Análisis exento de marcas de la eficacia de la adición de caperuzas al arn utilizando rnasa h, sondas y cromatografía líquida/espectrometría de masas.
Un metodo exento de radiomarcas para identificar una caperuza del extremo 5' en un acido ribonucleico (ARN) diana,
que comprende los pasos de:
(a) hibridar una sonda etiquetada no radiomarcada con el ARN diana, donde la secuencia de nucleotidos de la sonda etiquetada no radiomarcada es complementaria respecto al extremo 5' del ARN diana, con lo que se forma asi un polinucleotido duplex;
(b) tratar el polinucleotido duplex con RNasa H, con lo que se escinde asi el extremo 5' del ARN diana y se forma un polinucleotido duplex que contiene el extremo 5' del ARN diana;
(c) aislar el polinucleotido duplex, utilizando un sustrato de superficie recubierta que esta recubierto con un reactivo que se une a la sonda etiquetada no radiomarcada;
(d) eliminar el polinucleotido duplex del sustrato de superficie recubierta;
(e) desnaturalizar el polinucleotido duplex, con lo que se produce asi un fragmento monocatenario del extremo 5' del ARN diana y la sonda etiquetada no radiomarcada;
(f) aislar el fragmento monocatenario del extremo 5' del ARN diana;
(g) analizar el fragmento monocatenario del extremo 5' del ARN diana mediante cromatografia liquida/espectrometria de masas (LC-MS); y
(h) identificar la caperuza del extremo 5'.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2016/057499.
Solicitante: NOVARTIS AG.
Nacionalidad solicitante: Suiza.
Dirección: LICHTSTRASSE 35 4056 BASEL SUIZA.
Inventor/es: BEVERLY,MICHAEL.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/6813 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › Ensayos de hibridación.
PDF original: ES-2763822_T3.pdf
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