Métodos y sistemas para la identificación de mutaciones conductoras específicas.
Un método para identificar una o más mutaciones conductoras específicas del paciente en una muestra biológica de un paciente con cáncer,
que comprende los pasos de:
a) obtener una pluralidad de ARNm de la muestra biológica;
b) generar una biblioteca de ADNc a partir de la pluralidad de ARNm;
c) amplificar ADNc específicos de la biblioteca de ADNc usando un conjunto de cebadores complementarios a polinucleótidos que codifican proteínas de transducción de señal conocidas;
d) formar constructos de expresión individuales de los ADNc amplificados en los que los ADNc están unidos operativamente a un promotor;
e) formar una matriz direccionable de un primer conjunto de construcciones de expresión que albergan los ADNc amplificados del tumor, y un segundo conjunto de construcciones de expresión de los ADNc de tipo silvestre correspondientes;
f) añadir un vector de expresión que codifica para un gen de Reportero de Translocación de Fluorescencia (FTR) que comprende una porción de gen diana unida a una porción de gen informador específico para cada locus en la matriz;
g) añadir células de ensayo viables a cada locus en condiciones que permitan la transfección de los constructos y vectores de ADN en las células de ensayo; y
h) comparar al menos un atributo de la FTR expresada en las células de ensayo que expresan los ADNc del tumor con sus correspondientes ADNc expresados de tipo salvaje;
proporcionando de ese modo una matriz direccionable de construcciones de expresión que albergan mutaciones candidatas en polinucleótidos que codifican las proteínas de transducción de señales, adecuadas para identificar mutaciones conductoras específicas del paciente en una muestra biológica del paciente con cáncer, en donde un resultado dispar entre las células de ensayo que expresan el ADNc derivado de la muestra biológica del paciente con cáncer y el ADNc de tipo salvaje correspondiente, se usa para identificar el ADNc de la muestra biológica como una mutación conductora específica del paciente candidata.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IL2014/050054.
Solicitante: Novellusdx Ltd.
Nacionalidad solicitante: Israel.
Dirección: Jerusalem Bio-Park Hadasah Medical Center Campus POB 12057 91120 Jerusalem ISRAEL.
Inventor/es: ALTSCHULER,YORAM, TARCIC,GABI.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
- C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
- G01N21/64 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 21/00 Investigación o análisis de los materiales por la utilización de medios ópticos, es decir, utilizando rayos infrarrojos, visibles o ultravioletas (G01N 3/00 - G01N 19/00 tienen prioridad). › Fluorescencia; Fosforescencia.
- G01N33/48 G01N […] › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Material biológico, p. ej. sangre, orina (G01N 33/02, G01N 33/26, G01N 33/44, G01N 33/46 tienen prioridad ); Hemocitómetros (cómputo de glóbulos repartidos sobre una superficie por barrido óptico de la superficie G06M 11/02).
PDF original: ES-2681425_T3.pdf
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