La invención se relaciona con el uso de un microorganismo de la especie Beauveria bassiana para la protección de una planta leñosa frente al ataque de Euzophera pinguis Haw.

MÉTODO PARA LA PROTECCIÓN DE PLANTAS LEÑOSAS FRENTE A Euzophera pinguis

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se relaciona, en general, con un método para el control biológico del insecto fitófago Euzophera pinguis Haw en plantas leñosas basado en el empleo de un microorganismo entomopatógeno de la especie Beauveria bassiana. La invención también se relaciona con un aislado de B. bassiana con capacidad para proteger plantas leñosas frente a E. pinguis Haw y sus aplicaciones.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El lepidóptero Euzophera pinguis Haw, conocido con los nombres vulgares de "barrenador de ramas" o "abichado" es un insecto fitófago que vive a expensas de plantas de la familia de las oleáceas. El adulto de E. pinguis Haw es una mariposa de 20-25 mm de envergadura alar de color marrón grisáceo con 2 bandas transversales más claras. Deposita unos huevos ovalados, aplanados y reticulados, de color blanquecino que posteriormente viran al rosa. Son difíciles de ver ya que miden 1x0, 75 mm. La larva, blanquecina con matices amarillentos o verdosos, llega a alcanzar los 25 mm. La crisálida, de color marrón, se desarrolla dentro de una estructura de seda, poco tupida [Alvarado, M; Civantos, M., y Durán, J. M. 2008. Plagas. En "El cultivo del olivo", 6ª Edición. Coed. Mundi-Prensa, Consejería de Agricultura y Pesca de la Junta de Andalucía. Madrid. pp: 409-593].

Este lepidóptero se encuentra presente en la mayor parte de Europa y en los países ribereños del Mediterráneo [Y. Arambourg, "Traité D'Entomologie Oleicole", pág. 80-83, Consejo Oleícola Internacional, 1986]. En estos últimos países, sus ataques van dirigidos principalmente al olivo (Olea europaea) , mientras que en las zonas situadas más al norte su huésped más habitual es el fresno (Fraxinus spp. L.) . Aunque las zonas olivareras de Andalucía, Marruecos y Túnez son reconocidas, desde mediados de la década pasada, como las que presentan una mayor población de este lepidóptero [véase Y. Arambourg, op. cit., pág. 82], los niveles de infestación detectados han sido tradicionalmente bajos y se consideraban de escasa o nula repercusión económica para ese cultivo. Sin embargo, en los últimos años, las poblaciones de E. pinguis Haw se encuentran en expansión y comienzan a causar daños de importancia económica que resultan especialmente elevados en las plantaciones de olivos jóvenes, en donde llegan a producir la muerte de plantas completas.

En los olivares de Andalucía, las larvas de E. pinguis Haw pasan el invierno alimentándose, alojadas bajo la corteza de sus árboles huéspedes, sufriendo su transformación a crisálidas y posterior emergencia como mariposas adultas al producirse la subida de temperaturas que acompaña a la entrada de la primavera. Así, coincidiendo con los meses de marzo, abril y mayo suelen encontrarse las mayores poblaciones de individuos adultos. Las mariposas, durante su breve periodo de vida, se aparean y depositan sus huevos sobre la superficie de troncos y ramas, normalmente aprovechando heridas sufridas por la corteza del árbol para facilitar la penetración de las larvas recién eclosionadas.

La subida de temperaturas que se produce en verano hace que la nueva generación de insectos se mantenga en estadio larvario protegida bajo la corteza de la planta y alimentándose a expensas de la misma a la espera de la nueva moderación de temperaturas que se produce a la entrada del otoño, de tal modo que, en torno a los meses de septiembre y octubre, vuelve a producirse una nueva emergencia de adultos y un nuevo periodo reproductivo que dará lugar a la generación de larvas invernales [M. Alvarado, M. Civantos y J. M. Durán, capítulo "Plagas", pág. 438-441 en "El cultivo del Olivo", D. Barranco, R. Fernández-Escobar y L. Rallo, editores, Junta de Andalucía/Ediciones Mundi-Prensa, Madrid, 1996].

