Método de recuperación de la actividad de la lipasa.

Un método de recuperación de la actividad de la lipasa, que comprende las etapas de usar una lipasaderivada de Thermomyces sp.

e inmovilizada sobre un soporte, o una composición de polvo de lipasa quecomprende una ayuda de filtro y la lipasa derivada de Thermomyces sp. e inmovilizada sobre un soporte que setritura hasta un tamaño medio de partícula de 1 μm o mayor y menor de 300 μm en una reacción de esterificación otransesterificación que usa un triacilglicerol; separar dicha lipasa de la mezcla de reacción y lavar dicha lipasa ocomposición de polvo de lipasa con triacilglicerol.

Método de recuperación de la actividad de la lipasa.

Campo Técnico de la invención La presente invención se refiere a métodos de recuperación de la actividad de la lipasa tales como varias capacidades de esterificación o transesterificación de una lipasa inmovilizada específica o composición de polvo de lipasa. La presente invención se refiere también a reacciones de esterificación o métodos de transesterificación de aceites y grasas en los que se usa una lipasa inmovilizada o composición de polvo de lipasa recuperada.

Antecedentes de la invención La lipasa se usa generalmente en la reacción de esterificación entre varios ácidos carboxílicos tales como ácidos grasos y alcoholes tales como monoalcoholes y polialcoholes, o en la reacción de transesterificación entre múltiples ésteres carboxílicos. Entre ellas, una reacción de transesterificación es una tecnología importante para modificar grasas y aceites animales y vegetales, y para producir ésteres de varios ácidos grasos, ésteres de azúcar y esteroides. Cuando la lipasa, que es una hidrolasa de grasas y aceites, se usa como catalizador de estas reacciones, la reacción de transesterificación se puede efectuar en las suaves condiciones de temperatura ambiente a 70ºC. De este modo, comparado con las reacciones químicas convencionales, la lipasa no solo inhibe las reacciones secundarias y disminuye los costes de energía sino que también tiene alta seguridad dado que la lipasa como catalizador es un producto natural. Adicionalmente, los compuestos objetivo se pueden producir efectivamente debido a la especificidad por el substrato y a su especificidad por el sitio. Sin embargo, aunque se usa polvo de lipasa directamente en la reacción de transesterificación, la actividad de la lipasa generalmente no se expresa suficientemente. Además, es difícil dispersar uniformemente lipasa que es básicamente soluble en agua en una materia prima basada en aceite, y también es difícil recogerla. Por consiguiente, es común que la lipasa esté inmovilizada sobre cierto soporte tal como una resina de intercambio aniónico (Bibliografía de patentes 1) , una resina de absorción fenólica (Bibliografía de patentes 2) , un soporte hidrófobo (Bibliografía de patentes 3) , una resina de intercambio catiónico (Bibliografía de patentes 4) y una resina de quelato (Bibliografía de patentes 5) , y se use en una reacción de esterificación o transesterificación.

Sin embargo, dado que la actividad de la lipasa disminuye cuando la lipasa está inmovilizada sobre un soporte, se han desarrollado varias tecnologías que usan polvo de lipasa.

Más específicamente, se propone el método que comprende las etapas de dispersar polvo de lipasa en una materia prima que contiene un (unos) éster (es) en presencia o ausencia de un disolvente orgánico inactivo de modo que 90%

o más del tamaño de partícula de las partículas de polvo de lipasa dispersadas se mantiene entre 1 y 100 μm en la reacción de transesterificación, y a continuación efectuar la reacción de transesterificación (Bibliografía de patentes 6) . Adicionalmente, también se propone usar polvo enzimático que se obtiene secando una disolución enzimática que contiene un (unos) fosfolípido (s) y vitamina (s) soluble (s) en agua (Bibliografía de patentes 7) .

Mientras tanto, dado que la lipasa, que es una enzima, es cara, se recoge después de la finalización de la reacción y se usa repetidamente, y se desecha primero cuando la actividad de la lipasa disminuye considerablemente. Sin embargo, si se puede recuperar la actividad disminuida de la lipasa, la usabilidad de la lipasa mejoraría de manera espectacular. De este modo, desde el punto de vista industrial, se ha deseado desarrollar un método efectivo de recuperación de la actividad de la lipasa.

Bibliografía de patentes 1: JP-A 60-98984

Bibliografía de patentes 2: JP-A 61-202688

Bibliografía de patentes 3: JP-A 2-138986

Bibliografía de patentes 4: JP-A 3-61485

Bibliografía de patentes 5: JP-A 1-262795

Bibliografía de patentes 6: JP-B 2668187

Bibliografía de patentes 7: JP-A 2000-106873

Descripción de la invención El objetivo de la presente invención es proporcionar métodos para ser capaces de recuperar la actividad disminuida de la lipasa.

El objetivo adicional de la presente invención es proporcionar métodos de esterificación o métodos de transesterificación cada uno de los cuales comprende la etapa de usar una lipasa inmovilizada o composición de polvo de lipasa cada una de las cuales tiene la actividad de la lipasa recuperada.

La presente invención se ha completado basada en el hallazgo de que, en una lipasa inmovilizada específica o composición de polvo de lipasa que combina un producto triturado de la lipasa inmovilizada específica con una ayuda de filtro, cuando se lava dicha lipasa o composición de polvo de lipasa, cuya actividad de la lipasa ha disminuido, con triacilglicerol, se puede recuperar la actividad original de la lipasa.

