Composiciones y métodos para el tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con la señalización de citocinas que implican anticuerpos que se unen a IL-22 y a IL-22R.

Un anticuerpo que se une específicamente a IL-22, siendo el anticuerpo:

(a) un anticuerpo producido a partir de un hibridoma seleccionado entre 8E11.9 (Nº de Referencia ATCC PTA-7319) y 3F11.3 (Nº de Referencia ATCC PTA-7312);

(b) una forma madurada por afinidad del anticuerpo de (a);

(c) un fragmento de unión a antígeno del anticuerpo de (a) o (b); o

(d) una forma humanizada del anticuerpo de (a), (b), o (c)

Composiciones y métodos para el tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con la señalización de atocinas que implican anticuerpos que se unen a IL-22 y a IL-22R

Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional de los Estados Unidos N°: 60/741.640, presentada el 2 de diciembre de 2005, y la Solicitud Provisional de los Estados Unidos N° 60/822.597, presentada el 16 de agosto de 2006, cuya divulgación se incorpora en este documento por referencia en su totalidad.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones y métodos útiles para el diagnóstico y tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con la señalización de citocinas.

Antecedentes de la invención

Diversas enfermedades y trastornos están asociados con la inflamación. La inflamación es un proceso asociado con el reclutamiento de células inflamatorias (por ejemplo, leucocitos) a un sitio de lesión o infección. La inflamación generalmente protege al organismo frente a infecciones y lesiones. Sin embargo, la inflamación excesiva o inadecuada puede tener efectos perjudiciales. Los trastornos autoinmunitarios, por ejemplo, a menudo desencadenan la inflamación dando como resultado la destrucción de los tejidos corporales normales. La inflamación también está relacionada con el cáncer. Véase, por ejemplo, Coussens et al. (2002) Nature 420:860-867. Por ejemplo, la inflamación crónica asociada con la enfermedad inflamatoria del intestino (Eli) está fuertemente correlacionada con la carcinogénesis del colon. Durante la respuesta inflamatoria, determinadas células inflamatorias producen agentes que promueven la angiogénesis, reducen la actividad antitumoral de las células T citotóxicas, en inducen mutaciones en el ADN, de este modo creando un ambiente que promueve la progresión tumoral. Id.

IL-23 es una citocina heterodimérica que desempeña un papel dominante en trastornos autoinmunitarios/inflamatorios, y en particular en la inflamación crónica. Por ejemplo, estudios en ratones han revelado que IL-23 es esencial para el desarrollo de encefalomielitis alérgica experimental (inflamación autoinmunitaria del cerebro), que es un modelo para la esclerosis múltiple; de artritis inducida por colágeno, que es un modelo para la artritis reumatoide; y de la hipersensibilidad de tipo retardado. IL-23 también funciona para mantener la colitis establecida (una forma de Eli). La expresión transgénica de IL-23 da lugar a una respuesta inflamatoria sistémica, y la desregulación de IL-23 da lugar a la enfermedad eccematosa de la piel (una afección inflamatoria de la piel). IL-23 estimula a una población única de células T (células Thn-17), que a su vez Inducen la producción de IL-17 y de citocinas proinflamatorias. Para una revisión de los papeles de IL-23 en la Inflamación y la autoinmunidad véase, por ejemplo, Hunter (2005) Nat. Rev. Immunol. 5:521-531; y Holscher (2005) Curr. Opln. Invest. Drugs 6:489-495. También se ha demostrado que IL-23 promueve el crecimiento tumoral aumentando la angiogénesis y disminuyendo la infiltración de células T citotóxicas en el tumor. Langowskl et al. (2006) Nature 442:461-465.

Los documentos WO 2005/000897 y WO 2005/10238648 describen anticuerpos que se unen a IL-22 y la capacidad de un anticuerpo antl-IL-22 para mejorar los síntomas en un modelo murino de artritis Inducida por colágeno (AIC).

Sumario de la invención

Se proporcionan composiciones y métodos útiles para el diagnóstico y tratamiento de trastornos inflamatorios y trastornos autoinmunitarios (por ejemplo, psoriasis) tal como se definen en las reivindicaciones. Estas y otras realizaciones de la invención se proporcionan en el presente documento. La presente invención se basa, en parte, en la dilucidación de una ruta de señalización en la que IL-23 actúa a través de IL-22 induciendo la expresión de IL-22 a partir de un subconjunto de células T colaboradoras (células Th), es decir, el linaje de Thn-17.

En un aspecto, se proporciona un anticuerpo que se une específicamente a IL-22, en el que el anticuerpo es (a) un anticuerpo producido por un hibridoma seleccionado entre 3F11.3 (N° de Referencia ATCC PTA-37312) y el hibridoma 8E11.9 (N° de Referencia ATCC PTA-7319); (b) una forma madurada por afinidad del anticuerpo de (a); (c) un fragmento de unión a antígeno del anticuerpo de (a) o (b); o (d) una forma humanizada del anticuerpo de (a), (b), o (c).

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra una secuencia nucleotídica (SEC ID N°: 1) de un ADNc que codifica una IL-22 humana nativa. La Figura 2 muestra la secuencia de aminoácidos (SEC ID N°: 2) derivada de la secuencia codificante de la SEC ID N°: 1 mostrada en la Figura 1.

La Figura 3 muestra una secuencia de aminoácidos (SEC ID N°: 3) de IL-22R humana nativa.

La Figura 4 muestra una secuencia de aminoácidos (SEC ID N°: 4) de IL-22BP humana nativa.

La Figura 5 es una lista de todos los anticuerpos para IL-22 generados y sus propiedades respectivas, tal como se describe en el Ejemplo 1. La tinción intracelular se abrevia como IC.

