POLVO DE LIPASA, PROCEDIMIENTO PARA SU PRODUCCION Y SU USO.
Un polvo de lipasa que es un producto granulado que contiene lipasa 1,
3 específica derivada de Rhizomucor sp. o Alcaligenes sp. y un contenido sólido de leche animal, obtenido añadiendo leche animal o crema derivada de leche animal a una solución acuosa que contiene una lipasa 1,3-específica, ajustando el pH de la solución acuosa que contiene la lipasa 1,3-específica a un valor de 6 a 7,5 tras añadir la leche animal o la crema derivada de leche animal a esta, y deshidratando por aspersión la mezcla del mismo
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2005/006908.
Solicitante: THE NISSHIN OILLIO GROUP, LTD..
Nacionalidad solicitante: Japón.
Dirección: 23-1, SHINKAWA 1-CHOME, CHUO-KU,TOKYO 104-8285.
Inventor/es: ARAI,YURI C/O THE NISSHIN OILLIO GROUP,LTD, SUZUKI,JUNKO,C/O THE NISSHIN OILLIO GROUP,LTD, NEGISHI,SATOSHI,THE NISSHIN OILLIO GROUP,LTD, SAKURAI,CHIKA,C/O THE NISSHIN OILLIO GROUP,LTD.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 23 de Diciembre de 2009.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N9/20 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Escisión de triglicéridos, p. ej. por medio de lipasa.
- C12N9/96 C12N 9/00 […] › Estabilización de una enzima por formación de un aducto o de una composición; Formación de conjugaciones de enzimas.
- C12N9/98 C12N 9/00 […] › Preparación de composiciones que contienen enzimas en forma de granulados o de materiales sólidos fluidos (C12N 9/96 tiene prioridad).
- C12P7/64 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 7/00 Preparación de compuestos orgánicos que contienen oxígeno. › Grasas; Aceites; Ceras de tipo éster; Acidos grasos superiores, es decir, con una cadena lineal de al menos siete átomos de carbono unida a un grupo carboxilo; Aceites o grasas oxidadas.
Clasificación PCT:
Fragmento de la descripción:
Polvo de lipasa, procedimiento para su producción y su uso.
Campo técnico de la invención
La presente invención se refiere a un polvo de lipasa (lipasa como polvo) que puede ser usado de forma apropiada en las diversas reacciones de esterificación tales como una reacción de trans-esterificación; métodos para producir el mismo; y una composición de lipasa donde el polvo de lipasa está sumergido o impregnado (o empapado) en aceite graso; un método de trans-esterificación de aceite graso, que comprende la etapa de usar el polvo de lipasa, y similares.
Antecedentes de la invención
Las lipasas son ampliamente usadas en las reacciones tales como la esterificación de varios ácidos carboxílicos tales como ácidos grasos con alcoholes tales como monoalcoholes y polialcoholes, y trans-esterificación entre carboxilatos plurales. En éstas, el método de trans-esterificación es una importante tecnología no sólo para reformar aceites grasos animales y vegetales sino también como métodos para producir varios ésteres grasos, ésteres de azúcares y esteroides. Cuando una lipasa, que es una enzima hidrolítica de ácidos grasos, se usa como catalizador de las reacciones de más arriba, la esterificación se puede llevar a cabo bajo la condición suave tal como a temperatura ambiente a aproximadamente 70ºC. Por lo tanto, la lipasa puede inhibir mejor las reacciones secundarias y reducir los costes de energía en comparación con las reacciones químicas existentes. Además de eso, una lipasa como catalizador es un producto natural y, por ello, seguro y estable. Además, una lipasa puede producir de forma eficaz los compuestos pretendidos a través de su especificidad de sustrato y especificidad de sitio. Sin embargo, incluso si se usa polvo de lipasa tal cual en la esterificación, la actividad no se expresa totalmente. Además, es difícil dispersar uniformemente un lipasa, que es básicamente un producto soluble en agua, dentro de materiales oleosos crudos, y recuperar la misma también es difícil. Por lo tanto, en los métodos convencionales, es común inmovilizar una lipasa a algunos vehículos, tales como una resina de intercambio aniónico (Literatura de Patente 1), resina de adsorción con fenol (Literatura Patente 2), un vehículo hidrofóbico (Literatura Patente 3), resina de intercambio catiónico (Literatura Patente 4) y resina de quelatos (Literatura Patente 5) y usarlos en las reacciones tales como esterificación y trans-esterificación.
