Un anticuerpo que (i) se enlaza immunoespecíficamente con CD30 y (ii) por sí mismo ejerce un efecto citostático o citotóxico en una línea celular de la enfermedad de Hodgkin,

donde dicho anticuerpo ejerce el efecto citostático o citotóxico en la línea celular de la enfermedad de Hodgkin en ausencia de una conjugación a un agente citostático o citotóxico, respectivamente, para el uso en el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin

Anticuerpos anti-CD30 recombinantes y usos de los mismos.

1. Campo de la invención

La presente invención se refiere a anticuerpos y a composiciones para el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin, comprendiendo la administración de un anticuerpo que enlaza con CD30. Tales anticuerpos incluyen formas recombinantes/variantes de los anticuerpos monoclonales AC10 y HeFi-1, y derivados de los mismos. Esta invención se refiere a una clase nueva de anticuerpos monoclonales dirigidos contra el receptor CD30 los cuales, en forma no modificada, son capaces de inhibir el crecimiento de las células de la enfermedad de Hodgkin que expresan CD30.

2. Antecedentes de la invención

Los regímenes de quimioterapia curativa para la enfermedad de Hodgkin representan uno de los avances más importantes en la oncología clínica. Los regímenes de quimioterapia multiagente han aumentado el índice de curación en más de un 80% para estos pacientes. Sin embargo, el 3% de los pacientes mueren por causas relacionadas con el tratamiento, y para los pacientes que no responden a la terapia estándar o recaen después del tratamiento de primera línea, la única modalidad de tratamiento disponible es de dosis altas de quimioterapia en combinación con transplantes de células madre. Este tratamiento se asocia a un 80% de incidencia de mortalidad, morbilidad significante y un nivel de supervivencia de cinco años inferior al 50% (véase p. ej., Engert, et al., 1999, Seminars in Hematology 36:282-289).

La causa primaria de recaída tumoral es el desarrollo de clones de células tumorales resistentes a los agentes quimioterapéuticos. La inmunoterapia representa una estrategia alternativa que puede evitar potencialmente la resistencia. Los anticuerpos monoclonales para la focalización de células tumorales malignas han sido el foco de varios enfoques inmunoterapéuticos. Para diferentes malignidades, los programas terapéuticos basados en anticuerpos son ahora una parte reconocida de la terapia estándar. El anticuerpo anti-CD20 creado genéticamente Rituxan®, por ejemplo, se aprobó a finales de 1997 para el tratamiento del NHL recurrente de bajo grado.

CD30 es una glicoproteína de membrana de 120 kilodaltons (Froese et al., 1987, J. Immunol. 139: 2081-87) y un elemento de la superfamilia de receptores de TNF. Esta familia incluye TNF-RI, TNF-RII, CD30, CD40, OX-40 y RANK, entre otros.

CD30 es un marcador probado de células malignas en la enfermedad de Hodgkin (HD) y el linfoma de célula grande anaplástico (ALCL), un subconjunto de linfomas diferentes de Hodgkin (NHL) (Dürkop et al., 1992, Cell 88:421-427). Originalmente identificado en células cultivadas de Reed Steinberg de Hodgkin (H-RS) usando el anticuerpo monoclonal Ki-1 (Schwab et al., 1982, Nature 299:65-67), CD30 se expresa con gran frecuencia en la superficie de la célula de todos los linfomas de HD y de la mayoría de ALCL, aún tiene una expresión muy limitada en tejidos normales para pequeños números de células linfoides en las áreas perifoliculares (Josimovic-Alasevic et al., 1989, Eur. J. Immunol. 19:157-162). Anticuerpos monoclonales específicos para el antígeno CD30 se han explorado como vehículos para la administración de fármacos citostáticos, toxinas de planta y radioisótopos en ambos modelos preclínicos y estudios clínicos (Engert et al., 1990, Cancer Research 50:84-88; Barth et al., 2000, Blood 95:3909-3914). En pacientes con HD, la focalización del antígeno CD30 podría conseguirse con dosis bajas del mAb anti-CD30, BerH2 (Falini et al., 1992, British Journal of Haematology 82:38-45). Aún más, a pesar de la exitosa focalización in vivo de las células tumorales malignas, ninguno de los pacientes experimentó regresión tumoral. En una prueba clínica posterior, una toxina (saporin) se conjugó químicamente con el anticuerpo BerH2 y los cuatro pacientes demostraron reducciones rápidas y sustanciales de masa tumoral (Falini et al., 1992, Lancet 339: 1195-1196).

