Método para detectar ácido nucleico diana.

Un método para detectar un ácido nucleico diana,

comprendiendo el método:



una etapa de hibridación en la que uno o dos o más ácidos nucleicos parcialmente bicatenarios asociados a uno o dos o más ácidos nucleicos diana, se ponen en contacto con una o dos o más sondas que están en un soporte de cuerpo en fase sólida y se asocian a los uno o dos o más ácidos nucleicos diana, en condiciones que permitan la hibridación, en donde la etapa de hibridación se realiza mediante cromatografía de ácidos nucleicos; y

una etapa de detección en la que se detecta el producto de hibridación producido en la etapa de hibridación, en donde

cada uno de los uno o dos o más ácidos nucleicos parcialmente bicatenarios tienen una parte identificadora monocatenaria solo el extremo 5' de una primera cadena, que consta únicamente de ácidos nucleicos naturales y que es una secuencia identificadora capaz de hibridarse específicamente con una de las sondas y que tiene un marcador o una sustancia de unión a un marcador en el extremo 5' de una segunda cadena, antes de la etapa de hibridación, una etapa de amplificación en la que se obtiene ácido nucleico parcialmente bicatenario como un producto de una reacción de amplificación realizada en un ácido nucleico diana utilizando un primer cebador que tiene la secuencia identificadora y una primera secuencia de reconocimiento que reconoce una primera secuencia de bases en el ácido nucleico diana y que tiene un sitio enlazador capaz de inhibir o detener una reacción de ADN polimerasa dispuesto entre la secuencia identificadora y la primera secuencia de reconocimiento, y un segundo cebador que tiene una segunda secuencia de reconocimiento que reconoce una segunda secuencia de bases en el ácido nucleico diana y el marcador o la sustancia que se une a un marcador;

en donde el sitio enlazador comprende una cadena de alquileno opcionalmente sustituida con un número de elementos de 2 a 40, adyacente a un nucleótido en el cebador a través de un enlace fosfodiéster; y

en donde el sitio enlazador está representado por la siguiente fórmula:

5'-O-CmH2m-O-3' Fórmula (1)

(donde 5' representa el átomo de oxígeno de un enlace fosfodiéster en el extremo 5', 3' representa el átomo de 30 fósforo de un enlace fosfodiéster en el extremo 3', y m es un número entero de 3 a 12).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2012/073710.

Solicitante: NGK INSULATORS, LTD..

Nacionalidad solicitante: Japón.

Dirección: 2-56, Suda-cho, Mizuho-ku Nagoya-shi, Aichi 467-8530 JAPON.

Inventor/es: KAWASE, MITSUO, HIROTA,TOSHIKAZU, NIWA,KOUSUKE.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/6844

PDF original: ES-2736977_T3.pdf

 

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