A saber, la presente invención proporciona un método de recuperación de la actividad de la lipasa que comprende las etapas de usar una lipasa derivada de Thermomyces sp. e inmovilizada sobre un soporte, o una composición de polvo de lipasa que comprende una ayuda de filtro y la lipasa derivada de Thermomyces sp. e inmovilizada sobre un soporte que se tritura hasta un tamaño medio de partícula de 1 μm o mayor y menor de 300 μm en una reacción de esterificación o transesterificación que usa un triacilglicerol; separar dicha lipasa de la mezcla de reacción y lavar dicha lipasa o composición de polvo de lipasa con triacilglicerol.

La presente invención proporciona también una reacción de esterificación o transesterificación que comprende las etapas de usar una lipasa derivada de Thermomyces sp. e inmovilizada sobre un soporte, o una composición de polvo de lipasa que comprende una ayuda de filtro y la lipasa derivada de Thermomyces sp. e inmovilizada sobre un soporte que se tritura hasta un tamaño medio de partícula de 1 μm o mayor y menor de 300 μm en una reacción de esterificación o transesterificación que usa un triacilglicerol; separar dicha lipasa de la mezcla de reacción y lavarla con triacilglicerol para recuperar su actividad de la lipasa, y a continuación, efectuar una reacción de esterificación o transesterificación usando la lipasa inmovilizada o composición de polvo de lipasa resultantes.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 muestra la disminución de la actividad de transesterificación con el tiempo cuando se usa una composición de polvo de lipasa en la reacción de transesterificación (Ejemplo 1 (3) ) .

La Figura 2 muestra que la actividad de transesterificación se recupera lavando la composición de polvo de lipasa cuya actividad de transesterificación disminuyó según la presente invención (Ejemplo 1 (4) ) .

La Figura 3 muestra que la actividad de transesterificación se recupera lavando la lipasa inmovilizada cuya actividad de transesterificación disminuyó, según la presente invención (Ejemplo 3 (3 2) ) .

Mejor modo de llevar a cabo la invención La lipasa usada en la presente invención se deriva de Thermomyces sp. y está inmovilizada sobre un soporte, preferentemente un soporte de sílice. En la presente invención, es posible usar dicha lipasa directamente o usar dicha lipasa que se tritura con un tamaño medio de partícula de 1 μm o mayor y menor de 300 μm. Más específicamente, es preferible que el tamaño medio de partícula de dicha lipasa inmovilizada sobre un soporte de sílice sea de alrededor de 300 a 1000 μm. Tal lipasa inmovilizada se puede obtener, por ejemplo, como Lipozyme TL-IM producida por Novozymes A/S.

Cuando se tritura tal lipasa inmovilizada, es preferible usar un molino normal y triturarla hasta el tamaño medio de partícula de 1 μm o mayor y menor de 300 μm, preferentemente de 1 a 200 μm, más preferentemente de 1 a 100 μm, y particular y preferentemente de 20 a 100 μm. Los ejemplos de molino incluyen un mortero, un molino de barras, un molino de cuchillas, una piedra de molino (Mycolloider, Masscolloider) , un molino de café, un molino eléctrico, un molino de púas, un molino de impacto (un molino de martillo, un molino de bolas) , un molino de rodillo, un molino de corriente, un homogeneizador, y un molino ultrasónico.

Cuando la lipasa deseada en la presente invención es el anterior producto triturado, es preferible usarlo en combinación con una ayuda de filtro. Los ejemplos de ayudas de filtro incluyen ayudas de filtro inorgánicas tales como celite y ayudas de filtro orgánicas tales como fibras, por ejemplo, celulosa y sus productos... [Seguir leyendo]

1. Un método de recuperación de la actividad de la lipasa, que comprende las etapas de usar una lipasa derivada de Thermomyces sp. e inmovilizada sobre un soporte, o una composición de polvo de lipasa que comprende una ayuda de filtro y la lipasa derivada de Thermomyces sp. e inmovilizada sobre un soporte que se tritura hasta un tamaño medio de partícula de 1 μm o mayor y menor de 300 μm en una reacción de esterificación o transesterificación que usa un triacilglicerol; separar dicha lipasa de la mezcla de reacción y lavar dicha lipasa o composición de polvo de lipasa con triacilglicerol.

2. El método según la reivindicación 1, en el que el triacilglicerol es líquido a temperatura ambiente.

3. El método según la reivindicación 1, en el que el triacilglicerol incluye un (unos) triglicérido (s) de ácido graso de cadena media.

4. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el triacilglicerol es el aceite materia prima para la transesterificación.

5. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el lavado se efectúa por las etapas 15 de agitar y dispersar la lipasa inmovilizada o la composición de polvo de lipasa usada en la reacción de esterificación o transesterificación en triacilglicerol; y separar la lipasa o la composición de polvo de lipasa del triacilglicerol.

6. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el soporte es sílice.

7. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el tamaño medio de partícula del producto triturado es de 1 a 200 μm.

8. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que la ayuda de filtro es celulosa.

9. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que la ayuda de filtro está en polvo y su tamaño medio de partícula es de 10 a 90 μm.

10. Un método de una reacción de esterificación o transesterificación que comprende las etapas de usar una lipasa derivada de Thermomyces sp. e inmovilizada sobre un soporte, o una composición de polvo de lipasa que 25 comprende una ayuda de filtro y la lipasa derivada de Thermomyces sp. e inmovilizada sobre un soporte que se tritura hasta un tamaño medio de partícula de 1 μm o mayor y menor de 300 μm en una reacción de esterificación o transesterificación que usa un triacilglicerol; separar la lipasa o composición de polvo de lipasa del sistema de reacción y lavarla con triacilglicerol para recuperar su actividad de lipasa; y a continuación, efectuar la reacción de esterificación o transesterificación usando la lipasa inmovilizada o composición de polvo de lipasa resultante y un triacilglicerol.