Método para determinar la cigosidad del gen fad2 en canola usando PCR de punto final.

Un método para determinar la cigosidad de una planta de canola que comprende un gen fad-2,

comprendiendo dicho método:

obtener una muestra de ADN genómico de dicha planta de canola;

producir una muestra de contacto poniendo en contacto dicha muestra de ADN genómico con un primer cebador y un segundo cebador, en donde dicho primer cebador consiste en SEQ ID NO:2 que une una región de dicho gen fad-2 corriente arriba de una ubicación de un polimorfismo de un solo nucleótido de interés, dicho segundo cebador consiste en SEQ ID NO:3 que une una región de dicho gen fad-2 secuencia abajo del polimorfismo de nucleótido único de interés, en el que dicho primer cebador y dicho segundo cebador producen un amplicón cuando se someten a condiciones de reacción en cadena de la polimerasa (PCR);

someter dicha muestra de contacto a condiciones de PCR, en donde se produce dicho amplicón;

permitir que cada una de una primera sonda fluorescente, cuya secuencia consiste en SEQ ID NO:5, y una segunda sonda fluorescente, cuya secuencia consiste en SEQ ID NO:4, se hibriden con el amplicón durante un período de tiempo y a una temperatura entre 50-70 grados Celsius, hibridándose dicha primera sonda fluorescente con dicho amplicón cuando dicho polimorfismo de un solo nucleótido de interés no está presente en dicho amplicón, hibridándose dicha segunda sonda fluorescente preferentemente con dicho amplicón cuando dicho polimorfismo de un solo nucleótido de interés está presente en dicho amplicón;

aumentar dicha temperatura después del período de tiempo especificado en el paso de permitir;

capturar dicha fluorescencia producida por cada una de dichas sondas primera y segunda durante la etapa de aumentar; y

determinar la cigosidad de dicha planta de canola, comprendiendo la etapa de determinar una comparación de la fluorescencia producida por cada una de las sondas primera y segunda, en donde la fluorescencia de las sondas primera y segunda refleja predominantemente la fluorescencia producida en una muestra de control positivo homocigótica de SNP que indica la presencia de dicho polimorfismo de nucleótido único de interés, reflejando la fluorescencia de las sondas primera y segunda predominantemente la fluorescencia producida en una muestra de control negativa homóloga de SNP, lo que indica una falta de la presencia de dicho polimorfismo de un solo nucleótido de interés y reflejando la fluorescencia de la primera y segunda sonda predominantemente la fluorescencia producida en una muestra de control positivo de SNP heterocigoto, lo que indica que dicha planta de canola comprende un primer alelo que incluye dicho polimorfismo de nucleótido único de interés y un segundo alelo que carece de dicho polimorfismo de nucleótido único de interés.