Identificación de resistencia antibiótica en microorganismos.

Método para la identificación simultánea de una célula bacteriana individual y la detección de una resistencia antibiótica en dicha célula bacteriana individual en una muestra biológica,

que comprende las etapas:

(a) poner en contacto dicha célula bacteriana individual con un primer ácido nucleico capaz de hibridarse selectivamente con un ácido nucleico en dicha célula bacteriana en condiciones in situ, en donde el primer ácido nucleico se hibrida selectivamente con el ácido nucleico, y en el que el primer ácido nucleico se marca con un primer marcador,

(b) identificar la célula bacteriana por la detección de la presencia del primer marcador en dicha célula bacteriana individual,

(c) poner en contacto dicha misma célula bacteriana individual con al menos una sonda para la detección de una resistencia antibiótica en la célula bacteriana en las mismas dichas condiciones in situ, en el que dicha al menos una sonda se selecciona de

(i) anticuerpos y fragmentos de los mismos, siendo capaces los anticuerpos y fragmentos de los mismos de unirse selectivamente a un factor de resistencia, y en el que el anticuerpo y los fragmentos de los mismos se marcan con un segundo marcador, en donde dicha célula bacteriana individual se pone en contacto con el anticuerpo y/o dicho fragmento del mismo en condiciones en donde el anticuerpo y/o el fragmento del mismo se une selectivamente al factor de resistencia,

(ii) segundos ácidos nucleicos capaces de hibridarse con un ARN que codifica para un factor de resistencia, en el que el segundo ácido nucleico se marca con un tercer marcador, en donde dicha célula bacteriana individual se pone en contacto con el segundo ácido nucleico bajo condiciones en las que el segundo ácido nucleico se hibrida selectivamente con el ARN,

(iii) knottins, proteínas cistina-nudo o/y aptámeros capaces de unirse selectivamente a un factor de resistencia, y en el que los knottins, las proteínas cistina-nudo o/y los aptámeros se marcan con un cuarto marcador, en donde dicha célula bacteriana individual se pone en contacto con el knottin, proteína de cistina-nudo y/o aptámero en condiciones en las que el knottin, la proteína de cistina- nudo y/o el aptámero se unen selectivamente al factor de resistencia, y

(iv) nitrocefina, en donde dicha célula bacteriana individual se pone en contacto con dicha nitrocefina en condiciones en las que beta-lactamasa modifica a dicha nitrocefina, y

(d) determinar la resistencia a los antibióticos de la célula bacteriana por la detección de la presencia de uno o más marcadores, el segundo marcador, el tercer marcador, el cuarto marcador, o/y la nitrocefina modificada en la célula bacteriana individual,

en donde las etapas (b) y (d) se realizan simultáneamente en dicha célula bacteriana individual.