La Figura 6 muestra que los anticuerpos anti-IL-22 son capaces de bloquear la activación de STAT3, tal como se

describe en el Ejemplo 2.

La Figura 7 muestra que tres anticuerpos específicos anti-IL-22 bloquean a IL-22 humana de manera dependiente de la dosis, tal como se describe en el Ejemplo 3.

La Figura 8 muestra que tres anticuerpos específicos anti-IL-22 son capaces de bloquear a IL-22 murina de manera dependiente de la dosis, tal como se describe en el Ejemplo 4.

La Figura 9 es un cálculo de la afinidad de los anticuerpos anti-IL-22 por IL-22 humana, tal como se describe en el Ejemplo 5.

La Figura 10 muestra que los anticuerpos anti-IL-22 detectan la expresión ¡ntracelular de IL-22, tal como se describe en el Ejemplo 6.

La Figura 11 muestra una tinción FACS ¡ntracelular para IL-22 usando anticuerpos anti-IL-22 marcados, tal como se describe en el Ejemplo 6.

La Figura 12 muestra la expresión de IL-22 en células Th1 murinas determinada mediante análisis de nucleasa 5', tal como se describe en el Ejemplo 7.

La Figura 13 muestra la expresión de IL-22 en células T y5 murinas determinada mediante análisis de nucleasa 5', tal como se describe en el Ejemplo 8.

La Figura 14 muestra la expresión de IL-22 en células T humanas activadas determinada mediante análisis de micromatriz, tal como se describe en el Ejemplo 9.

La Figura 15 muestra el nivel de expresión de IL-22 en células T mediante FACS, tal como se describe en el Ejemplo 10.

La Figura 16 muestra la comprobación de anticuerpos anti-IL-22R en células 293 que expresan IL-22R, tal como se describe en el Ejemplo 11.

La Figura 17 muestra que los anticuerpos ant¡-IL-22R pueden bloquear la expresión de la construcción indicadora de STAT3 Inducida por IL-22, tal como se describe en el Ejemplo 12.

La Figura 18 muestra la expresión de IL-22R e IL-10R2 en la superficie de queratinocitos primarios, tal como se describe en el Ejemplo 13.

La Figura 19 muestra que IL-22 induce el engrosamiento de la epidermis humana, tal como se describe en el Ejemplo 14.

La Figura 20 muestra que IL-22 induce la expresión de citoqueratina 16, un marcador para renovación de queratinocitos, tal como se describe en el Ejemplo 14.

La Figura 21 muestra que el tratamiento de la epidermis humana con IL-22 causa la Inducción de la expresión de psoriasina, un gen altamente expresado en la psoriasis, tal como se describe en el Ejemplo 14.

La Figura 22 muestra que el tratamiento de queratinocitos con IL-22 eleva la expresión de varios genes, incluyendo psoriasina, tal como se describe en el Ejemplo 15.

La Figura 23 muestra que la expresión de psoriasina se reduce mediante tratamiento con anticuerpos anti-IL-22 y anti-IL-22R, tal como se describe en el Ejemplo 14.

La Figura 24 muestra que el engrosamiento epidérmico se reduce mediante tratamiento con anticuerpos anti-IL-22 y anti-lL-22R, tal como se describe en el Ejemplo 14.

La Figura 25 muestra que el engrosamiento epidérmico se reduce mediante tratamiento con anticuerpos anti-IL-22 y anti-lL-22R, tal como se describe en el Ejemplo 14.

La Figura 26 muestra que IL-23 e IL-12 inducen el engrosamiento epidérmico con distintas características histológicas, tal como se describe en el Ejemplo 16.

La Figura 27 muestra que IL-23 induce la expresión de IL-22, e IL-22 induce la inflamación dérmica y el engrosamiento epidérmico in vivo, tal como se describe en los Ejemplos 17 y 18.

La Figura 28 muestra que IL-12 e IL-23 inducen la expresión de distintos conjuntos de citocinas,... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo que se une específicamente a IL-22, siendo el anticuerpo:

(a) un anticuerpo producido a partir de un hibridoma seleccionado entre 8E11.9 (N° de Referencia ATCC PTA-7319) y 3F11.3 (N° de Referencia ATCC PTA-7312);

(b) una forma madurada por afinidad del anticuerpo de (a);

(c) un fragmento de unión a antígeno del anticuerpo de (a) o (b); o

(d) una forma humanizada del anticuerpo de (a), (b), o (c).

2. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo se

3. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo se

4. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo se

5. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4,

intracelular.

6. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, humana con una KD de < 1 nM.

7. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 (a), donde el anticuerpo producido por un hibridoma seleccionado entre 8E11.9 (N° de Referencia ATCC PTA-7319) se une a IL-22 humana con una KD de 0,72 nM.

8. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el anticuerpo se une a un marcador detectable.

9. Una composición que comprende un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

10. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o la composición de acuerdo con la reivindicación 9 para su uso en un método para detectar IL-22.

11. El anticuerpo o la composición de acuerdo con la reivindicación 10, donde la IL-22 es intracelular.

12. Un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o la composición de acuerdo con la reivindicación 9 para su uso en un método para diagnosticar un trastorno inflamatorio o un trastorno autoinmunitario.

13. Un método para detectar la expresión de un gen que codifica IL-22 en una muestra de ensayo, que comprende poner en contacto un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 con la muestra de ensayo y detectar la formación de un complejo entre el anticuerpo e IL-22 en la muestra de ensayo.

14. El método de acuerdo con la reivindicación 13, donde la IL-22 es intracelular.

15. Un kit que comprende un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 e instrucciones para usar el anticuerpo para detectar IL-22.

une a IL-22 humana.

une a IL-22 murina.

une a IL-22 humana e IL-22 murina.

en donde el anticuerpo se une a IL-22

en donde el anticuerpo se une a IL-22