Partículas de replicón de alfavirus multi-antigénico y métodos.
Un método para preparar una población de partículas de replicón de virus (VRPs) del virus de encefalitis equina venezolana (VEE) que colectivamente codifican y expresan una biblioteca de expresión de un patógeno,
parásito o célula tumoral, en donde las partículas con defecto de propagación no pueden producir partículas de progenie debido a la ausencia en el ARN del replicón de al menos una secuencia que codifica para una proteína estructural del virus VEE requerida para el empaquetamiento del ácido nucleico del replicón, comprendiendo dicho método las etapas de:
a) introducir una pluralidad de ácidos nucleicos de replicón de VEE en una pluralidad de células, en donde dichas células son permisivas para la replicación y empaquetamiento de VEE, en donde dicho ácido nucleico de replicón de VEE comprende al menos una señal de empaquetamiento de virus VEE y al menos una secuencia codificadora heteróloga expresable a partir de dicho ácido nucleico de replicón de VEE, en donde las secuencias que codifican las proteínas estructurales requeridas para el empaquetamiento del ácido nucleico de replicón se distribuyen entre uno o más ácidos nucleicos colaboradores y el ARN de replicón, y en donde el uno o más ácidos nucleicos colaboradores se seleccionan de entre al menos dos moléculas de ARN colaborador o una molécula de ADN, siempre que se elimine al menos una secuencia codificadora de proteína estructural del ARN de replicón, de tal modo que la partícula de VEE resultante tenga defecto de propagación, y en donde la pluralidad de ácidos nucleicos de replicón de VEE codifican la biblioteca de expresión de un patógeno, parásito o célula tumoral, para producir una pluralidad de células modificadas;
b) cultivar dicha pluralidad de células modificadas de la etapa (a) en condiciones que permitan la expresión del uno o más ácidos nucleicos colaboradores, permitiendo la replicación de dicho ácido nucleico de replicón de VEE y el empaquetamiento de dicho ácido nucleico de replicón de VEE para formar VRPs;
c) poner en contacto las células modificadas tras la etapa (b) con un medio acuoso que contiene entre 0,2 M y 5 M de una sal para liberar las VRPs al medio acuoso para producir una disolución que contiene VRPs; y
d) recolectar las VRPs de la disolución que contiene VRPs de la etapa (c);
en donde el ácido nucleico de replicón se introduce en dicha célula hospedante mediante electroporación; y en donde la densidad celular en el ámbito de la electroporación es de 107 a 5 x 108 por mL.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2003/039723.
Solicitante: ALPHAVAX, INC..
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: P.O. Box 110307, 2 Triangle Drive Research Triangle Park, NC 27709-0307 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: SMITH, JONATHAN, F., DRYGA,SERGEY, KAMRUD,KURT, CALEY,IAN.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K48/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › Preparaciones medicinales que contienen material genético que se introduce en las células del cuerpo vivo para tratar enfermedades genéticas; Terapia génica.
- C12N15/86 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Vectores virales.
- C12N7/04 C12N […] › C12N 7/00 Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00). › Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus.
PDF original: ES-2618309_T3.pdf
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