Partículas de replicón de alfavirus que expresan TRP2.

Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de partículas de replicón de alfavirus que dirigen la expresión de dopacromo tautomerasa (TRP2) en un sujeto humano o animal,

para uso en el aumento o inducción de una respuesta inmune frente a células de melanoma en el sujeto, en el que no hay antígenos de melanoma distintos del TRP2, y no hay ácidos nucleicos que dirigen la expresión de antígenos de melanoma distintos del TRP2, en la composición farmacéutica.

Partículas de replicón de alfavirus que expresan TRP2

Antecedentes de la invención La presente invención se refiere a tecnología de ADN recombinante, composiciones farmacéuticas para la profilaxis o tratamiento del cáncer, en particular, que comprenden partículas de replicón de alfavirus que contienen una secuencia codificadora expresable para un antígeno de melanoma de interés, y a métodos para desencadenar o aumentar una respuesta inmune frente a un antígeno de melanoma, especialmente dopacromo tautomerasa (DCT) , que también se refiere como proteína relacionada con tirosinasa (TRP2) , introduciendo ácido (s) nucleico (s) extraño (s) que codifican un antígeno de cáncer en una célula eucariota mediante partículas de replicón de alfavirus, y más particularmente, al uso de composiciones inmunogénicas que comprenden partículas de virus infecciosas, defectuosas en la propagación o partículas semejantes a virus, especialmente partículas de Virus de Encefalitis Venezolana que expresan TRP2, vacunas y aplicaciones en terapia de melanoma. En particular, la presente descripción proporciona preparaciones de partícula de replicón de alfavirus (ARP) , especialmente partículas de VEE que expresan un antígeno de melanoma (en particular TRP2) , para uso en medicina humana y veterinaria y para aumentar o inducir la respuesta del sistema inmune a este antígeno de manera que se reduce la incidencia, metástasis, y/o gravedad del melanoma.

El melanoma es una enfermedad especialmente devastadora, para la que no existe una vacuna aprobada para uso en terapia o para la prevención del melanoma. Ha habido un éxito relativamente limitado en los regímenes de vacuna de melanoma o usando composiciones inmunogénicas en el tratamiento de este cáncer si ha avanzado.

El género Alfavirus incluye una variedad de virus, todos los cuales son miembros de la familia Togaviridae. Los alfavirus incluyen el Virus de la Encefalitis Equina Oriental (EEE) , Virus de la Encefalitis Equina Venezolana (VEE) , Virus de Everglades, Virus Mucambo, Virus Pixuna, Virus de la Encefalitis Equina Occidental (WEE) , Virus Sindbis, Virus del Bosque Semliki, entre otros. El genoma viral es un ARN monocatenario, con sentido de mensajero, modificado en el extremo 5' con una caperuza metilada y en el extremo 3' con un tracto poli (A) de longitud variable. Las subunidades estructurales que contienen una única proteína viral, cápside, se asocian con el genoma de ARN en una nucleocápside icosaédrica. En el virión, la cápside está rodeada por una cubierta lipídica cubierta con una matriz regular de puntas de proteína transmembrana, cada uno de los cuales consiste en un complejo heterodimérico de dos glicoproteínas, E1 y E2. Véase Pedersen et al., J. Virol 14: 40 (1974) . Los virus Sindbis y del Bosque Semliki se consideran los alfavirus prototípicos y se han estudiado extensamente. Véase Schlesinger, The Togaviridae and Flaviviridae, Plenum Publishing Corp., Nueva York (1986) . El virus VEE se ha estudiado extensamente, véase, por ejemplo la Patente U.S. No. 5.185.440.

Los estudios de estos virus han dado lugar al desarrollo de técnicas para la vacunación frente a enfermedades de alfavirus y frente a otras enfermedades mediante el uso de vectores de alfavirus para la introducción de genes extraños. Uno de dichos sistemas es el sistema del replicón de alfavirus, como se describe en la Patente U.S. No.

6.190.666 de Garoff et al., Patentes U.S. Nos. 5.792.462, 6.521.235 y 6.156.558 de Johnston et al., Patentes U.S. Nos. 5.814.482, 5.843.723, 5.789.245, 6.015.694, 6.105.686 y 6.376.236 de Dubensky et al; Solicitud de Patente

U.S. No. 6.767.699 (Polo et al.) , Patentes U.S. Nos. 7.045.335, 7.425.337, y 7.442.381 (Smith et al. y Solicitud Publicada U.S. 2009-0075384 (Kamrud et al.) . Las construcciones mejoradas, tanto auxiliar o auxiliares y replicón, para uso en la producción de partículas de replicón de alfavirus se describen en la Patente U.S. No. 7.045.335 (Smith et al.) y WO 2004/085660 (Smith et al.) , y nuevos procesos para su fabricación se describen en la Patente

U.S. No. 7.078.218 (Smith et al.) . Los vectores y estrategias adicionales se describen en la Solicitud Publicada U.S No. WO 2008/085557 y WO 2009/047255.

