METODO DE AMPLIFICACION DE ACIDO NUCLEICO BASADO EN RAMIFICACION EXTENSION (RAMI) Y TRANSCRIPCION IN VITRO.

LA INVENCION SE REFIERE A UN PROCEDIMIENTO MEJORADO QUE PERMITE LA DETECCION ESTANDARIZADA,

RAPIDA Y SENSIBLE, DE UN ACIDO NUCLEICO DIANA DE UN MICROORGANISMO PATOGENO O VIRUS, O DE UN GEN NORMAL O ANORMAL, EN UNA MUESTRA. DICHO PROCEDIMIENTO CONSISTE EN HIBRIDAR UN ACIDO NUCLEICO DIANA CON VARIAS SONDAS OLIGONUCLEOTIDICAS NO SOLAPANTES, QUE HIBRIDAN CON REGIONES ADYACENTES EN EL ACIDO NUCLEICO DIANA, LAS CUALES SE DENOMINAN SONDAS DE CAPTURA/AMPLIFICACION Y SONDAS DE AMPLIFICACION, RESPECTIVAMENTE, EN PRESENCIA DE GRANULOS PARAMAGNETICOS REVESTIDOS CON UNA FRACCION QUE SE UNE A LIGANDO. MEDIANTE LA UNION DE UN LIGANDO UNIDO A UN EXTREMO DE LA SONDA DE CAPTURA/AMPLIFICACION Y LA HIBRIDACION ESPECIFICA DE PARTES DE LAS SONDAS A SECUENCIAS ADYACENTES EN EL ACIDO NUCLEICO DIANA, SE FORMA UN COMPLEJO QUE COMPRENDE EL ACIDO NUCLEICO DIANA, LAS SONDAS Y LOS GRANULOS PARAMAGNETICOS. DICHAS SONDAS SE PUEDEN UNIR A CONTINUACION ENTRE SI, FORMANDO UN COMPLEJO CONSTITUIDO POR LA SECUENCIA DE AMPLIFICACION UNIDA CONTINUA UNIDA A LOS GRANULOS, COMPLEJO QUE SE PUEDE DESNATURALIZAR PARA ELIMINAR EL ACIDO NUCLEICO Y LAS SONDAS NO UNIDAS. ALTERNATIVAMENTE, SE PUEDEN EMPLEAR SONDAS DE AMPLIFICACION Y CAPTURA SEPARADAS, LAS CUALES FORMAN SONDAS CIRCULARES O SONDAS CONTINUAS DE LARGA LONGITUD, Y SE PUEDEN DETECTAR O AMPLIFICAR DIRECTAMENTE, UTILIZANDO UNA TECNICA DE AMPLIFICACION ADECUADA, P.EJ.: PCR, RAM O HSAM, PARA LA DETECCION. LA DETECCION DE LA SECUENCIA DE AMPLIFICACION UNIDA, BIEN DIRECTAMENTE O TRAS LA AMPLIFICACION DE LA MISMA, INDICA LA PRESENCIA DEL ACIDO NUCLEICO DIANA EN UNA MUESTRA. SE PROPORCIONAN ASIMISMO PROCEDIMIENTOS PARA LA DETECCION DE LA SECUENCIA DE AMPLIFICACION, INCLUYENDO UN PROCEDIMIENTO DE AMPLIFICACION DE SEÑAL DE HIBRIDACION Y UN PROCEDIMIENTO DE AMPLIFICACION POR RAMIFICACION-EXTENSION.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: ZHANG, DAVID Y.
BRANDWEIN, MARGARET
HSUIH, TERENCE.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 82-84 165TH STREET, JAMAICA, NY 11432.

Inventor/es: ZHANG, DAVID, Y., BRANDWEIN, MARGARET, HSUIH, TERENCE, C. H.

Fecha de Publicación: 1 de Mayo de 2007.

Fecha Solicitud PCT: 30 de Julio de 1997.

Clasificación Internacional de Patentes:

C07H21/02 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07H AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS; ACIDOS NUCLEICOS (derivados de ácidos aldónicos o sacáricos C07C, C07D; ácidos aldónicos, ácidos sacáricos C07C 59/105, C07C 59/285; cianohidrinas C07C 255/16; glicales C07D; compuestos de constitución indeterminada C07G; polisacáridos, sus derivados C08B; ADN o ARN concerniente a la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos o su aislamiento, preparación o purificación C12N 15/00; industria del azúcar C13). › C07H 21/00 Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos. › con ribosilo como radical sacárido.
C07H21/04 C07H 21/00 […] › con desoxirribosilo como radical sacárido.
C12P19/34 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 19/00 Preparación de compuestos que contienen radicales sacárido (ácido cetoaldónico C12P 7/58). › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
C12Q1/70 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen virus o bacteriófagos.

Clasificación PCT:

C07H21/02 C07H 21/00 […] › con ribosilo como radical sacárido.
C07H21/04 C07H 21/00 […] › con desoxirribosilo como radical sacárido.
C12P19/34 C12P 19/00 […] › Polinucleótidos, p. ej. ácidos nucleicos, oligorribonucleótidos.
C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.
C12Q1/70 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen virus o bacteriófagos.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Mónaco, Irlanda, Finlandia, Oficina Europea de Patentes.

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