Estas observaciones recalcan la validez del receptor CD30 como un antígeno objetivo. No obstante, todos los pacientes tratados con el conjugado de toxina mAb desarrollaron anticuerpos para la toxina. Una de las limitaciones más importante de las inmunotoxinas es su inmunogenicidad inherente que resulta en el desarrollo de anticuerpos para la molécula de la toxina y neutraliza sus efectos (Tsutsumi et al., 2000, Proc. Nat'l Acad. Sci. U.S.A. 97:8545-8553). Adicionalmente, la toxicidad del hígado y el síndrome de fuga vascular asociado a las inmunotoxinas limita de forma potencial la capacidad para administrar dosis curativas de estos agentes (Tsutsumi et al., 2000, Proc. Nat'l Acad. Sci. U.S.A. 97:8545-8553).

2.1 Anticuerpos monoclonales CD30

El CD30 se identificó originalmente por el anticuerpo monoclonal Ki-1 y se refirió inicialmente como el antígeno Ki-1 (Schwab et al., 1982, Nature 299:65-67). Este mAb se desarrolló contra las células de Hodgkin y de Reed Stemberg (H-RS), las células malignas de la enfermedad de Hodgkin (HD). Un segundo mAb, capaz de unir un epítopo resistente a la formalina, diferente del reconocido por Ki-1 se describió posteriormente (Schwarting et al., 1989 Blood 74:1678-1689). La identificación de cuatro anticuerpos adicionales resultó en la creación del grupo de CD30 en el Tercer Seminario sobre la Clasificación de Leucocitos (Third Leucocyte Typing Workshop) en 1986 (McMichael, A.., ed., 1987, Leukocyte Typing III (Oxford: Oxford University Press).

2.2 Terapias basadas en el anticuerpo monoclonal CD30

La utilidad de los mAbs CD30 en el diagnóstico y la estadificación de la HD llevados a su evaluación como herramientas potenciales para la inmunoterapia. En pacientes con HD, la focalización específica del antígeno CD30 se consiguió con dosis bajas (30-50 mg) del mAb anti-CD30 BerH2 (Falini et al., 1992, British Journal of Haematology 82:38-45). A pesar de la exitosa focalización in vivo de las células tumorales malignas H-RS, ninguno de los pacientes experimentó regresiones tumorales.

En base a estos resultados, se concluyó que la eficacia con la inmunoterapia prevista de mAb CD30 no podría conseguirse con anticuerpos inmodificados (Falini et al., 1992, Lancet 339:1195-1196). En una prueba clínica posterior, el tratamiento de cuatro pacientes con HD refractaria con una toxina, saporin, conjugada químicamente al mAb BerH2 demostró reducciones rápidas y sustanciales, aunque transitorias, de masa tumoral (Falini et al., 1992, Lancet 339:1195-1196). En los últimos años, los investigadores han trabajado para refinar los enfoques para tratar las células neoplásicas que expresan el CD30. Ejemplos incluyen el desarrollo de inmunotoxinas de cadena única recombinantes (Bart et al., 2000, Blood 95:3909-3914), mAbs bi-específicos anti CD16/CD30 (Renner et al., 2000, Cancer Immunol. Immunother. 49:173-180), y la identificación de nuevos mAbs anti-CD30 que previenen la liberación de moléculas CD30 de la superficie de la célula (Horn-Lohrens et al., 1995, Int. J. Cancer 60:539-544).

Este enfoque ha descartado el potencial de las mAbs anti-CD30 con actividad de señalización en el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin.

2.3. Identificación de anticuerpos monoclonales anti-CD30 con actividad agonista

En la clonación y caracterización de la actividad biológica del ligando CD30 humano (CD30L), se describieron dos mAbs, M44 y M67, los cuales imitaban la actividad de la reticulación receptora inducida de CD30L (Gruss et al., 1994, Blood 83: 2045-2056). En ensayos in vitro, estos mAbs, en su forma inmovilizada, fueron capaces de estimular la proliferación de células T activadas y las líneas celulares de la enfermedad de Hodgkin de origen de células T, L540 y HDLM-2. Por otra parte, estos mAbs tuvieron poco efecto en las líneas celulares de Hodgkin con origen de célula B, L428 y KM-H2 (Gruss et al., 1994, Blood 83:2045-2056). En todos estos ensayos, la unión del receptor de CD30 por el mAb anti-CD30 Ki-1 tuvo poco efecto.

La actividad proliferativa de estos mAbs anti-CD30 agonistas en las líneas celulares de Hodgkin sugirió que las mAbs anti-CD30 que poseen actividad de señalización no tendrían ninguna utilidad en el tratamiento de HD.

Por otra parte, se ha mostrado recientemente que los mAbs anti-CD30 pueden inhibir el crecimiento de las células ALCL, incluyendo Karpas-299, induciendo a la detención del ciclo celular y no induciendo a la apoptosis (Hubinger...

