Un anticuerpo terapéutico que comprende una cadena VH que tiene la secuencia indicada en la SEC ID Nº:

26 y un dominio VL que tiene la secuencia indicada en la SEC ID Nº: 32

Anticuerpos contra el péptido ß-amiloide.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a anticuerpos que se unen al péptido ß-amiloide y, en particular, al péptido ß-amiloide humano. La presente invención también se refiere a procedimientos para el tratamiento de enfermedades o trastornos caracterizados por una elevación de los niveles de ß-amiloide o de los depósitos de ß-amiloide, particularmente la enfermedad de Alzheimer, con dichos anticuerpos, a composiciones farmacéuticas que comprenden dichos anticuerpos y a procedimientos para su fabricación. Otros aspectos de la presente invención serán evidentes tras la descripción que se presenta más adelante.

Antecedentes de la invención

La enfermedad de Alzheimer (EA) es la causa más común del deterioro cognitivo relacionado con la edad, que afecta a más de 12 millones de individuos en todo el mundo (Citron M (2002) Nat. Neurosci 5, Supl. 1055-1057). Las primeras fases de la enfermedad se caracterizan por una pérdida progresiva de memoria con un deterioro cognitivo asociado y déficits del lenguaje y del comportamiento. En las últimas fases de la enfermedad, los pacientes desarrollan amnesia global y tienen la función motora muy reducida. La muerte se produce típicamente 9 años después del diagnóstico y a menudo está asociada con otras afecciones, típicamente neumonía (Davis K.L. y Samules S.C. (1998) en Pharmacological Management of Neurological and Psychiatric Disorders eds Enna S. J. y Coyle J. T. (McGraw-Hill, Nueva York, páginas 267-316)). Las terapias actuales representan estrategias sintomáticas que se centran en el alivio del deterioro cognitivo y en la mejora de los síntomas conductuales asociados con la etiología de la enfermedad en progreso. En la práctica, estos tratamientos sólo proporcionan un efecto beneficioso sobre la cognición de corta duración, notificándose una duración del nivel de deterioro cognitivo conseguido de tan sólo hasta 2 años. El potencial de una terapia para modificar la enfermedad que ralentice y posiblemente detenga la progresión de la enfermedad es enorme. Tales estrategias proporcionarían mejoras radicales y sostenidas en la calidad de vida de los pacientes y en sus cuidadores, lo cual es muy importante, además de reducir los enormes costes sanitarios globales de esta enfermedad.

El diagnóstico clínico de la enfermedad de Alzheimer se basa en una combinación de ensayos físicos y mentales que conducen al diagnóstico de una enfermedad de Alzheimer posible o probable. Después de la muerte, la enfermedad se confirma por signos neurológicos bien caracterizados en el cerebro, que incluyen la deposición de Aß en placas parenquimatosas y vasos cerebrales, la formación intraneuronal de ovillos neurofibrilares, pérdida sináptica y pérdida de subpoblaciones neuronales en regiones específicas del cerebro (Terry, RD (1991) J Neural Trans Supl. 53: 141-145).

Una gran cantidad de pruebas genéticas, histológicas y funcionales sugieren que el péptido ß-amiloide (Aß) es clave en la progresión de la enfermedad de Alzheimer (Selkoe, D. J. (2001) Physiological Reviews 81: 741-766).