En su fase larvaria es cuando E. pinguis Haw produce los daños que la convierten en un peligro para las plantas en las que se hospeda ya que, en ese estadio vital, se alimenta del floema (zona en donde se localiza el sistema vascular de conducción de savia) de sus plantas huésped, produciendo, especialmente en la base del tronco y de las ramas principales, galerías que discurren entre la corteza externa y la parte leñosa de los mismos; dichas galerías alojan a un único individuo y pueden tener hasta 10 cm de longitud con una trayectoria que tiende a formar un anillo alrededor de la rama o tronco al que afecta. De esta forma, al seccionar las conducciones de savia de la planta, se produce un decaimiento por falta de alimento en las ramas afectadas, que amarillean, pierden vigor y productividad, y puede terminar en el secado completo de las mismas o en caídas de estas ramas débiles ayudadas por factores externos, e.g., golpes de viento, etc. El problema es especialmente grave en el caso de las plantas jóvenes, puesto que la escasa sección de su tronco permite que el ataque de un número muy reducido de larvas de E. pinguis Haw corte en su totalidad las vías de savia en la base del tronco y ocasione la muerte del árbol completo.

El control de E. pinguis Haw resulta muy complicado debido a que dicho fitófago pasa la mayor parte de su vida en estado larvario en posición endofítica, dentro de las galerías que excava bajo la corteza de los árboles a los que parasita, en donde se encuentra protegido del contacto con los agentes insecticidas empleados en los tratamientos habituales para el control de las plagas que afectan al olivar. Además, casi siempre están presentes larvas de todas las edades, huevos y crisálidas, debajo de la corteza de los árboles que parasita. Las larvas recién nacidas son las más sensibles y accesibles al control químico.

Actualmente, el control de E. pinguis Haw se lleva a cabo mediante el empleo de compuestos químicos, concretamente, una feromona y Clorpirifos [O, O-dietil O- (3, 5, 6tricloro-2-piridinil) -fosforotioato) ], el único producto actualmente autorizado, recomendado en tratamientos de tronco y ramas principales pero sin mojar las partes verdes, debido al gran efecto del tratamiento sobre la fauna útil.

También se ha obtenido una buena eficacia en el control de E. pinguis Haw mediante la mezcla de Clorpirifos y aceite de verano en los meses de abril-mayo y octubre. En este caso, el tratamiento debe realizarse huyendo de los días calurosos, con la mínima presión y mojando abundantemente el tronco y las ramas principales, no la copa.

No obstante, estos tratamientos químicos presentan importantes inconvenientes, entre los que se encuentran:

- son económicamente costosos: porque se necesitan dosis elevadas de insecticida

y aceite para lograr una penetración efectiva bajo la corteza del árbol;

- son muy agresivos para la planta: los aceites que se emplean como dispersantes

del insecticida y vehículos penetrantes de la corteza son tóxicos; los recubrimientos de la corteza de la planta con estos aceites producen fácilmente resecamiento y agrietamientos de la misma, así como clorosis y sequedad de las hojas (quemaduras) , especialmente en tiempo caluroso; -son ambientalmente muy agresivos: porque se utilizan concentraciones altas de insecticida y su actuación es indiscriminada tanto para especies de insectos perjudiciales al cultivo como para aquellas otras que resultan beneficiosas por su carácter de depredadores de otros insectos perjudiciales; y

- son un peligro potencial de contaminación del fruto: dado que al buscarse una

penetración hasta la zona vascular de la planta existe el riesgo de que los productos utilizados o algunos de sus subproductos de degradación se incorporen a las vías de savia y acaben siendo transportados hasta los frutos, en especial en tratamientos de otoño.

Además, algunos insectos fitófagos pueden desarrollar resistencia a los productos químicos utilizados para el control de la plaga, lo que impide su empleo en el futuro.

