una respuesta inmunitaria a LHRH se previene la liberación desde la pituitaria anterior de las hormonas LH y FSH, que se requieren para el desarrollo y mantenimiento de las gónadas - los testículos en el macho y los ovarios en la hembra -. De este modo, la reducción de los niveles de LH y FSH conduce a la pérdida de la función reproductora.

Las operaciones de des-sexuación (o castración) son las operaciones quirúrgicas más ampliamente practicadas en medicina veterinaria y en gestión de explotación ganadera. Una proporción significativa de ambos sexos de ganado doméstico y animales de compañía se somete con regularidad a extirpación quirúrgica del sexo para prevenir diversas características no deseables que acompañan a la madurez sexual. Los caracteres incluyen combatividad, inquietud, comportamiento sexual, pérdida de salud, tumores de los órganos reproductores y preñez.

El control del comportamiento de apareamiento mediante vacunación con vacunas de conjugado de LHRH en animales de compañía tales como perros, gatos y caballos, y en el ganado específicamente en cerdos machos y en reses de vacuno machos y hembras, ha sido identificado por el inventor como una meta tan significativa como el control de la fertilidad.

De modo similar, el control y tratamiento de trastornos de las gónadas y otros órganos reproductores, tanto de seres humanos como de animales, tales como cáncer testicular, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer ovárico, agrandamiento o endometriosis de próstata son importantes.

El primer informe publicado sobre vacunación con vacuna de conjugado de LHRH en conejos mostró que se logró un efecto drástico en el desarrollo de los testículos. Los primeros informes de la aplicación de una vacuna de LHRH en cerdos (Falvo y col., 1986, Caraty and Bonneau 1986), mostraron que formulaciones eficaces basadas en LHRH 1-10 conjugada con globulina de suero humano o albúmina de suero bovino podían controlar el desarrollo de los testículos y el olor a verraco. Awonyl y col., (1988), mostraron que el efecto de la vacunación de cerdos contra LHRH afectó principalmente al desarrollo de los testículos. Todas estas pruebas se hicieron sobre un número pequeño de animales, sin informes de eficacia.

Se ha intentado resolver los problemas de variabilidad de vacunas de conjugados de LHRH para controlar el olor a verraco incorporando genéticamente secuencias de aminoácidos de LHRH en proteínas vehículo, que incluyen el gen pilin de E. coli (Zee y col., 1995) y en un gen truncado de leucotoxina de Pasteurella haemolytica (Potter y col., 1997). Estas proteínas de fusión se producen como moléculas recombinantes y no por acoplamiento bioquímico. Las pruebas han mostrado que estas proteínas recombinantes funcionan como vacunas de inmunocastración. Sin embargo, no han dado como resultado vacunas comercialmente disponibles y los informes de las revistas especializadas dan a entender menos eficacia de la deseada.

En consonancia con la naturaleza menos que perfecta de las vacunas subunitarias altamente desarrolladas y ampliamente aplicadas para la prevención de enfermedades, las vacunas de inmunocastración basadas en conjugados específicos de LHRH-proteína también se ha mostrado que son menos que perfectas para inducir anticuerpo para LHRH o para reducir hormonas u otros parámetros asociados con funciones reproductoras. Ha habido un reconocimiento general de una amplia variación en la inducción eficaz de anticuerpo para LHRH con una diversidad de vacunas de conjugados de LHRH (Meloen y col., 1994).

La vacunación de reses con conjugado de péptido LHRH 1-10 - albúmina de suero humano en adyuvante de Freund (Robertson y col., 1982), dio buenas respuestas de anticuerpo a LHRH después de 2 vacunaciones en sólo 5 de 10 reses vacunadas. Incluso en vacunaciones de refuerzo, las que respondieron de modo mediocre no mantuvieron concentraciones de anticuerpos o han suprimido la testosterona. Una vacuna desarrollada comercialmente para reses (Vaxstrate), solamente fue eficaz al 80% (Hoskinson y col., 1990).