Se sabe que Aß se produce por medio de la escisión de la proteína precursora de beta amiloide (también conocida como APP) por una enzima aspartil proteasa conocida como BACE1 (también conocida como ß-secretasa, Asp2 o Memapsina-2) (De Strooper, B. y Konig, G. (1999) Nature 402: 471-472). Se ha postulado que además de la deposición parenquimática y vascular, ciertas formas oligoméricas solubles de Aß contribuyen a la aparición de EA y pueden afectar a la función neuronal inicialmente perjudicando a la función sináptica (Lambert y col. (1998) Proceedings of the National Academy of Science, EE.UU. 95: 6448-6453). Aunque se encuentran placas amiloides insolubles en las primeras fases de EA y de MCI, en estos individuos también están aumentados los niveles de agregados de Aß soluble (que reciben el nombre de oligómeros o ligandos difundibles derivados de Aß (ADDL) y los niveles de Aß soluble se correlacionan mejor con la degeneración neurofibrilar y la pérdida de marcadores sinápticos que las placas de amiloide (Naslund y col. (2000) J Am Med Assoc 283: 1571-1577, Younkin, S. (2001) Nat. Med. 1: 8-19). El Aß42 altamente amiloidogénico y las formas truncadas en el extremo amino Aßx-42 son las especies predominantes de Aß encontradas tanto en placas difusas como en placas seniles (Iwatsubo, T (1994) Neuron. 13:45-53, Gravina, SA (1995) J. Biol. Chem. 270: 7013-7016). Los niveles relativos de Aß42 parecen ser el regulador clave de la agregación de Aß en placas amiloides, de hecho se ha demostrado que Aß42 forma agregados más rápidamente que otras formas de Aß in vitro (Jarrett, JT (1993) Biochemistry. 32: 4693-4697) y Aß42 como tal se ha implicado como molécula iniciadora en la patogénesis de la EA (Younkin SG, (1998) J. Physiol. (París). 92: 289-292). Aunque Aß42 es un producto minoritario del metabolismo de APP, los pequeños cambios en su producción están asociados con grandes efectos sobre la deposición de Aß, por lo tanto se ha postulado que la reducción de Aß42 solo puede ser una forma eficaz de tratar la EA (Younkin SG, (1998) J. Physiol. (París). 92: 289-292). Confirmando esta teoría, se ha informado que ciertas mutaciones en los genes de la proteína precursora de amiloide (APP) y de la presenilina aumentan predominantemente los niveles relativos de Aß42 y, por lo tanto, acortan el tiempo hasta la aparición de la enfermedad de Alzheimer (EA) (Selkoe D.J., Podlisny M.B. (2002) Annu. Rev. Genomics Hum. Gemet. 3: 67-99). Sin embargo, debe tenerse en cuenta que la velocidad de deposición también depende del catabolismo y eliminación de Aß.

Se han generado modelos animales de la deposición de amiloides por sobreexpresión de transgenes humanos mutantes en ratones. Los ratones que sobreexpresan transgenes de APP humanos individuales típicamente desarrollan depósitos de ß-amiloide del tipo de placas cerebrales desde los 12 meses de edad (Games D. y col., (1995) Nature 373: 523-527; Hsiao K. y col., (1996) Science 274: 99-102)), mientras que los ratones que llevan transgenes tanto de APP humana mutante como de presenilina-1 (PS-1) típicamente desarrollan depósitos de ß-amiloide del tipo de placas cerebrales tan pronto como a los 2 meses de edad (Kurt M.A. y col., (2001) Exp. Neurol. 171: 59-71; McGowan E. y col., (1999) Neurolbiol. Dis. 6: 231-244).

Se ha hecho cada vez más evidente que el transporte de Aß exógeno entre el sistema nervioso central (SNC) y el plasma juega un papel en la regulación de los niveles de amiloide cerebrales (Shibata, y col. (2000) J Clin Invest 106: 1489-1499), transportándose el Aß del LCR rápidamente desde el LCR hasta el plasma. Por lo tanto, tras la vacunación activa con péptidos Aß o la administración pasiva de anticuerpos específicos contra Aß, los anticuerpos se unen rápidamente al Aß periférico alterando el equilibrio dinámico entre el plasma, el LCR y finalmente el SNC. De hecho, ahora hay una gran cantidad de estudios que han demostrado que estas dos estrategias pueden reducir los niveles de Aß, reducir la patología producida por Aß y proporcionar beneficios cognitivos en diversos modelos transgénicos de amiloidosis. También se han realizado estudios limitados en especies superiores. Se inmunizaron monos verdes caribeños (de 16-10 años de edad) con péptido Aß durante 10 meses. Los niveles de Aß40 se elevaron 2-5 veces en el plasma, alcanzando un máximo en 251 días, mientras que los niveles en el LCR de Aß40 y Aß42 se redujeron significativamente en 100 días y volvieron al nivel inicial a partir de entonces. Esta reducción en el LCR estuvo acompañada de una reducción significativa en la carga de placas (Lemere, CA (2004) Am J Pathology 165: 283-297). También se detectaron aumentos similares en los niveles plasmáticos de Aß después de la inmunización de monos Rhesus de edad avanzada (de 15-20 años de edad) (Gandy, S (2004) Alzheimer Dis Assoc Disord 18: 44:46).

