Reacción de amplificación de extensión y mellado para la amplificación exponencial de los ácidos nucleicos.
Procedimiento para amplificar una secuencia nucleótida contenida en un ácido nucleico diana,
que comprende combinar un ácido nucleico diana que presenta una secuencia nucleótida diana con:
(i) una polimerasa,
(ii) una primera matriz que comprende una secuencia ácido nucleica que comprende una primera región de reconocimiento de matriz en el extremo 3' que es complementaria o sustancialmente complementaria al extremo 3' del complemento de la primera hebra de la secuencia nucleótida diana, y un sitio de unión de enzima de mellado y un sitio de mellado aguas arriba de la región de reconocimiento;
(iii) una segunda matriz que comprende una secuencia ácido nucleica que comprende una segunda región de reconocimiento de matriz en el extremo 3' que es complementaria o sustancialmente complementaria al extremo 3' de la primera hebra de la secuencia nucleótida diana, y un sitio de unión de enzima de mellado y un sitio de mellado aguas arriba de la región de reconocimiento; y
(iv) uno o más enzimas de mellado aptos para mellar en el sitio de mellado de dichas primera y segunda matrices, en el que o bien un enzima de mellado es apto para mellar ambas dichas matrices, o bien cada matriz es apta para ser mellada mediante por lo menos uno de los enzimas de mellado, en el que dichos uno o más enzimas de mellado no mellan dentro de dicha secuencia nucleótida diana;
en el que:
la secuencia nucleótida se amplifica a partir de una muestra y la muestra se añade a la mezcla de reacción o se diluye previamente y se añade a continuación a la mezcla de reacción sin purificación previa del ácido nucleico diana; en el que dicha muestra contiene esporas, virus o células, o la muestra se aísla a partir de un animal y opcionalmente comprende sangre, médula ósea, mucosidad, linfa, tejidos duros (por ejemplo, hígado, bazo, riñón, pulmón u ovario), biopsias, esputo, saliva, lágrimas, heces u orina, o la muestra puede ser una muestra de aguas residuales, agua potable, leche u otro alimento, aire, planta, suelo, u otros materiales sospechosos de contener organismos biológicos,
y la interacción de las matrices con el ácido nucleico diana y las reacciones de extensión de matriz y mellado se realizan en condiciones isotérmicas y sin una etapa de desnaturalización.
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E12195333.
Solicitante: Ionian Technologies, LLC.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 9995 Summers Ridge Road San Diego, CA 92121 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: ROTH, RICHARD, MAPLES,BRIAN K, HOLMBERG,REBECCA C, MILLER,ANDREW P, PROVINS,JARROD, MANDELL,JEFFREY.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/6844 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › Reacciones de amplificación de ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2759872_T3.pdf
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