CONSTRUCTO DE EXPRESION CIRCULAR PARA APLICACIONES DE TERAPIA GENICA.

Procedimiento para la preparación de un constructo de expresión circular,

cerrado en forma de anillo, a partir de una doble cadena de ADN, que se compone de los siguientes pasos: a) Corte de una secuencia de ADN bicatenario de un plásmido amplificable en células procarióticas o eucarióticas mediante una digestión primaria con endonucleasas de restricción, b) en la que los sitios de corte limitan directamente por ambos lados y sin bases intercaladas las secuencias de un casete de expresión compuesto por i. al menos una secuencia promotora, ii. al menos una secuencia codificante y iii. al menos una secuencia de poliadenilación, y c) ligación intramolecular siguiente de los fragmentos de restricción generados de manera que la reacción de ligación proporcione una doble cadena de ADN cerrada covalentemente (cierre de anillo), seguida de d) una digestión secundaria de la mezcla de reacción con una endonucleasa de restricción que reconoce y corta una secuencia de reconocimiento que no está presente en el constructo de expresión que se ha de preparar pero que sí aparece al menos una vez en el resto del plásmido biológicamente amplificable, y e) degradación simultánea o posterior del resto de cadena abierta del plásmido biológicamente multiplicable con una exonucleasa específica para los extremos 3' y 5' del ADN y f) purificación del casete de expresión cerrado en forma de anillo de una doble cadena de ADN.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: MOLOGEN AG.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: FABECKSTRASSE 30,14195 BERLIN.

Inventor/es: SCHROFF, MATTHIAS, SMITH, COLIN.

Fecha de Publicación: 1 de Mayo de 2007.

Fecha Solicitud PCT: 23 de Enero de 2003.

Clasificación Internacional de Patentes:

C08K1/24

Clasificación PCT:

A61K48/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica.
C12N15/66 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Métodos generales para insertar un gen en un vector para formar un vector recombinante, utilizando la escisión y la unión; Utilización de "linkers" no funcionales o de adaptadores, p. ej. "linkers" que contienen la secuencia para una endonucleasa de restricción.
C12N15/85 C12N 15/00 […] › para células animales.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Oficina Europea de Patentes, Lituania, Letonia.

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