La patente española ES 2149073 describe un sistema de detección y captura de E. pinguis Haw basado en el empleo de un atrayente específico para E. pinguis Haw, en donde dicho atrayente consiste en una mezcla de los compuestos Z9, E12tetradecadienol (I) y acetato de Z9, E12-tetradecadienilo (II) ; no obstante, este método requiere el empleo de un procedimiento de captura, e.g., trampas, lo que eleva el coste del control de la plaga, por lo que su empleo en la actualidad se circunscribe al seguimiento de poblaciones del lepidóptero.

Por tanto, resulta necesario desarrollar un método alternativo a los tratamientos químicos para el control... [Seguir leyendo]

1. Uso de un microorganismo de la especie Beauveria bassiana para el control biológico de Euzophera pinguis Haw.

2. Uso de un microorganismo de la especie Beauveria bassiana para la protección de una planta leñosa frente a Euzophera pinguis Haw.

3. Un método para proteger una planta leñosa frente a Euzophera pinguis Haw, que comprende aplicar una cantidad eficaz de un microorganismo de la especie Beauveria bassiana a dicha planta leñosa o una parte de la misma.

4. Método según la reivindicación 3, en el que dicho microorganismo de la especie

B. bassiana es B. bassiana EABb 08/04-Ep (CECT 20746) , o un mutante del mismo que mantiene la capacidad de proteger a una planta leñosa frente a E. pinguis Haw.

5. Método según la reivindicación 3 ó 4, en el que dicho microorganismo de la especie B. bassiana se encuentra en forma de conidias.

6. Método según la reivindicación 3, en el que dicho microorganismo de la especie

B. bassiana se aplica sobre una herida presente en dicha planta leñosa.

7. Método según la reivindicación 3, en el que dicha planta leñosa es una planta leñosa susceptible de ser infestada por E. pinguis Haw.

8. Método según la reivindicación 7, en el que dicha planta leñosa es una planta leñosa perteneciente a la familia Oleaceae.

9. Método según la reivindicación 8, en el que dicha planta leñosa es una planta leñosa perteneciente al género Olea sp. o al género Fraxinus sp.

10. Método según la reivindicación 9, en el que dicha planta leñosa es una planta de olivo (O. europea) .

11. Método según la reivindicación 3, en el que dicho microorganismo de la especie

B. bassiana se aplica a la planta leñosa en forma de una composición agrícola que comprende, además, un vehículo agrícolamente aceptable.

12. Un método para el tratamiento de la infestación causada por Euzophera pinguis Haw en una planta leñosa que comprende aplicar una cantidad eficaz de un microorganismo de la especie Beauveria bassiana a los huevos y a las larvas de

E. pinguis Haw presentes en dicha planta leñosa.

13. Método según la reivindicación 12, en el que dicho microorganismo de la especie B. bassiana se encuentra en forma de conidias.

14. Método según la reivindicación 12, en el que dicho microorganismo de la especie B. bassiana es B. bassiana EABb 08/04-Ep (CECT 20746) , o un mutante del mismo que mantiene la capacidad de proteger a una planta leñosa frente a E. pinguis Haw.

15. Método según la reivindicación 12, en el que dicha planta leñosa es una planta leñosa perteneciente a la familia Oleaceae, preferentemente, una planta leñosa perteneciente al género Olea sp. o al género Fraxinus sp., más preferentemente, una planta de olivo (O. europea) .

16. Un método para reducir la población larvaria de Euzophera pinguis Haw que comprende poner en contacto una población de larvas de E. pinguis Haw con una cantidad eficaz de un microorganismo de la especie Beauveria bassiana.

17. Método según la reivindicación 16, en el que dicho microorganismo de la especie B. bassiana es B. bassiana EABb 08/04-Ep (CECT 20746) , o un mutante del mismo que mantiene la capacidad de proteger a una planta leñosa

frente a E. pinguis Haw.

