ANTICUERPOS PARA IDENTIFICACION Y/O AISLAMIENTO DE AL MENOS UNA POBLACION CELULAR QUE SE SELECCIONA DEL GRUPO QUE COMPRENDE CELULAS TRONCALES HEMATOPOYETICAS, C. TRONCALES NEURONALES, C. PRECURSORAS NEURONALES, CELULAS TRONCALES MESENQUIMATOSAS Y C. PRECURSORAS MESENQUIMATOSAS.
Un anticuerpo monoclonal anti-CDCP1, o un fragmento del mismo,
capaz de aislar y/o identificar al menos una población celular que se selecciona del grupo de células troncales hematopoyéticas, células troncales neuronales, células progenitoras neuronales, células troncales mesenquimatosas y células progenitoras mesenquimatosas, caracterizado porque el anticuerpo, o el fragmento del mismo, se une a un antígeno que es el mismo que se une a un anticuerpo producido por la línea de células de hibridoma CUB1 (DSM ACC2569), CUB2 (DSM ACC2566), CUB3 (DSM ACC2565) o CUB4 (DSM ACC2551)
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E03019221.
Solicitante: EBERHARD-KARLS-UNIVERSITAT TUBINGEN UNIVERSITATSKLINIKUM.
Nacionalidad solicitante: Alemania.
Dirección: GEISSWEG 3,72076 TUBINGEN.
Inventor/es: LAMMERS, REINER, BUHRING,HANS-JIRG,DR, KUCI,SELIM,DR, CONZE,TIM.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 26 de Agosto de 2003.
Fecha Concesión Europea: 31 de Marzo de 2010.
Clasificación PCT:
- C07K16/28 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
- C12N5/07 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células o tejidos animales.
Clasificación antigua:
- C07K16/28 C07K 16/00 […] › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
- C12N5/06
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
Fragmento de la descripción:
Anticuerpos para la identificación y/o aislamiento de al menos una población celular que se selecciona del grupo que comprende células troncales hematopoyéticas, células troncales neuronales, células precursoras neuronales, células troncales mesenquimatosas y células precursoras mesenquimatosas.
La presente invención se refiere a un anticuerpo monoclonal anti-CDCP1, o a un fragmento del mismo, para aislar y/o identificar al menos una población celular que se selecciona del grupo que comprende células troncales hematopoyéticas, células troncales neuronales, células precursoras neuronales, células troncales mesenquimatosas y células precursoras mesenquimatosas, caracterizado porque el anticuerpo, o el fragmento del mismo, se une a un antígeno que es el mismo al que se une un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma CUB1 (DSM ACC2569), CUB2 (DSM ACC2566), CUB3 (DSM ACC2565) o CUB4 (DSM ACC2551). La invención se refiere además a un anticuerpo monoclonal anti-CDCP1, o a un fragmento del mismo, caracterizado porque se une a la misma estructura antigénica a la que se une un anticuerpo producido por la línea celular de hibridoma CUB1 (DSM ACC2569), CUB2 (DSM ACC2566), CUB3 (DSM ACC2565) o CUB4 (DSM ACC2551), en donde dicho anticuerpo o fragmento es capaz de aislar y/o identificar al menos una población celular que se selecciona del grupo de células troncales hematopoyéticas, células troncales neuronales, células progenitoras neuronales, células troncales mesenquimatosas y células progenitoras mesenquimatosas.
El término "célula troncal" significa, de una manera general, cualquier célula que aún no se ha diferenciado y que posee la capacidad tanto de producir descendientes idénticos como de diferenciarse a líneas de desarrollo específico.
Las células troncales adultas tienen la función de mantener la homeostasis del número de células en el tejido correspondiente, es decir, de reemplazar las células que han muerto. Por esta razón, las células troncales se encuentran particularmente en tejidos que están sometidos a grandes agresiones. Se han encontrado células troncales adultas en una gran variedad de tejidos y órganos, tales como, por ejemplo, médula ósea, cerebro, hígado, piel, intestino, córnea, etc.
En la médula ósea, las células troncales hematopoyéticas producen nuevas células de forma continua ya que estas últimas células se requieren constantemente en la sangre debido al tiempo de vida limitado de la mayoría de las células.
