Método para determinar la composición de ácidos nucleicos de una mezcla de ácidos nucleicos.
Método para determinar la composición de ácidos nucleicos en una mezcla de ácidos nucleicos totales que comprende un primer ácido nucleico y un segundo ácido nucleico,
en el que dicho primer ácido nucleico y dicho segundo ácido nucleico se derivan de fuentes diferentes, comprendiendo dicho método:
1) tratar dicha mezcla de ácidos nucleicos totales con un bisulfito, para convertir citosina no metilada en dicha mezcla de ácidos nucleicos totales en uracilo, y obtener una mezcla de ácidos nucleicos totales convertidos;
2) someter dicha mezcla de ácidos nucleicos totales convertidos a PCR cuantitativa fluorescente multiplexada usando un primer conjunto de cebadores de amplificación y un segundo conjunto de cebadores de amplificación, para capturar y amplificar un fragmento de ácido nucleico predeterminado, y obtener una razón R de un producto de amplificación metilado con respecto a un producto de amplificación no metilado de dicho fragmento de ácido nucleico predeterminado, en el que dicho primer ácido nucleico y dicho segundo ácido nucleico contienen ambos dicho fragmento de ácido nucleico predeterminado, y el fragmento de ácido nucleico predeterminado en dicho primer ácido nucleico difiere del fragmento de ácido nucleico predeterminado en dicho segundo ácido nucleico en cuanto al nivel de metilación; dicho primer conjunto de cebadores de amplificación reconoce específicamente el fragmento de ácido nucleico predeterminado convertido, y dicho segundo conjunto de cebadores de amplificación reconoce específicamente el fragmento de ácido nucleico predeterminado no convertido; y se predeterminan una proporción de metilación M1 de dicho fragmento de ácido nucleico predeterminado en el primer ácido nucleico y una proporción de metilación M2 de dicho fragmento de ácido nucleico predeterminado en el segundo ácido nucleico; y
3) basándose en la razón R del producto de amplificación metilado con respecto al producto de amplificación no metilado de dicho fragmento de ácido nucleico predeterminado, la proporción de metilación M1 de dicho fragmento de ácido nucleico predeterminado en el primer ácido nucleico y la proporción de metilación M2 de dicho fragmento de ácido nucleico predeterminado en el segundo ácido nucleico, determinar la composición de ácidos nucleicos en la mezcla de ácidos nucleicos totales;
en el que en la etapa 3), el contenido ε del primer ácido nucleico en la mezcla de ácidos nucleicos totales se determina según la fórmula ε≥(M2+RM2-R)/[R(M2-M1)-(M1-M2)].
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CN2013/080419.
Solicitante: BGI Genomics Co., Limited.
Nacionalidad solicitante: China.
Dirección: Floors 7-14, Building No.7 BGI Park, No.21 Hongan 3rd Street Yantian District, Shenzhen Guangdong 518083 CHINA.
Inventor/es: CHEN,FANG, GUO,JING, JIANG,HUI, PAN,XIAOYU, CHEN,SHENGPEI, ZHU,SHIDA, FAN,FAN, ZHU,JIALOU.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/6827 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › para detección de mutaciones o polimorfismos.
- C12Q1/6851 C12Q 1/00 […] › Amplificación cuantitativa.
- C12Q1/6876 C12Q 1/00 […] › Productos de ácidos nucleicos usados en el análisis de ácidos nucleicos, p. ej. cebadores o sondas.
- C12Q1/6881 C12Q 1/00 […] › para la determinación del tipo de tejido o célula, p. ej. sondas de antígenos de leucocitos humanos [HLA].
- C12Q1/6886 C12Q 1/00 […] › para el cáncer (ensayos inmunológicos para el cáncer G01N 33/574).
PDF original: ES-2685893_T3.pdf
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