18. Un microorganismo de la especie Beauveria bassiana cepa EABb 08/04-Ep depositado en la Colección Española de Cultivos tipo (CECT) con número de acceso 20746, con capacidad de proteger a una planta leñosa frente a Euzophera pinguis Haw, o un mutante de dicho microorganismo que mantiene dicha capacidad de proteger a una planta leñosa frente a E. pinguis Haw.

19. Un cultivo biológicamente puro de un microorganismo según la reivindicación 18.

20. Una conidia de un microorganismo según la reivindicación 18.

21. Una c omposición agrícola que comprende un microorganismo según la

reivindicación 18, un cultivo según la reivindicación 19, o una conidia según la 20 reivindicación 20, y un vehículo agrícolamente aceptable.

OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS

Nº solicitud: 201030539

ESPAÑA

Fecha de presentación de la solicitud: 14.04.2010

Fecha de prioridad:

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

51 Int. Cl. : A01N63/04 (2006.01) A01P7/04 (2006.01)

DOCUMENTOS RELEVANTES

Categoría 56 Documentos citados Reivindicaciones afectadas A QUESADA-MORAGA E. et al. Endophytic colonization of opium poppy, Papaver somniferum, by an entomopathogenic Beauveria bassiana strain. Mycopathologia. 2006, Vol. 161, página.

32. 329, todo el documento. 1-21 A OWNLEY B. H. et al. Beauveria bassiana: endophytic colonization and plant disease control. Journal of Invertebrate Pathology. 15.03.2008, Vol. 98, página.

26. 270, todo el documento. 1-21 A QUESADA-MORAGA E. et al. Selection of Beauveria bassiana isolates for control of the whiteflies Bemisia tabaci and Trialeurodes vaporariorum on the basis of their virulence, thermal requirements and toxicogenic activity. Biological Control. 29.11.2005, Vol. 36, página.

27. 287, todo el documento. 1-21 A SERRANO N. et al. Euzophera pinguis Haw: ciclo biológico y control químico en olivar. Revista de Fruticultura. Marzo-Abril/2010, Nº 4, todo el documento. 1-21 Categoría de los documentos citados X: de particular relevancia Y: de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categoría A: refleja el estado de la técnica O: referido a divulgación no escrita P: publicado entre la fecha de prioridad y la de presentación de la solicitud E: documento anterior, pero publicado después de la fecha de presentación de la solicitud El presente informe ha sido realizado • para todas las reivindicaciones • para las reivindicaciones nº : Fecha de realización del informe 02.02.2012 Examinador M. Cumbreño Galindo Página 1/4

INFORME DEL ESTADO DE LA TÉCNICA

Nº de solicitud: 201030539

Documentación mínima buscada (sistema de clasificación seguido de los símbolos de clasificación) A01N, A01P Bases de datos electrónicas consultadas durante la búsqueda (nombre de la base de datos y, si es posible, términos de búsqueda utilizados) INVENES, EPODOC, WPI, BIOSIS, MEDLINE, NPL, EMBASE, AGRICOLA, BIOENG, BIOTECHNO, CABA

Informe del Estado de la Técnica Página 2/4

OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 201030539

Fecha de Realización de la Opinión Escrita: 02.02.2012

Declaración

Novedad (Art. 6.1 LP 11/1986) Reivindicaciones Reivindicaciones 1-21 SI NO Actividad inventiva (Art. 8.1 LP11/1986) Reivindicaciones Reivindicaciones 1-21 SI NO

Se considera que la solicitud cumple con el requisito de aplicación industrial. Este requisito fue evaluado durante la fase de examen formal y técnico de la solicitud (Artículo 31.2 Ley 11/1986) .

Base de la Opinión.

La presente opinión se ha realizado sobre la base de la solicitud de patente tal y como se publica.

