Una composición farmacéutica acuosa líquida comprendiendo

un polipéptido factor VII (i);

un agente amortiguador (ii) adecuado para mantener el pH en el rango de 4.0 a 9.0;

al menos un agente conteniendo metal (iii), donde dicho metal es seleccionado a partir del grupo consistente en cromo, manganeso, hierro, cobalto, níquel, y cobre del estado oxidante +II; y

un tensioactivo no iónico (iv)

Composición farmacéutica líquida, acuosa de polipéptidos Factor VII.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas acuosas líquidas que contienen polipéptidos factor VII, y métodos para preparar y usar composiciones de este tipo, así como recipientes que contienen composiciones de este tipo, y el uso de composiciones de este tipo en el tratamiento de un síndrome sensible al factor VII. Más particularmente, la invención se refiere a hbox{composiciones líquidas estabilizadas contra la degradación química y/o física.}

Antecedentes de la invención

Una variedad de factores implicados en el proceso de coagulación de la sangre ha sido identificada, incluyendo el factor VII (FVII), una glicoproteina de plasma. La hemostasis es iniciada por la formación de un complejo entre el factor tisular (TF) estando expuesto a la sangre circulante tras una herida en la pared vascular, y el FVIIa que está presente en la circulación en una cantidad correspondiente a aproximadamente un 1% de la masa de proteína FVII total. FVII existe en el plasma principalmente como un zimógeno monocatenario que se divide por FXa en su forma activada bicatenaria, FVIIa. El factor VIIa activado recombinante (rFVIIa) ha sido desarrollado como un agente prohemostático. La administración de rFVIIa ofrece una respuesta prohemostática rápida y altamente eficaz en sujetos hemofílicos con sangrados que no pueden ser tratados con otros productos de factor de coagulación debido a la formación de anticuerpos. También el sangrado en sujetos con una deficiencia de factor VII o sujetos con un sistema de coagulación normal, pero que experimentan un sangrado excesivo pueden ser tratados exitosamente con FVIIa.

Es deseable tener formas de administración del factor VIIa adecuadas tanto para el almacenamiento como para la entrega. De forma ideal, el fármaco es almacenado y administrado como un líquido. Alternativamente, el fármaco es liofilizado, es decir, deshidratado por congelación, y después reconstituido mediante la adición de un diluyente adecuado antes de que el paciente lo use. De forma ideal, el fármaco tiene una estabilidad suficiente para ser almacenado a largo plazo, es decir, más de seis meses.

La decisión bien de mantener el fármaco final como un líquido o de deshidratarlo por congelación normalmente está basada en la estabilidad del fármaco proteico en estas formas. La estabilidad de la proteína puede ser afectada entre otras cosas por factores tales como la fuerza iónica, el pH, la temperatura, ciclos repetidos de congelación/descongelación, y exposiciones a esfuerzos de cizalla. La proteína activa puede perderse como resultado de inestabilidades físicas, incluyendo la desnaturalización y la agregación (la formación de agregados tanto solubles como insolubles), así como por inestabilidades químicas, incluyendo, por ejemplo, la hidrólisis, la desamidación, y la oxidación, por nombrar sólo unos pocos. Para una revisión general de la estabilidad de fármacos proteicos, véase, por ejemplo, Manning, et al., Pharmaceutical Research (Investigación Farmacéutica) 6: 903-918 (1989).

Puesto que la incidencia posible de inestabilidades de proteína es estimada ampliamente, es imposible predecir problemas de inestabilidad particulares de una proteína particular. Cualquiera de estas inestabilidades puede resultar en la formación de un subproducto de la proteína, o un derivado con actividad reducida, toxicidad aumentada, y/o inmunogenicidad aumentada. De hecho, la precipitación de la proteína puede llevar a una trombosis, a una no homogeneidad de la forma y la cantidad de la dosificación, así como a la obstrucción de jeringas. Además, las modificaciones postraduccionales tales como, por ejemplo, la gamma-carboxilación de residuos determinados de ácido glutámico en el N-término y la adición de cadenas laterales de carbohidrato proporcionan sitios potenciales que pueden ser susceptibles de modificación tras el almacenamiento. También, específicamente para el factor VIIa, siendo una serina proteasa, puede tener lugar una fragmentación debido a la autocatálisis (degradación enzimática). Así, la seguridad y la eficacia de cualquier composición de una proteína están directamente relacionadas con su estabilidad. Mantener la estabilidad en una forma líquida es generalmente diferente a mantener la estabilidad en una forma liofilizada debido al potencial altamente aumentado para el movimiento molecular y de este modo la probabilidad aumentada de interacciones moleculares. Mantener la estabilidad en una forma concentrada también es diferente a lo anterior, debido a la propensión a agregar la formación a concentraciones de proteína aumentadas.