El punto de partida para la formación de células sanguíneas es la célula troncal pluripotente sin diferenciar, que aún no está determinada para una función específica. Cuando las células troncales se diferencian, en primer lugar se forman células precursoras, que son incapaces de replicarse ellas mismas y sólo producen un tipo de células especializado hasta la madurez. Ni la célula troncal pluripotente ni las diferentes fases intermedias son capaces de llenar las funciones hematopoyéticas específicas de célula; son sólo las células que han madurado las que son capaces de hacer esto. Las células progenitoras que han entrado en una vía de diferenciación particular también se mantienen luego en esta vía hasta que se alcanza la maduración (compromiso).
Además de las células troncales para células hematopoyéticas, también están presentes en la médula ósea células similares a células troncales que son progenitores de tejidos no hematopoyéticos. Estos progenitores de tejidos no hematopoyéticos se denominaron originalmente, entre otros, células adherentes a plástico en cultivo celular y más recientemente se han denominado bien células troncales mesenquimatosas o células de estroma de médula ósea (MSC).
Estas células tienen interés no sólo debido a su multipotencia con respecto a la diferenciación; también tienen interés, por ejemplo, por su posible uso en terapia celular y terapia génica.
El hecho de que, en ciertas condiciones, las células troncales mesenquimatosas también se puedan diferenciar a células nerviosas significa que, entre otros, hay una necesidad de ser capaz de distinguir estas células troncales mesenquimatosas de las células progenitoras neuronales.
Estas células progenitoras neuronales (denominadas más adelante NPC) se encuentran en el sistema nervioso central. También expresan nestina y son capaces de diferenciarse a neuronas, astrocitos y oligodendrocitos.
Las células progenitoras neuronales con positivas para CD133; este marcador de superficie celular se encontró originalmente en células troncales hematopoyéticas. Sin embargo, recientemente se ha mostrado que este marcador también se expresa en tejido nervioso y tejido de músculo esquelético. Por estas razones, este marcador no es adecuado para distinguir entre diferentes células troncales o células progenitoras por sí mismo.
Puesto que, como ya se ha mencionado, las células troncales hematopoyéticas generan continuamente nuevas células en la médula ósea, las células troncales coexisten con las células progenitoras al mismo tiempo en la médula ósea. En la médula ósea, estas células están presentes en una disposición compleja, haciendo por ello difícil identificar células raras. Las células troncales y sus descendientes directos expresan un fenotipo que es virtualmente idéntico. Por estas razones, no es posible tampoco identificar una célula troncal final simplemente en base a características visibles.
La frecuencia de células troncales en la médula ósea es desde 1 x 10-5 hasta 1 x 10-6. Además, las células troncales como regla están muy diseminadas en el tejido determinado, lo que significa que son difíciles de detectar.
Como se ha mencionado anteriormente, las células troncales hematopoyéticas se dividen, en ciertas condiciones, a células progenitoras cuya diferenciación adicional ya está en algún grado determinada. Dependiendo de la naturaleza y cantidad de las citoquinas que están presentes, estas células progenitoras mieloides y linfoides pueden a su vez generar una variedad de otras células progenitoras que, sin embargo, ya no son capaces de replicarse ellas mismas. Ejemplos de citoquinas que regulan la hematopoyesis son el factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), el factor estimulante de colonias de macrófagos (M-CSF), varias interleuquinas, el factor de células troncales (SCF), eritropoyetina (EPO), etc.
Para investigar el potencial hematopoyético (formación de células sanguíneas) de las células troncales, se trasplantan poblaciones relevantes de células humanas en ratones inmunodeficientes (ratones NOD/SCID). Si las células trasplantadas son células troncales, es posible detectar hematopoyesis humana además de la hematopoyesis murina. Este ensayo in vivo se usa para caracterizar e identificar células troncales analizando de hecho la progenie de células individuales.
Como se puede ver por lo anterior, las células troncales hematopoyéticas poseen un gran potencial terapéutico y se usan en paciente en los que el sistema inmune está dañado o destruido por completo.