La publicación de Patente US No. 2006/0099587 proporciona composiciones inmunogénicas y métodos que pueden usarse para administrar vectores de alfavirus más seguros (es decir, atenuados) (tales como vectores de alfavirus que comprenden una capa de virión VEE) que retienen inmunogenicidad mejorada comparado con otros alfavirus atenuados. Goldberg S M et al (Clinical Cancer Research 20051115 US, vol. 11, no. 22, 15 noviembre 2005, páginas 8114-8121) compara dos vacunas de cáncer dirigidas a tirosinasa. Goldberg Stacie M et al (Proceedings Of The American Association For Cancer Research Annual Meeting, vol. 45, marzo 2004, página 288, y 95th Annual Meeting Of The American-Association-For-Cancer-Research; Orlando, FL, EEUU; marzo 27-31, 2004) describe la inmunización de determinados ratones con tumor con proteínas relacionadas con tirosinasa humanas 1 y 2. Yamanaka Ryuya et al (DNA And Cell Biology mayo 2005, vol. 24, no. 5, páginas 317-324) describe la construcción de un vector de expresión de ADN Sindbis y evalúa su potencial para la terapia de tumor cerebral. Leitner Wolfgang W et al (Nature Medicine, vol. 9, no. 1, enero 2003, páginas 33-39) describe una vacuna de ADN basada en alfavirus que activa las rutas antivirales innatas.

Permanece una necesidad en la técnica de métodos y composiciones para el tratamiento y profilaxis del melanoma, un cáncer especialmente agresivo y mortal que afecta a gran cantidad de personas cada año.

Resumen breve de la invención La presente descripción proporciona una composición farmacéutica para uso en el aumento o inducción de una respuesta inmune frente a células de melanoma en el sujeto; una composición inmunogénica; y una composición farmacéutica para uso en un método para reducir el riesgo de contraer melanoma en un sujeto humano o animal o reducir la gravedad o retrasar la progresión del melanoma en un sujeto humano o animal con melanoma, como se refleja en las reivindicaciones adjuntas. La presente descripción describe un método para aumentar una respuesta inmune a un antígeno de melanoma, en particular dopacromo tautomerasa (DCT, TRP2) en un sujeto humano o animal mediante la administración de una composición farmacéutica que comprende partículas de replicón de alfavirus que expresan TRP2 o un fragmento efectivo de éste. En las presentes composiciones para uso y composiciones, el TRP2 es, de manera deseable, pero no necesariamente, idéntico en la fuente de especie a la del sujeto al que se administra la composición. En realizaciones específicas, el TRP2 de ratón tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en la Tabla 1 b y un TRP2 humano ejemplar tiene la secuencia de aminoácidos como se muestra en la presente memoria más adelante. Las secuencias codificadoras adicionales se proporcionan en la presente memoria más adelante, y en la técnica se conocen secuencias adicionales.

También se proporcionan en la presente memoria composiciones para uso en métodos para prevenir, reducir la probabilidad de desarrollar, reducir la gravedad del melanoma, reducir el tiempo hasta la progresión después de la intervención inicial o incrementar el tiempo de supervivencia después del diagnóstico del melanoma en un sujeto humano o animal que comprende administrar un farmacéutico que comprende una cantidad efectiva de partículas de replicón de alfavirus que expresan el antígeno de melanoma dopacromo tautomerasa (DCT, TRP2) . La composición puede administrarse al sujeto de cualquier manera consistente con la administración de composiciones inmunogénicas, intraperitoneal, intramuscular, intradérmica, intranasal, intravaginal, intrarectal, subcutánea o intravenosa, especialmente mediante las rutas de administración subcutánea o intramuscular. En determinadas situaciones, especialmente para el tratamiento de prevención de melanoma metastásico, podría usarse la administración intravenosa. En un sujeto animal, la inyección en la almohadilla de la pata es otra ruta de administración para las presentes composiciones. En estos métodos, la administración se repite de manera deseable, aunque las dosificaciones posteriores del TRP2 pueden ser mediante una vacuna de ADN o proteína recombinante así como, o además de, las partículas de replicón de alfavirus que expresan TRP2, y cualquiera de las administraciones de TRP2 pueden ser alogénicas o singénicas respecto a la fuente de TRP2 y el sujeto.

