Una proteína de fusión de anticuerpo humanizado y de IL-2, designada como hu14.

18-IL2, que se enlaza de manera específica con el GD2 y que estimula una inmunofunción, que comprende la cadena ligera de la SEQ ID No. 5 y la cadena pesada de la SEQ ID No. 6

Anticuerpo humanizado (h14.18) del anticuerpo 14.18 de ratón que se enlaza con GD2 y su fusión con la IL-2.

Esta invención se refiere, de forma general, a anticuerpos modificados. De una manera más particular, la invención se refiere a anticuerpos modificados con una inmunogenicidad reducida, que se enlazan de manera específica con el glicoesfingolípico GD2 de la superficie de las células humanas, y a su uso como agentes terapéuticos.

Fundamento de la invención

Durante años ha habido progresos significativos en el desarrollo de terapias basadas en anticuerpos. Por ejemplo, los investigadores han identificado, no solamente una variedad de marcadores específicos del cáncer, sino que, también, han identificado una variedad de anticuerpos, que se enlazan de manera específica con dichos marcadores. Los anticuerpos pueden ser usados para suministrar ciertas moléculas, por ejemplo una toxina o una mitad inmunoestimulante, por ejemplo, una citocina, a una célula cancerosa, que exprese el marcador, con el fin de destruir selectivamente a la célula cancerosa.

El anticuerpo 14.18 es un anticuerpo monoclonal derivado del ratón, que está dirigido contra el glicoesfingolípido GD2 de la superficie celular. El GD2 es un disialogangliósido, que es expresado normalmente solo a un nivel significativo sobre las membranas de la superficie externa de las células neuronales, en la que su exposición al sistema inmune está limitada por medio de la barrera hematoencefálica.

Por el contrario, numerosas células tumorales tienen niveles anormales de expresión de glicoesfingolípido en la superficie celular. Por ejemplo, el GD2 es expresado en las superficies de una gran variedad de células tumorales, con inclusión de los neuroblastomas, de los blastomas medulares, de los astrocitomas, de los melanomas, del cáncer pulmonar microcítico, de los osteosarcomas y de otros sarcomas del tejido blando. De este modo, el GD2 es un marcador específico de los tumores conveniente para dirigir a las células tumorales dominios proteicos inmunoestimulantes, con objeto de provocar una respuesta inmune efectiva contra las células tumorales para llevar a cabo su destrucción. Aún cuando el anticuerpo de ratón 14.18 (anticuerpo m14.18) puede contribuir a dirigir a estos dominios proteicos hacia las células tumorales, sus secuencias de aminoácido, derivadas del ratón, pueden menoscabar el deseado efecto terapéutico.

Cuando son administrados a un paciente, los anticuerpos pueden tener una inmunogenicidad asociada en el mamífero huésped. Esto es más probable que ocurra cuando los anticuerpos no son autólogos. Como consecuencia, la eficacia de las terapias basadas en anticuerpos está frecuentemente limitada por una respuesta inmunogénica dirigida contra el anticuerpo terapéutico. Esta respuesta inmunogénica queda acrecentada, de forma típica, cuando el anticuerpo se derive en su totalidad, o en parte, de un mamífero diferente del mamífero huésped, por ejemplo cuando el anticuerpo se derive de un ratón y el receptor sea un ser humano.

Para el uso clínico en seres humanos podría ser adecuado llevar a cabo una modificación de los anticuerpos derivados del ratón para proporcionar anticuerpos que se parezcan más a los humanos de tal manera, que se reduzca o que se minimice la inmunogenicidad del anticuerpo derivado del ratón. La inmunogenicidad del anticuerpo derivado del ratón puede ser reducida por medio de la generación de un anticuerpo quimérico, en el que las regiones constantes de un anticuerpo humano estén fusionadas con los dominios variables del ratón. Sin embargo, los dominios variables del ratón, remanentes, siguen siendo generalmente todavía inmunogénicos en los seres humanos y, por consiguiente, pueden menoscabar la eficacia de una terapia basada en anticuerpos.

Algunos intentos destinados a reducir la inmunogenicidad, tales como el "chapeado" y la "humanización" comprenden la introducción de un gran número de substituciones de aminoácidos y pueden interrumpir el enlace de un anticuerpo con un antígeno. El anticuerpo m14.18 se enlaza con el GD2 con una afinidad moderada. Por consiguiente, se espera que las mutaciones que disminuyan de manera significativa la afinidad del m14.18 con respecto al GD2, hagan que este sea menos efectivo para finalidades terapéuticas en seres humanos. Por lo tanto, existe una necesidad en el estado de la técnica de anticuerpos terapéuticos, que puedan hacer blanco de manera efectiva en el GD2 y que tengan una inmunogenicidad reducida cuando sean administrados a seres humanos.