Como se menciona más arriba, se ha inmovilizado de forma convencional una lipasa y se ha usado en la esterificación. Sin embargo, la lipasa inmovilizada pierde una actividad de lipasa original a través de la inmovilización. Además, cuando se usó un vehículo poroso, los materiales y productos en crudo se han quedado atrapados en los poros más pequeños y, como resultado, disminuyó el ritmo de intercambio de ésteres. Además, en la trans-esterificación donde se usa la lipasa convencional inmovilizada, el agua que mantiene el vehículo se introduce en el sistema de reacción, y por ello, ha sido difícil evitar las reacciones secundarias tales como producción de diglicérido y monoglicérido en la trans-esterificación de aceites grasos.
En vista de las situaciones arriba mencionadas, se han desarrollado varias tecnologías donde se usa polvo de lipasa. Por ejemplo, se propone un método de trans-esterificación donde en presencia o ausencia de disolvente(s) orgánico(s) inactivo(s), el polvo de lipasa se dispersa dentro de material(es) en crudo que contienen éster en la trans-esterificación de forma que el 90% o más de las partículas del polvo de lipasa disperso puede mantener un tamaño de partícula de 1 a 100 µm en la reacción (Literatura Patente 6). También se propone que se use polvo de enzima, que se obtiene secando solución/soluciones de enzimas que contiene(n) fosfolípido y vitaminas solubles en lípidos (Literatura Patente 7).
Sin embargo, se ha deseado un polvo de lipasa donde la actividad y la estabilidad de la lipasas están además mejoradas.
[Literatura Patente 1] Publicación de Patente Japonesa No. Sho 60-98984
[Literatura Patente 2] Publicación de Patente Japonesa No. Sho 61-202688
[Literatura Patente 3] Publicación de Patente Japonesa No. Hei 2-138986
[Literatura Patente 4] Publicación de Patente Japonesa No. Hei 3-61485
[Literatura Patente 5] Publicación de Patente Japonesa No. Hei 1-2627956
[Literatura Patente 6] Patente Japonesa No. 2668187
[Literatura Patente 7] Publicación de Patente Japonesa No. 2000-106873.
Descripción de la invención
Un objeto de la presente invención es proporcionar un polvo de lipasa donde la actividad y estabilidad de la lipasa están mejoradas.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar un polvo de lipasa donde está mejorada la selectividad 1, 3 de la lipasa.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar composiciones de lipasa donde el polvo de lipasa está sumergido o impregnado en aceite graso.
Todavía otro objeto de la presente invención es proporcionar un método para producir el polvo de lipasa.
Un objeto adicional de la presente invención es proporcionar un método de trans-esterificación de aceite graso, que comprende usar el polvo de lipasa.
Los objetos de más arriba y otros objetos serán evidentes a partir de las siguientes descripciones.
La actividad y estabilidad de la lipasa están extremadamente mejoradas granulando la lipasa con un contenido sólido de leche animal para obtener el polvo de la misma. Además, en caso donde la lipasa es una lipasa 1,3-específica, la selectividad 1, 3 está extremadamente mejorada. La presente invención ha sido completada en base a estos descubrimientos.
A saber, la presente invención proporciona un polvo de lipasa que es un producto granulado que contiene una lipasa y un contenido sólido (material sólido) de leche animal.
La presente invención también proporciona una composición de lipasa donde el polvo de lipasa está sumergido o impregnado en aceite graso.
La presente invención además proporciona un método para producir un polvo de lipasa que comprende añadir leche animal o crema derivada de leche animal a una solución acuosa que contiene una lipasa, y deshidratar por aspersión, deshidratar por congelación o precipitar con disolvente la mezcla de la misma.
La presente invención además proporciona una lipasa para trans-esterificación o esterificación que contiene el polvo de lipasa.
La presente invención además proporciona un método de trans-esterificación de aceite graso, que comprende usar la lipasa para la trans-esterificación.
