AMPLIFICACION DEL ADN DE UNA UNICA CELULA.
Un método para la amplificación de ADN, que comprende los pasos de:
(a) suministro de la muestra que contiene el ADN;
(b) digestión del ADN que se va a amplificar, con una endonucleasa de restricción en condiciones adecuadas para obtener fragmentos de ADN de longitud similar, en donde dicha endonucleasa de restricción sea capaz de proporcionar salientes 5' en los que el nucleótido terminal del saliente se fosforila, o salientes 3' en los que el nucleótido terminal del saliente se hidroxila, sobre dichos fragmentos de ADN;
(c) reasociación de por lo menos un cebador a dichos fragmentos de ADN, en donde,
(ca) (caa) simultáneamente ó a continuación, los oligonucleótidos que representan un primer cebador se hibridan a dichos salientes 5' sobre dichos fragmentos de ADN del paso (b) y en donde los oligonucleótidos que representan un segundo cebador hibridan a los salientes 3' generados por el primer cebador
y en donde dicho primero y segundo cebador son de diferente longitud;
(cab) dicho segundo cebador se liga a dichos salientes 5'; y
(cac) dicho primer cebador se elimina de dichos fragmentos de ADN; ó
(cb) (cba) simultáneamente o a continuación, los oligonucleótidos que representan un primer cebador, en donde el nucleótido en el términal 5' se fosforila, son hibridados a dichos salientes 5' sobre dichos fragmentos de ADN del paso (b) y en donde los oligonucleótidos que representan un segundo cebador
hibridan con dicho primer cebador; y
(cbb) dicho primer y segundo cebador están ligados a dichos fragmentos de ADN; ó
(cc) (cca) los oligonucleótidos que representan dicho cebador se hibridan a dichos salientes 3' de forma que se generan salientes 5'; y
(ccb) dicho cebador se liga a los extremos recesivos 5' de dichos fragmentos de ADN;
(d) relleno de los salientes 5' generados; y
(e) amplificación de dichos fragmentos de ADN con cebadores que son capaces de hibridar con la
cadena complementaria de dicho(s) cebador(es) del paso (c).
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: MICROMET AG.
Nacionalidad solicitante: Alemania.
Dirección: AM KLOPFERSPITZ 19,82152 MARTINSRIED.
Inventor/es: KLEIN, CHRISTOPH, SCHMIDT-KITTLER, OLEG.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 17 de Septiembre de 1999.
Fecha Concesión Europea: 27 de Febrero de 2002.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Oficina Europea de Patentes, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania, Armenia, Azerbayán, Bielorusia, Ghana, Gambia, Kenya, Kirguistán, Kazajstán, Lesotho, República del Moldova, Malawi, Federación de Rusia, Sudán, Sierra Leona, Tayikistán, Turkmenistán, República Unida de Tanzania, Uganda, Zimbabwe, Burkina Faso, Benin, República Centroafricana, Congo, Costa de Marfil, Camerún, Gabón, Guinea, Malí, Mauritania, Niger, Senegal, Chad, Togo, Organización Regional Africana de la Propiedad Industrial, Swazilandia, Guinea-Bissau, Organización Africana de la Propiedad Intelectual, Organización Eurasiática de Patentes.
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