En el desarrollo de una composición líquida, muchos factores se toman en consideración. La estabilidad líquida a corto plazo, es decir, menos de seis meses, generalmente depende de evitar grandes cambios estructurales, tales como la desnaturalización y la agregación. Estos procesos son descritos en la bibliografía para una serie de proteínas, y muchos ejemplos de agentes estabilizantes existentes. Es bien conocido que un agente eficaz a la hora de estabilizar una proteína en realidad actúa para desestabilizar otra. Tan pronto como la proteína ha sido estabilizada contra grandes cambios estructurales, el desarrollo de una composición líquida para una estabilidad a largo plazo (p. ej., de más de seis meses) depende de estabilizar aún más la proteína a partir de tipos de degradación específicos de esta proteína. Tipos más específicos de degradación pueden incluir, por ejemplo, la aleatorización del enlace de disulfuro, la oxidación de residuos determinados, la desamidación, la ciclización. Aunque no siempre es posible identificar las especies individuales de degradación, se desarrollan ensayos para controlar cambios sutiles así como para controlar la capacidad de excipientes específicos para estabilizar únicamente la proteína de interés.

Es deseable que el pH de la composición esté en un rango fisiológicamente adecuado tras la inyección/infusión, de lo contrario puede resultar en dolor e incomodidad para el paciente.

Para una revisión general de composiciones de proteínas, véase, por ejemplo, Cleland et al.: The development of stable protein compositions (El desarrollo de composiciones proteicas estables): A closer look at protein aggregation, deamidation and oxidation, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 1993, 10(4): 307-377 (Una mirada más cercana a la agregación de proteína, la desamidación y la oxidación, Revisiones Criticas en Sistemas Portadores de Fármacos Terapéuticos); y Wang et al., Parental compositions of proteins and peptides: Stability and stabilizers, Journal of Parental Science and Technology 1988 (Supplement), 42 (2S) (Composiciones parentales de proteínas y péptidos: Estabilidad y estabilizadores, Revista de Ciencia Parental y Tecnología 1988 (Suplemento), 42 (2S)).

El factor VIIa se somete a varias vías degradativas, especialmente a agregación (dimerización), oxidación, y rotura autolítica (recorte del esqueleto peptídico o degradación de cadena pesada). Además, puede ocurrir una precipitación. Muchas de estas reacciones pueden ser desaceleradas significativamente retirando el agua de la proteína. No obstante, el desarrollo de una composición acuosa para el factor VIIa tiene las ventajas de eliminar errores de reconstitución, aumentando de este modo la exactitud de la dosificación, así como simplificando el uso del producto clínicamente, aumentando de este modo la adaptabilidad del paciente. De forma ideal, las composiciones del factor VIIa deberían ser estables durante más de 6 meses en un amplio rango de concentraciones de proteína. Ésto permite la flexibilidad en métodos de administración. Generalmente, formas más altamente concentradas permiten la administración de volúmenes inferiores, lo que es altamente deseable desde el punto de vista del paciente. Composiciones líquidas pueden tener muchas ventajas sobre productos deshidratados por congelación con respecto a la facilidad de administración y uso.

Hoy, la única composición de polipéptido FVII hecha de forma recombinante comercialmente disponible, es un producto de factor FVIIa deshidradado por congelación que es reconstituido antes de su uso; contiene una concentración de factor VIIa relativamente baja, p. ej., de aproximadamente 0,6 mg/ml. Un frasco (1,2 mg) de NovoSeven® (Novo Nordisk A/S, Dinamarca) contiene 1,2 mg de factor humano VIIa recombinante, 5,84 mg de NaCl, 2,94 mg de CaCl₂, 2 H₂O,...

1. Una composición farmacéutica acuosa líquida comprendiendo

un polipéptido factor VII (i);

un agente amortiguador (ii) adecuado para mantener el pH en el rango de 4.0 a 9.0;

al menos un agente conteniendo metal (iii), donde dicho metal es seleccionado a partir del grupo consistente en cromo, manganeso, hierro, cobalto, níquel, y cobre del estado oxidante +II; y

un tensioactivo no iónico (iv).

2. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el agente conteniendo metal (iii) es al menos uno seleccionado a partir del grupo consistente en cloruro de cromo(II), cloruro de manganeso(II), cloruro de hierro(II), cloruro de cobalto(II) cloruro de níquel(II), y cloruro de cobre(II).

3. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde el metal del agente conteniendo metal (iii) es seleccionado a partir del grupo consistente en cobre y manganeso.

4. La composición según la reivindicación 3, donde el agente conteniendo metal (iii) es seleccionado a partir del grupo consistente en cloruro de cobre(II) y cloruro de manganeso(II).

5. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la concentración del agente conteniendo metal (iii) es de al menos 1 µM.

6. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el metal del agente conteniendo metal (iii) es cobre y la concentración de dicho agente es de al menos 5 µM.

7. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde el metal del agente conteniendo metal (iii) es manganeso y la concentración de dicho agente es de al menos 100 µM.

8. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el polipéptido factor VII es el factor VIIa humano.

9. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el polipéptido factor VII es una variante de secuencia del factor VII.

