Métodos para seleccionar y amplificar polinucleótidos.

Un método de secuenciación de un polinucleótido selectivo, que comprende:



a) proporcionar una pluralidad de oligonucleótidos de amplificación inmovilizados sobre un soporte sólido;

b) hibridar una población de sondas de oligonucleótidos con un subconjunto de los oligonucleótidos de amplificación para producir una población de oligonucleótidos de amplificación hibridados, comprendiendo cada una de las sondas de oligonucleótido una primera porción complementaria a uno o más de los oligonucleótidos de amplificación y una segunda porción que comprende una secuencia de una región seleccionada de un polinucleótido plantilla;

c) llevar a cabo la reacción de elongación para elongar los oligonucleótidos de amplificación hibridados para producir una población de oligonucleótidos de captura inmovilizados sobre el soporte sólido, comprendiendo cada uno de los oligonucleótidos de captura una secuencia complementaria de una región seleccionada de un polinucleótido plantilla; en la que los oligonucleótidos de captura comprenden al menos 10 secuencias de captura diferentes;

d) hibridar selectivamente una población de polinucleótidos plantilla con los oligonucleótidos de captura para producir una población de oligonucleótidos de captura hibridados, en el que cada uno de los polinucleótidos plantilla comprende una secuencia adaptadora 5' idéntica a al menos una porción de los polinucleótidos de amplificación que permanecen sin elongar;

e) elongar los oligonucleótidos de captura hibridados para generar una población de productos de elongación, teniendo cada uno de los productos de elongación una primera porción complementaria a un polinucleótido molde y una segunda porción complementaria a al menos una porción de los oligonucleótidos de amplificación no elongados;

f) amplificar los productos de elongación mediante hibridación de uno o más de los oligonucleótidos de amplificación no elongados con uno o más de los productos de elongación, produciendo de este modo una pluralidad de productos de amplificación en fase sólida; y

g) secuenciar los productos de amplificación en fase sólida para obtener al menos secuencias parciales de nucleótidos de los polinucleótidos plantilla.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E16180028.

Solicitante: ILLUMINA, INC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 5200 Illumina Way San Diego, CA 92122 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: RIGATTI,ROBERTO, SABOT,ANDREA, SHEN,MIN-JUI RICHARD.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2763386_T3.pdf

 

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