1. Un anticuerpo que (i) se enlaza immunoespecíficamente con CD30 y (ii) por sí mismo ejerce un efecto citostático o citotóxico en una línea celular de la enfermedad de Hodgkin, donde dicho anticuerpo ejerce el efecto citostático o citotóxico en la línea celular de la enfermedad de Hodgkin en ausencia de una conjugación a un agente citostático o citotóxico, respectivamente, para el uso en el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin.

2. El anticuerpo según la reivindicación 1, siendo el anticuerpo humano, humanizado o quimérico.

3. El anticuerpo según la reivindicación 2, donde el anticuerpo compite para unirse con CD30 con el anticuerpo monoclonal AC10.

4. El anticuerpo según la reivindicación 2, donde el anticuerpo compite para unirse con CD30 con el anticuerpo monoclonal HeFi-1.

5. El anticuerpo según la reivindicación 3, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:4, la SEC ID nº:6, y la SEC ID nº:8, y comprende una región variable de cadena ligera comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº: 12, la SEC ID nº:14 y la SEC ID nº:16.

6. El anticuerpo según la reivindicación 3, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene al menos un 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID nº:2, y una región variable de cadena ligera que tiene al menos un 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID nº:10.

7. El anticuerpo según la reivindicación 6, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera comprendiendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº: 2 y la SEC ID nº: 10, respectivamente.

8. El anticuerpo según la reivindicación 4, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:20, la SEC ID nº:22, y la SEC ID nº:24, y comprende una región variable de cadena ligera comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:28, la SEC ID nº:30 y la SEC ID nº:32.

9. El anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, donde el anticuerpo se conjuga a un agente citotóxico.

10. El anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, donde el efecto citostático o citotóxico se exhibe al emplear un método comprendiendo:

11. Una composición farmacéutica para el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin comprendiendo:

12. La composición según la reivindicación farmacéutica 11, donde el anticuerpo compite para unirse con CD30 con el anticuerpo monoclonal AC10.

13. La composición farmacéutica según la reivindicación 11, donde el anticuerpo compite para unirse con CD30 con el anticuerpo monoclonal HeFi-1.

14. La composición farmacéutica según la reivindicación 12, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:4, la SEC ID nº:6, y la SEC ID nº:8, y comprende una región variable de cadena ligera comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:12, la SEC ID nº: 14 y la SEC ID nº:16.

15. La composición farmacéutica según la reivindicación 12, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene al menos un 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID nº:2, y una región variable de cadena ligera que tiene al menos un 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID nº:10.

16. La composición farmacéutica según la reivindicación 15, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera comprendiendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:2 y la SEC ID nº:10, respectivamente.

17. La composición farmacéutica según la reivindicación 13, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:20, la SEC ID nº:22, y la SEC ID nº:24, y comprende una región variable de cadena ligera comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:28, la SEC ID nº:30 y la SEC ID nº:32.

18. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 14 a 17, en la cual el anticuerpo se conjuga a un agente citotóxico.

19. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, donde el efecto citostático o citotóxico se exhibe al realizar un método comprendiendo:

20. Uso de un anticuerpo que (i) se enlaza immunoespecíficamente a CD30 y (ii) por sí mismo ejerce un efecto citostático o citotóxico en una línea celular de la enfermedad de Hodgkin, donde dicho anticuerpo ejerce el efecto citostático o citotóxico en la línea celular de la enfermedad de Hodgkin en ausencia de una conjugación a un agente citostático o citotóxico, respectivamente, en la producción de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin.

21. El uso según la reivindicación 20, siendo el anticuerpo humano, humanizado o quimérico.

22. El uso según la reivindicación 21, donde el anticuerpo compite para unirse con CD30 con el anticuerpo monoclonal AC10.

23. El uso según la reivindicación 21, donde el anticuerpo compite para unirse con CD30 con el anticuerpo monoclonal HeFi-1.

24. El uso según la reivindicación 22, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:4, la SEC ID nº:6, y la SEC ID nº:8, y comprende una región variable de cadena ligera comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:12, la SEC ID nº:14 y la SEC ID nº:16.

25. El uso según la reivindicación 22, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que tiene al menos un 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID nº:2, y una región variable de cadena ligera que tiene al menos un 95% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID nº:10.

26. El uso según la reivindicación 25, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera comprendiendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº: 2 y la SEC ID nº: 10, respectivamente.

27. El uso según la reivindicación 23, donde el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:20, la SEC ID nº:22, y la SEC ID nº:24, y comprende una región variable de cadena ligera comprendiendo regiones de determinación complementarias teniendo las secuencias de aminoácidos de la SEC ID nº:28, la SEC ID nº:30 y la SEC ID nº:32.

28. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27, donde el anticuerpo se conjuga a un agente citotóxico.

29. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 20 a 27, donde el efecto citostático o citotóxico se expone al emplear un método comprendiendo: