Reacción de amplificación de extensión y mellado para la amplificación exponencial de los ácidos nucleicos.

Procedimiento para la amplificación de secuencia de nucleótidos,

que comprende:

combinar un ácido nucleico diana que presenta una secuencia de nucleótidos diana con (i) una polimerasa;

(ii) un primer ácido nucleico de matriz que comprende (a) una primera región de reconocimiento de matriz en el extremo 3' que es complementaria o sustancialmente complementaria al extremo 3' de la primera hebra de la secuencia de nucleótidos diana, (b) un sitio de unión de enzima de mellado y un sitio de mellado aguas arriba de la región de reconocimiento y (c) una región estabilizante aguas arriba de dicho enzima de mellado;

(iii) un segundo ácido nucleico de matriz que comprende (a) una segunda región de reconocimiento de matriz en el extremo 3' que es complementaria o sustancialmente complementaria al extremo 3' del complemento de la primera hebra de la secuencia de nucleótidos diana, (b) un sitio de unión de enzima de mellado y un sitio de mellado aguas arriba de la región de reconocimiento y (c) una región estabilizante aguas arriba de dicho sitio de mellado; y

(iv) uno o más enzimas de mellado que son aptos para mellar en el sitio de mellado de dicho primer y dicho segundo ácidos nucleicos de matriz, en el que un enzima de mellado es apto para mellar ambas de dichas matrices, o cada matriz es apta para ser mellada mediante por lo menos uno de los enzimas de mellado, y en el que dichos uno o más enzimas de mellado no mellan dentro de dicha secuencia diana;

en una reacción de amplificación, bajo unas condiciones en las que la polimerasa extiende los ácidos nucleicos de matriz, generando así unos amplicones de ácido nucleico de matriz extendidos; en el que el ácido nucleico diana no se ha sometido a una etapa de desnaturalización térmica inicial;

la secuencia de nucleótidos diana es de entre 20 y 40 nucleótidos de longitud;

la secuencia de nucleótidos diana comprende de 1 a 5 nucleótidos más que la suma de los nucleótidos de la primera región de reconocimiento de matriz y la segunda región de reconocimiento de matriz; y

las etapas anteriores se llevan a cabo bajo unas condiciones sustancialmente isotérmicas.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E12195331.

Solicitante: Ionian Technologies, LLC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 9995 Summers Ridge Road San Diego, CA 92121 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: ROTH, RICHARD, MAPLES,BRIAN K, HOLMBERG,REBECCA C, MILLER,ANDREW P, PROVINS,JARROD, MANDELL,JEFFREY.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/6844

PDF original: ES-2816748_T3.pdf

 

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