PROCEDIMIENTO DE DETECCION DE UNA MOLECULA ADN DIANA.

Un procedimiento para detectar la presencia de una molécula de ADN diana específica que comprende:

a) proporcionar: i) un ácido nucleico diana que tiene una región 3'' adyacente a y secuencia abajo de una región 5''; ii) un primer oligonucleótido que comprende una porción que es complementaria con dicha región 3'' de dicho ácido nucleico diana, y iii) un segundo oligonucleótido, que comprende una porción 3'' y una porción 5'', en el que dicha porción 3'' de dicho segundo oligonucleótido es complementaria con dicha región 5'' de dicho ácido nucleico diana, y en el que dicha porción 5'' de dicho segundo oligonucleótido no es complementaria con dicho ácido nucleico diana, proporcionando de esta manera un brazo de hebra única en el extremo 5'' de dicho segundo oligonucleótido; b) mezclar dicho ácido nucleico diana, dicho primer oligonucleótido y dicho segundo oligonucleótido bajo condiciones en las que dicho primer oligonucleótido y dicha porción 3'' de dicho segundo oligonucleótido se alineancon dicha secuencia de ADN diana para crear una primera estructura de escisión; c) proporcionar un medio de escisión bajo condiciones tales que la escisión de dicha primera estructura de escisión se produzca de preferencia en un sitio localizado dentro de dicho segundo oligonucleótido de una manera dependiente de la alineación de dichos primer y segundo oligonucleótidos sobre dicho ácido nucleico diana, liberando de esta manera el brazo de hebra única de dicho segundo oligonucleótido para generar un tercer oligonucleótido; d) proporcionar una primera estructura de horquilla que tiene un brazo 3'' de hebra única y un brazo 5'' de hebra única bajo condiciones en las que dicho tercer oligonucleótido se alinea con dicho brazo 3'' de hebra única de dicha primera horquilla, creando de esta manera una segunda estructura de escisión; e) proporcionar condiciones bajo las que la escisión de dicha segunda estructura de escisión se produzca por medio de dichos medios de escisión de una manera dependiente de la alineación de dicho tercer oligonucleótido, liberando de esta manera el brazo 5'' de hebra única de dicha segunda estructura de escisión para crear productos de reacción que comprenden un cuarto oligonucleótido y una primera molécula de detección de horquilla escindida, y f) detectar la presencia de dicho cuarto oligonucleótido o dicha primera molécula de detección de horquilla escindida.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: THIRD WAVE TECHNOLOGIES, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 502 SOUTH ROSA ROAD,MADISON, WI 53719.

Inventor/es: LYAMICHEV, VICTOR I., BROW, MARY ANN D., DAHLBERG,JAMES.

Fecha de Publicación: 16 de Marzo de 2008.

Fecha Solicitud PCT: 6 de Junio de 1994.

Fecha Concesión Europea: 19 de Septiembre de 2007.

Clasificación PCT:

C07H21/00 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07H AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS; ACIDOS NUCLEICOS (derivados de ácidos aldónicos o sacáricos C07C, C07D; ácidos aldónicos, ácidos sacáricos C07C 59/105, C07C 59/285; cianohidrinas C07C 255/16; glicales C07D; compuestos de constitución indeterminada C07G; polisacáridos, sus derivados C08B; ADN o ARN concerniente a la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos o su aislamiento, preparación o purificación C12N 15/00; industria del azúcar C13). › Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos.
C07K14/47 C07 […] › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de mamíferos.
C12N1/21 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
C12N15/55 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Hidrolasas (3).
C12N9/12 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › transfieren grupos que contienen fósforo, p. ej. Quinasas (2.7).
C12N9/14 C12N 9/00 […] › Hidrolasas (3.).
C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
C12Q1/70 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen virus o bacteriófagos.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda.

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