Purificación de proteínas.
Un proceso para la purificación de una proteína de interés a partir de una mezcla que comprende las etapas de
a) en un ciclo de cromatografía operativo,
cargar un primer volumen de una mezcla que contiene la proteína de interés desde un primer recipiente a una matriz cromatográfica operada de tal manera que la proteína se une a la matriz cromatográfica hasta que se alcanza de un 40 % a un 100 % de la capacidad de unión estática de la matriz cromatográfica;
b) recoger el flujo continuo que contiene la proteína de interés no unida en un segundo recipiente, y
c) en un ciclo de cromatografía operativo adicional, volver a cargar el flujo continuo del segundo recipiente y cargar un segundo volumen de la proteína de interés desde el primer recipiente a la misma matriz cromatográfica, hacerla funcionar de manera que la proteína de interés se una a la matriz cromatográfica hasta que se alcance de un 40 % a un 100 % de la capacidad máxima de unión estática de la matriz cromatográfica,
en donde la recarga del flujo continuo del segundo recipiente a la matriz cromatográfica se realiza antes de la carga del segundo volumen de la mezcla que contiene la proteína de interés desde el primer recipiente a la matriz cromatográfica.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2017/053677.
Solicitante: UCB Biopharma SRL.
Inventor/es: ROSE,MICHAEL HARRY.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K1/16 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 1/00 Procedimientos generales de preparación de péptidos. › por cromatografía.
- C07K1/18 C07K 1/00 […] › Cromatografía de intercambio iónico.
- C07K1/22 C07K 1/00 […] › Cromatografía de afinidad o técnicas análogas basadas en procesos de absorción selectiva.
PDF original: ES-2822918_T3.pdf
Reivindicaciones:
1. Un proceso para la purificación de una proteína de interés a partir de una mezcla que comprende las etapas de
a) en un ciclo de cromatografía operativo, cargar un primer volumen de una mezcla que contiene la proteína de interés desde un primer recipiente a una matriz cromatográfica operada de tal manera que la proteína se une a la matriz cromatográfica hasta que se alcanza de un 40 % a un 100 % de la capacidad de unión estática de la matriz cromatográfica;
b) recoger el flujo continuo que contiene la proteína de interés no unida en un segundo recipiente, y
c) en un ciclo de cromatografía operativo adicional, volver a cargar el flujo continuo del segundo recipiente y cargar un segundo volumen de la proteína de interés desde el primer recipiente a la misma matriz cromatográfica, hacerla funcionar de manera que la proteína de interés se una a la matriz cromatográfica hasta que se alcance de un 40 % a un 100 % de la capacidad máxima de unión estática de la matriz cromatográfica,
en donde la recarga del flujo continuo del segundo recipiente a la matriz cromatográfica se realiza antes de la carga del segundo volumen de la mezcla que contiene la proteína de interés desde el primer recipiente a la matriz cromatográfica.
2. Un proceso para la purificación de una proteína de interés a partir de una mezcla que comprende las etapas de:
a) en un ciclo de cromatografía operativo, cargar un primer volumen de una mezcla que contiene la proteína de interés desde un primer recipiente a una matriz cromatográfica operada de manera que se exceda la capacidad de unión dinámica de la matriz cromatográfica;
b) recoger el flujo continuo que contiene la proteína de interés no unida en un segundo recipiente, y
c) en un ciclo de cromatografía operativo adicional, volver a cargar el flujo continuo del segundo recipiente y cargar un segundo volumen de la proteína de interés desde el primer recipiente a la misma matriz cromatográfica, hacerla funcionar de tal manera que se exceda la capacidad de unión dinámica de la matriz cromatográfica;
en donde la recarga del flujo continuo del segundo recipiente a la misma matriz cromatográfica se realiza antes de cargar el segundo volumen de la mezcla que contiene la proteína de interés desde el primer recipiente a la misma matriz cromatográfica.
3. El proceso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde en la etapa (a) la carga de la proteína de interés se detiene cuando se alcanza al menos un 40 % de la capacidad máxima de unión estática.
4. El proceso de acuerdo con la reivindicación 1, 2 o 3, en donde el ciclo de cromatografía operativo adicional es el ciclo de cromatografía inmediatamente siguiente.
5. El proceso de acuerdo con la reivindicación 1, 2, 3 o 4, en donde la recogida del flujo continuo se inicia en una primera concentración predeterminada de la proteína de interés en el flujo continuo y se detiene en una segunda concentración predeterminada de la proteína de interés en el flujo continuo.
6. El proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde una fracción predeterminada del flujo continuo se recoge en el segundo recipiente.
7. El proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el flujo continuo se procesa antes de volver a cargarse en la matriz cromatográfica, siendo seleccionado el procesamiento entre movimiento o agitación, dilución, ajuste de concentración, ajuste de pH, ajuste de conductividad, intercambio de tampón o disolvente, enfriamiento o calentamiento o cualquier combinación de los mismos.
8. El proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la cromatografía se selecciona de cromatografía de afinidad, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de interacción hidrófoba, cromatografía de modo mixto, cromatografía quiral o cromatografía dieléctrica.
9. El proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde el proceso comprende tres etapas de cromatografía.
10. El proceso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el proceso comprende cromatografía de proteína A seguida de cromatografía de intercambio catiónico seguida de cromatografía de intercambio aniónico.
11. El proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde una, dos, tres o todas la (s) matriz/matrices cromatográfica (s) es/son una columna cromatográfica.
12. El proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en donde la proteína de interés es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo.
13. Un método de fabricación de una proteína de interés que comprende el proceso de purificación de la proteína de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.
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