Mejor modo de llevar a cabo la invención
La lipasa usada en la presente invención incluye una lipoproteín lipasa, una monoacilglicerol lipasa, una diacilglicerol lipasa, una triacilglicerol lipasa, una galactolipasa, una fosfolipasa y similares. En éstas, la triacilglicerol lipasa es preferida.
Los microorganismos que producen estas lipasas incluyen, sin limitarse a bacterias, levaduras, bacterias filamentosas, actinomices y similares, Psudomonas sp., Alcaligenes sp., Arthrobacter sp., Staphylococcus sp., Torulopsis sp., Escherichia sp., Micotorula sp., Propionibacterum sp., Chromobacterum sp., Xanthomonas sp., Lactobacillus sp., Clostridium sp., Candida sp., Geotrichum sp., Sacchromycopsis sp., Nocardia sp., Fuzarium sp., Aspergillus sp., Penicillium sp., Mucor sp., Rhizopus sp., Phycomycese sp., Puccinia sp., Bacillus sp., Streptmycese sp., Thermomyces sp. Y similares.
En la presente invención, en esa, se prefiere una lipasa 1, 3-específica; en particular, una lipasa 1, 3-específica derivada de Rhizomucor sp. y Alcaligenes sp. es más preferida; y una lipasa 1, 3-específica derivada de Rhizomucor miehei que pertenece a Rhizomucor sp., y Alcaligenes sp. es además preferida. Hasta este momento, Rhizomucor miehei a veces suele pertenecer a Mucor sp.
En la presente invención, una lipasa 1, 3-específica derivada Rhizopus sp. y Thermomyces sp. es preferida; en particular la lipasa 1, 3-específica derivada de Rhizopus orizae y Thermomyces lanugenousus es más preferida.
La leche animal...
Reivindicaciones:
1. Un polvo de lipasa que es un producto granulado que contiene lipasa 1,3 específica derivada de Rhizomucor sp. o Alcaligenes sp. y un contenido sólido de leche animal, obtenido añadiendo leche animal o crema derivada de leche animal a una solución acuosa que contiene una lipasa 1,3-específica, ajustando el pH de la solución acuosa que contiene la lipasa 1,3-específica a un valor de 6 a 7,5 tras añadir la leche animal o la crema derivada de leche animal a esta, y deshidratando por aspersión la mezcla del mismo.
2. El polvo de lipasa según la reivindicación 1, donde la lipasa 1,3-específica es una lipasa 1,3-específica derivada de Rhizomucor miehei.
3. El polvo de lipasa según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, donde el contenido sólido de leche animal es un contenido sólido de leche de vaca o crema derivada de leche de vaca.
4. El polvo de lipasa según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 que tiene un contenido en agua de 10% en peso o menos.
5. El polvo de lipasa según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el 90% en peso o más del polvo de lipasa tiene un tamaño de partícula de 1 a 100 µm.
6. Una composición de lipasa donde el polvo de lipasa según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 está sumergido o impregnado en aceite graso.
7. La composición de lipasa según la reivindicación 6, donde la masa del aceite graso en la composición de lipasa es 0,1 a 20 veces la masa del polvo de lipasa.
8. Un método para producir un polvo de lipasa que comprende añadir leche animal o crema derivada de leche animal a una solución acuosa que contiene una lipasa 1,3-específica derivada de Rhizomucor sp. o Alcaligenes sp., ajustar el pH de la solución acuosa que contiene la lipasa 1,3-específica a un valor de 6 a 7,5 tras añadir la leche animal o crema derivada de leche animal a esta, y deshidratar por aspersión el mismo.
9. El método según la reivindicación 8, donde el contenido sólido de la leche animal o crema derivada de leche animal añadida es 0,1 a 20 veces la masa del contenido sólido de la solución acuosa que contiene una lipasa.
10. El método según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 9, donde la solución acuosa que contiene una lipasa es una solución de cultivo de lipasa, o una solución de cultivo purificada de la misma.
11. Una lipasa para la trans-esterificación o esterificación que contiene el polvo de lipasa según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
12. Un método de trans-esterificación de aceite graso, que comprende usar la lipasa para la trans-esterificación según la reivindicación 11.
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