Un método para producir una escisión de ADN precisa utilizando la actividad nickasa de Cas9.

Un método in vitro para inducir con precisión una escisión de ácido nucleico en una secuencia genética en una célula,

que comprende:

(a) Seleccionar una primera y una segunda diana de ácido nucleico bicatenario en dicha secuencia genética, comprendiendo cada diana de ácido nucleico, en una cadena, un motivo adyacente al protoespaciador (PAM) en una extremidad 3';

(b) diseñar técnicamente dos ARN de direccionamiento de CRISPR (los ARNcr), comprendiendo cada uno:

- una secuencia complementaria a una parte de la cadena opuesta de la diana de ácido nucleico que no comprende el motivo PAM, y

- una secuencia de extensión 3';

(c) proporcionar al menos un ARN de direccionamiento de CRISPR transactivador (ARNcrtra) que comprende una secuencia complementaria a una parte de las secuencias de extensión 3' de dichos ARNcr de b);

(d) proporcionar al menos una nickasa cas9 que es una nucleasa cas9 que alberga un dominio de nucleasa de tipo RuvC no funcional o HNH no funcional y que reconoce dicho motivo (o motivos) PAM;

(e) introducir en la célula dichos ARNcr, dicho (o dichos) ARNcrtra y dicha nickasa Cas9; en donde la célula es un linfocito T,

de forma que cada complejo Cas9-ARNcrtra:ARNcr induzca un suceso de muesca en las dianas de ácido nucleico bicatenario para escindir la secuencia genética entre dichas primera y segunda dianas de ácido nucleico.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2014/061178.

Solicitante: Cellectis S.A.

Nacionalidad solicitante: Francia.

Dirección: 8, rue de la Croix Jarry 75013 Paris FRANCIA.

Inventor/es: DUCHATEAU,PHILIPPE, BERTONATI,CLAUDIA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A01K67/00 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA.A01K CRIA; AVICULTURA, PISCICULTURA, APICULTURA; PESCA; OBTENCION DE ANIMALES, NO PREVISTA EN OTRO LUGAR; NUEVAS RAZAS DE ANIMALES.Cría u obtención de animales, no prevista en otro lugar; Nuevas razas de animales.
  • C12N15/10 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
  • C12N15/82 C12N 15/00 […] › para células vegetales.
  • C12N15/85 C12N 15/00 […] › para células animales.
  • C12N15/90 C12N 15/00 […] › Introducción estable de ADN extraño en el cromosoma.

PDF original: ES-2670531_T3.pdf

 

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