Además, se proporciona una preparación inmunogénica que comprende una partícula de replicón de alfavirus que expresa... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de partículas de replicón de alfavirus que dirigen la expresión de dopacromo tautomerasa (TRP2) en un sujeto humano o animal, para uso en el aumento o inducción de una respuesta inmune frente a células de melanoma en el sujeto, en el que no hay antígenos de melanoma distintos del TRP2, y no hay ácidos nucleicos que dirigen la expresión de antígenos de melanoma distintos del TRP2, en la composición farmacéutica.

2. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 1, en el que la partícula de replicón de alfavirus es una partícula de replicón del virus de la Encefalitis Equina Venezolana (VEE) ;

en el que el alfavirus es, opcionalmente, un alfavirus atenuado;

en el que el alfavirus atenuado es, más opcionalmente, VEE TC-83.

3. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de partículas de replicón de alfavirus que expresan dopacromo tautomerasa (TRP2) , para uso en un método para reducir el riesgo de contraer melanoma en un sujeto humano o animal o reducir la gravedad o retrasar la progresión de melanoma en un sujeto humano o animal con melanoma, en el que no hay antígenos de melanoma distintos del TRP2, y no hay ácidos nucleicos que dirigen la expresión de antígenos de melanoma distintos del TRP2, en la composición farmacéutica.

4. Una composición inmunogénica comprende partículas de replicón de alfavirus que expresan dopacromo tautomerasa (TRP2) , en el que no hay antígenos de melanoma distintos del TRP2, y no hay ácidos nucleicos que dirigen la expresión de antígenos de melanoma distintos del TRP2, en la composición inmunogénica, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

5. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 3 o la composición inmunogénica de la reivindicación 4, en el que la partícula de replicón de alfavirus es una partícula de replicón del virus de la Encefalitis Equina Venezolana (VEE) .

6. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 3 o la composición inmunogénica de la reivindicación 4, en el que la partícula de replicón de alfavirus es una partícula de replicón del virus de la Encefalitis Equina Venezolana (VEE) ;

en el que el VEE es un VEE atenuado.

7. La composición farmacéutica para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 3, o reivindicación 5 ó 6 cuando depende de la reivindicación 3, en el que la composición farmacéutica se administra subcutáneamente, intramuscularmente, intradérmicamente o intravenosamente;

en el que la composición farmacéutica se administra, opcionalmente, subcutáneamente o intramuscularmente.

8. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 1 ó 3 o reivindicación 7 cuando depende de la reivindicación 3, en el que el TRP2 deriva en secuencia de la misma especie que el sujeto.

9. La composición inmunogénica de la reivindicación 4 que comprende además un adyuvante inmunológico.

10. La composición inmunogénica de la reivindicación 4 que comprende además un adyuvante inmunológico, y que comprende además una citoquina.

11. La composición inmunogénica de una cualquiera de las reivindicaciones 4-6, 9 ó 10, para uso en un método para reducir el tamaño del tumor de melanoma, reducir o retrasar la recurrencia de un tumor de melanoma o matástasis de melanoma, y/o reducir o prevenir metástasis de melanoma en un sujeto, comprendiendo dicho uso la etapa de administrar una única dosis de la composición inmunogénica.

12. La composición farmacéutica para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y reivindicaciones 5 a 8 cuando depende de la reivindicación 3, que comprende además una etapa posterior de administrar una segunda dosis de una composición farmacéutica que comprende proteína TRP2 o que comprende un ácido nucleico capaz de expresar TRP2 en el sujeto.

13. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 12, en el que la modalidad de la segunda dosis se selecciona del grupo que consiste en proteína, virus inactivado, ADN, antígenos con vector viral, partículas de replicón de alfavirus y partículas semejantes a virus que presentan o expresan TRP2.

14. La composición farmacéutica para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y reivindicaciones 5 a 8 cuando depende de la reivindicación 3, que comprende además al menos una etapa posterior de administración de una composición farmacéutica que comprende partículas de replicón de virus de la encefalitis equina venezolana que expresan TRP2.

15. La composición farmacéutica para uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y reivindicaciones 5 a 8 cuando depende de la reivindicación 3 o la composición inmunogénica o la composición farmacéutica para uso de cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, en el que la composición farmacéutica administrada a un sujeto en una dosis es de 104 a 1010 partículas de replicón de virus; en el que la dosis es, opcionalmente107, 5 x 107, 108, 5 x 108, 109, 5 x 109 ó 1010 partículas de replicón de virus.

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