10. La composición según la reivindicación 9, donde la proporción entre la actividad del polipéptido factor VII y la actividad del factor VIIa humano nativo (FVIIa de tipo salvaje) es de al menos 1,25 al analizarse en el Ensayo de Proteolisis In Vitro como se describe en este caso.

11. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el polipéptido del factor VII está presente en una concentración de 0,1-15 mg/ml.

12. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, la cual tiene un pH en el rango de aproximadamente 4.0 a aproximadamente 8.0.

13. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el agente amortiguador (ii) comprende al menos un componente seleccionado a partir del grupo consistente en ácidos y sales de MES, PIPES, ACES, BES, TES, HEPES, TRIS, glicinamida, ácido fosfórico, ácido acético, ácido láctico, y ácido succínico.

14. La composición según la reivindicación 13, donde la concentración del agente amortiguador (ii) es de 1-100 mM.

15. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el tensioactivo no iónico (iv) es al menos uno seleccionado a partir del grupo consistente en polisorbatos, poloxámeros, éteres de alquilo de polioxietileno, copolimeros de bloque de etileno/polipropileno, polietilenoglicol (PEG), estearatos de polioxietileno, y aceites castóreos de polioxietileno.

16. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, comprendiendo además un agente modificador de tonicidad (v).

17. La composición según la reivindicación 16, donde el agente modificador de tonicidad (v) es al menos uno seleccionado a partir del grupo consistente en sales neutrales, aminoácidos, péptidos de 2-5 residuos de aminoácidos, monosacáridos, disacáridos, polisacáridos, y polialcoholes.

18. La composición según la reivindicación 17, donde al menos un agente modificador de tonicidad (v) es una sal neutral seleccionada del grupo que consiste en sales de sodio, sales de potasio, sales de calcio, y sales de magnesio.

19. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 17-18, donde el agente modificador de tonicidad (v) es cloruro de sodio en combinación con al menos uno seleccionado a partir del grupo consistente en cloruro de calcio, acetato de calcio, cloruro de magnesio y acetato de magnesio.

20. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el agente modificador de tonicidad (v) está presente en una concentración de al menos 1 mM.

21. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde al menos un agente modificador de tonicidad (v) es un agente modificador de fuerza iónica (v/a).

22. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, la cual tiene una fuerza iónica de al menos 50.

23. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, la cual tiene una osmolalidad de 300 pm 50 miliosmol/kg.

24. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes comprendiendo además un antioxidante (vi).

25. La composición según la reivindicación 24, donde el antioxidante (vi) se selecciona a partir de L-metionina, D-metionina, análogos de metionina, péptidos conteniendo metionina, homólogos de metionina, ácido ascórbico, cisteína, homocisteina, glutathiona, cistina, y cistationina.

26. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 24-25, donde el antioxidante (vi) está presente en una concentración de 0,1-5,0 mg/ml.

27. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes comprendiendo además un conservante (vii).

28. La composición según la reivindicación 27, donde el conservante (vii) es seleccionado a partir del grupo consistente en fenol, alcohol benzílico, orto-cresol, meta-cresol, para-cresol, metil paraben, propil paraben, cloruro de benzalconio, y cloruro de benzaetonio.

29. La composición farmacéutica acuosa líquida según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende:

30. La composición farmacéutica acuosa líquida según cualquiera de las reivindicaciones 1-29, que comprende:

31. La composición según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, la cual está adaptada para la administración parenteral.

32. La composición según la reivindicación 31, la cual está adaptada para la inyección subcutánea, intramuscular o intravenosa.

33. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-32, comprendiendo además calcio (Ca²⁺) y/o magnesio (Mg²⁺), preferiblemente calcio, en una concentración de al menos aproximadamente 2 mM.

34. Un método para preparar una composición farmacéutica acuosa líquida de un polipéptido factor VII comprendiendo la fase de suministro del polipéptido factor VII (i) en una solución comprendiendo

un agente amortiguador (ii) adecuado para mantener el pH en el rango de 4.0 a 9.0;

al menos un agente conteniendo metal (iii), donde dicho metal es seleccionado a partir del grupo consistente en cromo, manganeso, hierro, cobalto, níquel, y cobre del estado oxidante +II; y

un tensioactivo no iónico (iv).

35. Una composición farmacéutica acuosa líquida tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-33 para su uso como medicamento.

36. El uso de una composición farmacéutica acuosa líquida tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-33 para la preparación de un medicamento para tratar un síndrome sensible al factor VII.

37. Un contenedor hermético conteniendo una composición farmacéutica acuosa líquida tal como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-33, y opcionalmente un gas inerte.

38. El contenedor según la reivindicación 37, donde la composición no comprende un conservante (vii).

39. Un método para reducir la concentración iónica metálica en una composición farmacéutica acuosa líquida, comprendiendo dicho método la fase de poner en contacto una composición farmacéutica acuosa líquida según cualquiera de las reivindicaciones 1-33 con un material de intercambio de catión.