Experimentos en ratones (Sad y col., 1991) han mostrado que las respuestas a conjugados de LHRH tienen base genética. La vacuna fue un péptido de LHRH 1-10, con la sustitución de D-lisina en lugar de L-glicina en la posición 6, conjugado con toxoide de difteria y adyuvado con alúmina. Algunas razas de ratones respondieron bien, mientras que otras mostraron supresión de anticuerpo de LHRH. Estos resultados condujeron a los expertos en la técnica de formulación de vacunas a esperar que una proporción significativa de una población no consanguínea fallaría en responder o respondería mediocremente a la vacuna de tipo subunitario de conjugado de LHRH.

La vacunación de cerdos macho ha dado resultados variables de supresión de desarrollo de testículos y supresión de olor a verraco. Bonneau y colaboradores han mostrado (Boneau y col., 1994) que un conjugado de LHRH 1-10 - a globulina administrado en emulsión oleosa para vacunación primaria y adyuvante de saponina para vacunación de refuerzo dio respuesta de anticuerpo solamente en 90% de 20 cerdos vacunados. Los niveles de testosterona se suprimieron solamente en 16/20 vacunados (75%). Así pues, la calidad tanto como la cantidad de anticuerpo es importante para determinar la eficacia de una vacuna basada en conjugado de LHRH. Hagen y col., (1988) reivindicaron que la vacunación de 6 verracos con un conjugado de LHRH-albúmina de suero bovino (BSA) en adyuvante de Freund podía reducir el olor a verraco. Sin embargo, 2/6 verracos tuvieron respuestas de anticuerpos bajas y tuvieron espermatogénesis y función testicular normales. Los niveles de escatol no fueron afectados por la vacunación contra LHRH. Por consiguiente, hay necesidad de desarrollar una vacuna de LHRH que sea sistemáticamente mucho más eficaz que las utilizadas hasta la fecha.

Finnerty y colaboradores (J. Reprod. Fertil. 101: 333-343 (1994)) han mostrado que un protocolo para la inmunización de toros es 1,0 mg de conjugado de LHRH-HSA en adyuvante de DEAE-dextrano con un intervalo primaria-refuerzo de 56 días.

En el trabajo que ha conducido hasta la presente invención, el inventor ha determinado que la eficacia de la vacunación contra LHRH se mejora significativamente cuando se administra LHRH como conjugado con toxoide de difteria y un polisacárido iónico.

Por consiguiente, la invención proporciona una composición que comprende un conjugado de LHRH-toxoide de difteria adsorbido en un polisacárido iónico, en el que dicha LHRH es el péptido representado por SEQ ID NO:2.

La referencia a un "polisacárido iónico" debería entenderse como una referencia a cualquier polisacárido cargado positiva o negativamente o derivado o equivalente químico del mismo. La referencia a "derivado" y "equivalente químico" debería entenderse que tiene el mismo significado que se explica a continuación....

1. Una composición que comprende un conjugado de LHRH-toxoide de difteria adsorbido en un polisacárido iónico, en la que dicha LHRH es el péptido representado por SEQ ID NO:2.

2. Una composición según la reivindicación 1 en la que el término carboxi de dicho péptido está amidado.

3. La composición según la reivindicación 1 ó la 2 en la que dicho polisacárido iónico es DEAE-dextrano.

4. Una composición según una cualquiera de las precedentes reivindicaciones que es una composición farmacéutica que comprende (i) un conjugado de LHRH-toxoide de difteria adsorbido en un polisacárido iónico según se define en la reivindicación 1 ó la 3 junto con (ii) uno o más vehículos y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

5. Una composición según la reivindicación 3 que comprende 5 a 500 microgramos de conjugado de LHRH-toxoide de difteria en 5 a 500 miligramos de DEAE-dextrano.

6. Una composición según la reivindicación 3 que comprende 50 a 500 microgramos de conjugado de LHRH-toxoide de difteria en 5 a 500 miligramos de DEAE-dextrano.