La publicación WO 01/23573 y las publicaciones Derwent AN 2001-266163 XP002280627 (Kyowa Hakko Kogyo KK) describen un anticuerpo anti-GD2 quimérico recombinante específico con baja inmunoantigenicidad.

La publicación WO 02/066514 (Merck Patent GmbH) describe numerosas versiones del mAb 14.18, que han sido desinmunizadas por medio de la eliminación de epitopos de células T a partir del anticuerpo parental murino, de conformidad con un método informático específico. La solicitud de patente describe, sin indicación de datos biológicos, proteínas de fusión respectivas de anticuerpos 14.18 desinmunizados con la IL-2.

Breve descripción de la invención

De manera general, la presente invención proporciona una proteína de fusión, que comprende una forma modificada del anticuerpo m14.18, que es menos inmunogénica en los seres humanos pero que todavía mantiene la afinidad de enlace del m 14.18 con el GD2 humano.

De una manera más particular, la invención proporciona una proteína de fusión, que comprende una forma humanizada del anticuerpo m14.18 (anticuerpo hu14.18) en el que han sido substituidos varios aminoácidos específicos del ratón, en una o en varias regiones marco, por diversos aminoácidos con objeto de reducir su inmunogenicidad en los seres humanos. La invención proporciona fusiones del anticuerpo hu14.18 con una o más mitades no inmunoglobulina, preferentemente con la IL-2 para reforzar los efectos de la terapia inmune dirigida.

En un aspecto, la presente invención proporciona una región variable de anticuerpo, que incluye la secuencia de aminoácidos indicada en la SEQ ID NO: 1, que define una región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina (región V_L). En otro aspecto, la invención se refiere a una región variable de anticuerpo, que incluye la secuencia de aminoácidos indicada en la SEQ ID NO: 2, que define una región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina (región V_H). En una realización, la invención proporciona una región variable de anticuerpo, en la que la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 está enlazada con la secuencia de aminoácidos indicada en la SEQ ID NO: 2. Las secuencias de aminoácidos pueden estar enlazadas, tal como por medio de un enlace de disulfuro o por medio de un enlace peptídico.

En otro aspecto, la invención se refiere a una región variable de anticuerpo, se que enlaza de manera específica con el GD2 y que incluye, al menos, los aminoácidos 1-23 de la SEQ ID NO: 1, los aminoácidos 1-25 de la SEQ ID NO: 2, o los aminoácidos 67-98 de la SEQ ID NO: 2. Estas secuencias definen regiones marco en las regiones variables de inmunoglobulina del anticuerpo hu14.18. Las regiones marco están descritas con mayor detalle más adelante.

Un aspecto de la invención se refiere a un método para dirigir una célula con GD2 en su superficie e incluye la administración a un paciente de una región variable de anticuerpo de la presente invención. En una realización, la célula diana es una célula tumoral. Otros aspectos de la invención incluyen un ácido nucleico, que codifica la región variable del anticuerpo o una célula, que incluye este ácido nucleico, que puede ser administrado a un paciente o bien que puede ser utilizado para una producción de proteínas in vitro.

De la misma manera, la invención proporciona un polipéptido, que incluye una región variable de anticuerpo de la invención y una porción Fc, que comprende, al menos, un dominio CH2, ácidos nucleicos, que codifican al polipéptido, células, que incluyen los ácidos nucleicos, y métodos para dirigir una célula con GD2 en su superficie por medio de la administración a un paciente del polipéptido, del ácido nucleico o de la célula. En algunas realizaciones de la invención, la porción Fc se deriva de la IgG1.

La región variable del anticuerpo está enlazada, con o sin una porción Fc interviniente, con una mitad no inmunoglobulina. De manera específica, la mitad no inmunoglobulina es una citocina.

Debe...

1. Una proteína de fusión de anticuerpo humanizado y de IL-2, designada como hu14.18-IL2, que se enlaza de manera específica con el GD2 y que estimula una inmunofunción, que comprende la cadena ligera de la SEQ ID No. 5 y la cadena pesada de la SEQ ID No. 6.

2. Un vector que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID No. 4, que contiene las secuencias de ácido nucleico que codifican la proteína de fusión de la reivindicación 1.

3. Composición farmacéutica que comprende la proteína de fusión de la reivindicación 1 y un vehículo o excipiente farmacéutico.

4. Uso de la proteína de fusión de la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento destinado a la estabilización de la progresión de enfermedades en pacientes con cáncer positivo al GD2.

5. Uso de la proteína de fusión de la reivindicación 1 para la fabricación de un medicamento destinado a acrecentar la actividad ADCC y la lisis de NK en pacientes con cáncer positivo al GD2.