La primera terapia inmune dirigida a los amiloides cerebrales fue AN-1792 de Elan/Wyeth, una vacuna activa. Este tratamiento se terminó después del desarrollo de signos clínicos coherentes con una meningoencefalitis. Los análisis de subgrupos sugirieron que el tratamiento ralentizaba el deterioro de la función cognitiva (Nature Clin Pract Neurol (2005) 1: 84-85). El análisis post-mortem de los pacientes también mostró pruebas de eliminación de placas (Gilman S. y col., (2005) Neurology 64 (9) 1553-1562). Se ha demostrado que Bapineuzumab (AAB-001, Elan/Wyeth), una terapia...

1. Un anticuerpo terapéutico que comprende una cadena V_H que tiene la secuencia indicada en la SEC ID Nº: 26 y un dominio V_L que tiene la secuencia indicada en la SEC ID Nº: 32.

2. Un anticuerpo terapéutico que comprende una cadena V_H que tiene la secuencia indicada en la SEC ID Nº: 28 y un dominio V_L que tiene la secuencia indicada en la SEC ID Nº: 32.

3. Un anticuerpo terapéutico que comprende una cadena V_H que tiene la secuencia indicada en la SEC ID Nº: 30 y un dominio V_L que tiene la secuencia indicada en la SEC ID Nº: 32.

4. Un anticuerpo terapéutico de acuerdo con cualquier reivindicación anterior que es del isotipo IgG1.

5. Un anticuerpo terapéutico de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, que carece de las funciones de a) activación del complemento por la ruta clásica y b) mediación de la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.

6. Un anticuerpo terapéutico de acuerdo con la reivindicación 4, en el que los restos 235 y 237 se han mutado a alanina.

7. Un anticuerpo terapéutico de acuerdo con la reivindicación 1, el cual comprende una cadena pesada que tiene la secuencia indicada en la SEC ID Nº: 34, 36 ó 38 y una cadena ligera que tiene la secuencia indicada en la SEC ID Nº: 40.

8. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo terapéutico de acuerdo con cualquier reivindicación anterior.

9. Un anticuerpo terapéutico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para usar en el tratamiento de una enfermedad relacionada con el péptido ß-amiloide.

10. Un anticuerpo terapéutico de acuerdo con la reivindicación 9, en el que la enfermedad relacionada con el péptido ß-amiloide es la enfermedad de Alzheimer.

11. Un anticuerpo o fragmento de este que comprende un dominio V_H que tiene la secuencia SEC ID Nº:17 y un dominio V_L que tiene la secuencia SEC ID Nº: 19.

12. Un polinucleótido que codifica una cadena pesada del anticuerpo terapéutico, en el que el polinucleótido comprende la secuencia indicada en las SEC ID Nº: 35, 37, 39 ó 42.

13. Un polinucleótido que codifica una cadena ligera del anticuerpo terapéutico, en el que el polinucleótido comprende la secuencia indicada en la SEC ID Nº: 41 ó 43.

14. Un procedimiento para preparar un anticuerpo terapéutico como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que dicho procedimiento comprende la expresión de un polinucleótido que codifica dicho anticuerpo en una célula huésped.