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OPINIÓN ESCRITA

Nº de solicitud: 201030539

1. Documentos considerados.

A continuación se relacionan los documentos pertenecientes al estado de la técnica tomados en consideración para la realización de esta opinión.

Documento Número Publicación o Identificación Fecha Publicación D01 QUESADA-MORAGA E. et al. Mycopathologia. Vol. 161, página.

32. 329 2006 D02 OWNLEY B. H. et al. Journal of Invertebrate Pathology. Vol. 98, página.

26. 270 15.03.2008 D03 QUESADA-MORAGA E. et al. Biological Control. Vol. 36, página.

27. 287 29.11.2005 D04 SERRANO N. et al. Revista de Fruticultura. Nº 4 03.04.2010

2. Declaración motivada según los artículos 29.6 y 29.7 del Reglamento de ejecución de la Ley 11/1986, de 20 de marzo, de Patentes sobre la novedad y la actividad inventiva; citas y explicaciones en apoyo de esta declaración La presente invención tiene por objeto el uso de un microorganismo de la especie Beauveria bassiana para el control biológico de Euzophera pinguis Haw y un método para proteger una planta leñosa frente a Euzophera pinguis Haw o tratar una infestación causada por dicho insecto que comprende aplicar Beauveria bassiana EABb 08/04-Ep (CECT 20746) (reivindicaciones de la 1 a la 17) . También tiene por objeto un microorganismo de la especie Beauveria bassiana cepa EABb 08/04-Ep depositado en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT) con número de acceso 20746, así como un cultivo biológicamente puro o una conidia del mismo y una composición agrícola que lo comprende (reivindicaciones de la 18 a la 21) .

D01 explica el aislamiento del hongo Beauveria bassiana cepa EABb 04/01-Tip de la larva de Timaspis papaveris, la cual constituye una seria plaga para la adormidera en España, y estudia la colonización fúngica, así como su modo de penetración. Después de la inoculación de conidia con un espray foliar, los métodos microbiológicos demostraron que el 100% de las plantas examinadas eran colonizadas endofíticamente por el hongo y también se observaron en las hojas nuevas y en la envoltura de las semillas. Estos resultados pueden tener implicaciones en el control biológico de T. papaveris utilizando Beauveria bassiana.

D02 expone que la aplicación de Beauveria bassiana a las semillas produce la colonización endofítica de las plántulas del tomate y del algodón y confiere protección contra los patógenos Rhizoctonia solani y Pythium myriotylum, causantes del marchitamiento fúngico de plántulas y de la pudrición de la raíz. Comprueba que el grado de control de la enfermedad logrado depende de la densidad de población de las conidias de Beauveria bassiana en las semillas.

D03 evalúa la infectividad, los requerimientos térmicos y la actividad toxicogénica de 25 aislados del hongo Beauveria bassiana con el fin de seleccionar potenciales microinsecticidas para el control de las moscas blancas. En base a su virulencia y requerimientos térmicos, tres aislados resultaron ser buenos candidatos para el control de la mosca blanca en invernadero.

D04 describe el ciclo biológico de Euzophera pinguis Haw y su posible control químico.

NOVEDAD Y ACTIVIDAD INVENTIVA

Los documentos citados anticipan microorganismos de la especie Beauveria bassiana para el control biológico de diferentes plagas como las causadas por Timaspis papaveris, Rhizoctonia solani, Pythium myriotylum o Bemisia tabaco, siendo conocido en el estado de la técnica el uso de los hongos entomopatógenos del género Beauveria y, más concretamente, de la especie B. bassiana con tales fines. Sin embargo, en la documentación y bases de datos consultadas no se ha encontrado ningún documento en el que se haga referencia al uso de la especie Beauveria bassiana para el control biológico de Euzophera pinguis Haw ni tampoco a la cepa Beauveria bassiana EABb 08/04-Ep depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT) con número de acceso 20746. Por tanto, las reivindicaciones de la 1 a la 21 se pueden considerar nuevas a la vista del estado de la técnica y presentan actividad inventiva.

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