7. Una composición según la reivindicación 3 que comprende 50 a 500 microgramos de conjugado de LHRH-toxoide de difteria en 10 a 100 miligramos de DEAE-dextrano.

8. Un procedimiento para suscitar, en un animal no humano, una respuesta inmunitaria eficaz no terapéutica a LHRH, comprendiendo dicho procedimiento administrar a dicho animal una cantidad eficaz de la composición de una cualquiera de las precedentes reivindicaciones.

9. El procedimiento de la reivindicación 8, en el que dicha respuesta inmunitaria inhibe la capacidad reproductora de dicho animal.

10. Un procedimiento según la reivindicación 8 que se lleva a cabo con el fin de castrar a un animal no humano.

11. Un procedimiento según la reivindicación 8 que se lleva a cabo con el fin de inhibir o retrasar el estro en un animal no humano hembra.

12. Un procedimiento según la reivindicación 8 que se lleva a cabo con el fin de inhibir características que se inducen por la maduración sexual de un animal no humano.

13. El procedimiento según la reivindicación 12 en el que dicha característica es la agresividad.

14. El procedimiento según la reivindicación 12 en el que dicha característica es la actividad sexual.

15. El procedimiento según la reivindicación 12 en el que dicho animal es un gato y/o un perro macho.

16. El procedimiento según la reivindicación 15 en el que dicha característica es la agresividad y/o tendencia al vagabundeo.

17. El procedimiento según la reivindicación 12 en el que dicho animal es un gato y/o un perro hembra.

18. El procedimiento según la reivindicación 17 en el que dicha característica es la desobediencia, el marcado del territorio, inquietud y/o comportamiento estral.

19. El procedimiento según la reivindicación 12 en el que dicho animal es un caballo macho.

20. El procedimiento según la reivindicación 19 en el que dicha característica es la agresividad.

21. El procedimiento según la reivindicación 12 en el que dicho animal es un caballo hembra.

22. El procedimiento según la reivindicación 21 en el que dicha característica es el comportamiento estral y/o el rendimiento irregular.

23. Un procedimiento según la reivindicación 8 que se lleva a cabo con el fin de aumentar el peso final de un animal de granja en el momento del sacrificio, rebajar la exigencia de alimentos de un animal por cada kilogramo de peso en canal que se gana, aumentar la velocidad de crecimiento de un animal de granja en comparación con el ganado sin castrar, mejorar la calidad de la carne que se deriva de un animal de granja o disminuir los niveles de estrés de un animal de granja estabulado intensivamente reduciendo las interacciones agresivas con otros animales estabulados intensivamente.

24. El procedimiento según la reivindicación 23 en el que dicho procedimiento se lleva a cabo con el fin de reducir o eliminar características organolépticas no deseadas de la carne de un animal de granja.

25. El procedimiento según la reivindicación 24 en el que dicho animal de granja es una vaca, un cerdo, una cabra o una oveja.

26. El procedimiento según la reivindicación 23 en el que dicho animal es un cerdo y el procedimiento se lleva a cabo para reducir o eliminar el olor a verraco.

27. El procedimiento según la reivindicación 23 en el que dicho animal es un cerdo.

28. El procedimiento según la reivindicación 23 en el que dicho animal es una vaca.

29. Un procedimiento según la reivindicación 8 que se lleva a cabo con el fin de regular a la baja la libido de un animal no humano.

30. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para uso en un procedimiento de tratamiento mediante terapia del cuerpo humano o animal.

31. La composición según la reivindicación 30 para uso en terapia de un trastorno de células malignas o un trastorno proliferativo de células no malignas.

32. La composición según la reivindicación 31 en la que dicha terapia es de un ser humano.

33. La composición según la reivindicación 31 ó la 32 en la que dicha terapia es de células malignas testiculares, células malignas de mama, células malignas de próstata, células malignas ováricas o células malignas oncofetales.

34. La composición según la reivindicación 31 en la que dicha terapia es de células hiperplásticas.

35. La composición según la reivindicación 34 en la que dichas células hiperplásticas son células de próstata o células endometriales.