Se puede usar FACS (separador celular activado por fluorescencia), por ejemplo, para purificar células troncales hematopoyéticas de la médula ósea. Esta purificación depende de la presencia, en las células troncales, de proteínas de superficie celular particulares que distinguen las células troncales hematopoyéticas y las células progenitoras de otros tipos de células y de la ausencia de otras proteínas de superficie celular, estas últimas proteínas son características de células hematopoyéticas diferenciadas. Cada una de las proteínas de superficie se une a un anticuerpo monoclonal diferente, estando conjugado cada uno estos anticuerpos a un colorante fluorescente diferente, haciendo de esta manera posible usar FACS para separar las células.
En el pasado se ha usado el marcador de superficie celular CD34, en particular, para el aislamiento de células troncales hematopoyéticas.
Además, recientemente se han usado anticuerpos dirigidos contra el antígeno CD133 para caracterizar células troncales hematopoyéticas. Miraglia et al., "A novel five-transmembrane hematopoietic stem cell antigen: isolation, characterization and molecular cloning", Blood 90: 5013-5021, (1997) han mostrado que este antígeno es una glicoproteína de 120 kDa que posee cinco dominios transmembrana y que se expresa no sólo en células troncales hematopoyéticas y sus progenitores sino también en células troncales neuronales y endoteliales.
Reivindicaciones:
1. Un anticuerpo monoclonal anti-CDCP1, o un fragmento del mismo, capaz de aislar y/o identificar al menos una población celular que se selecciona del grupo de células troncales hematopoyéticas, células troncales neuronales, células progenitoras neuronales, células troncales mesenquimatosas y células progenitoras mesenquimatosas, caracterizado porque el anticuerpo, o el fragmento del mismo, se une a un antígeno que es el mismo que se une a un anticuerpo producido por la línea de células de hibridoma CUB1 (DSM ACC2569), CUB2 (DSM ACC2566), CUB3 (DSM ACC2565) o CUB4 (DSM ACC2551).
2. Un anticuerpo monoclonal anti-CDCP1, o un fragmento del mismo, caracterizado porque se une a la misma estructura antigénica a la que se une un anticuerpo producido por la línea de células de hibridoma CUB1 (DSM ACC2569), CUB2 (DSM ACC2566), CUB3 (DSM ACC2565) o CUB4 (DSM ACC2551), en donde dicho anticuerpo o fragmento es capaz de aislar y/o identificar al menos una población celular que se selecciona del grupo de células troncales hematopoyéticas, células troncales neuronales, células progenitoras neuronales, células troncales mesenquimatosas y células progenitoras mesenquimatosas.
3. El anticuerpo monoclonal o fragmento de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el anticuerpo está producido por la línea de células de hibridoma CUB1 (DSM ACC2569).
4. El anticuerpo monoclonal o fragmento de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el anticuerpo está producido por la línea de células de hibridoma CUB2 (DSM ACC2566).
5. El anticuerpo monoclonal o fragmento de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el anticuerpo está producido por la línea de células de hibridoma CUB3 (DSM ACC2565).
6. El anticuerpo monoclonal o fragmento de la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el anticuerpo está producido por la línea de células de hibridoma CUB4 (DSM ACC2551).
7. Una línea de células de hibridoma, caracterizada porque produce el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
8. Un método para aislar y/o identificar al menos una población celular, que se selecciona del grupo de células troncales hematopoyéticas, células troncales neuronales, células progenitoras neuronales, células troncales mesenquimatosas y células progenitoras mesenquimatosas, usando al menos un anticuerpo, que comprende las siguientes etapas:
9. El método de la reivindicación 8 que comprende además en la etapa (a):
poner en contacto dicha muestra de una suspensión celular con al menos un anticuerpo adicional que se une al menos a una de las poblaciones celulares.
10. El método de la reivindicación 8 ó 9 para el análisis in vitro de muestras de pacientes, en particular de biopsias de tejidos, biopsias de médula ósea y/o muestras de sangre.
11. El método de la reivindicación 8 ó 9 para la clasificación diagnóstica in vitro de leucemias.
12. Una composición farmacéutica que comprende al menos un anticuerpo monoclonal o fragmento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
13. Un kit, que comprende al menos un anticuerpo monoclonal o fragmento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.
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