Vacunas de subunidades contra el PRRSV.

Una vacuna capaz de inducir una respuesta inmunitaria frente al PRRSV que comprende:

una primera porción del ADN del ORF1 del PRRSV, seleccionándose dicha porción del grupo que consiste en los ID. SEC. Nº 2 - 6, 9, y combinaciones de los mismos; y

un transportador farmacológico adecuado.

Vacunas de subunidades contra el PRRSV Lista de secuencias

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Antecedentes de la invención

Campo de la invención

La presente invención concierne en líneas generales a vacunas contra el síndrome reproductor y respiratorio porcino (PRRS). Más particularmente, la invención concierne a la prevención del PRRS en cerdos mediante la administración de una vacuna que comprende subunidades del ADN del virus PRRS (PRRSV). Aun más particularmente, la invención se refiere al uso de porciones seleccionadas del ORF 1 tanto solas como junto con otras porciones del genoma del PRRSV o junto con otras vacunas contra el PRRSV.

Descripción de la técnica anterior

El PRRS es una importante enfermedad en la industria porcina en todo el mundo. El PRRS está causado por una infección por el PRRSV. Actualmente, existen vacunas de virus vivos modificados (MLV) que cuando se usan correctamente, proporcionan protección a los cerdos frente a la enfermedad clínica resultante de una infección por el PRRSV. Las vacunas de PRRS MLV requieren la replicación en el animal vacunado con objeto de asegurar que se induce una respuesta inmunitaria eficaz (por ejemplo, véase Meng, X J, Heterogeneity of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus: Implications for Current Vaccine Efficacy and Future Vaccine Development; 74 Vet. Micro., 309 - 329 (2000)). Sin embargo, dicha replicación presenta problemas ya que el PRRS MLV puede permanecer en el animal durante varias semanas después de la vacunación y también puede ser diseminado a otros cerdos negativos para el PRRSV. La diseminación del PRRS MLV a partir de animales vacunados puede ser un problema en algunas explotaciones porcinas que no tienen establecidas unas buenas medidas de bioseguridad para prevenir la diseminación del PRRS MLV desde los animales vacunados hacia la población sin exposición previa al PRRSV. Aunque se han usado millones de dosis del PRRS MLV sin preocupaciones, también existen informes esporádicos en la bibliografía relativos a la capacidad del PRRS MLV de revertir hacia una cepa más virulenta, la cepa natural del PRRSV. Se han realizado intentos de resolver los problemas de la diseminación del PRRS MLV y la posible reversión hacia virulencia también mediante la utilización de una vacuna formada por virus inactivados del PRRS (es decir, PRRS KV). Sin embargo, la investigación ha demostrado que a pesar del hecho de que el PRRS KV puede inducir una fuerte respuesta humoral en los cerdos vacunados, no es eficaz en la prevención de la enfermedad asociada al PRRS.

Consecuentemente, lo que se necesita en la materia es un método de vacunación y una vacuna que puedan inducir una respuesta inmunitaria protectora sin los problemas relacionados con el PRRS MLV. Preferiblemente, la administración de la vacuna no se replicaría de forma activa en el animal vacunado e induciría una fuerte respuesta inmunitaria humoral y celular.

Sumario de la invención

La presente invención resuelve los problemas inherentes y la técnica anterior proporciona un avance significativo en el estado de la técnica proporcionando vacunas de ADN del PRRSV. Teóricamente, la vacuna de plásmido de ADN que expresa el antígeno del PRRS sirve como molde para sintetizar los antígenos del PRRSV (es decir, como un PRRS MLV), pero también tiene la característica de no replicarse activamente en el animal (es decir, como un PRRS KV). Los inmunógenos protectores necesarios para inducir una respuesta protectora en el hospedador frente al PRRSV no se conocen. Dado que el PRRS MLV puede inducir una respuesta protectora en un cerdo vacunado, se cree que la replicación del PRRS MLV en el animal vacunado debe inducir una fuerte respuesta inmunitaria tanto humoral como celular en el animal vacunado.

El ORF1 del PRRSV codifica para la maquinaria de replicación necesaria para la replicación del PRRSV y la generación de una nueva progenie. El ORF1 tiene dos regiones, denominadas ORF1a y ORF1b, que comprenden el complejo de la replicasa del ORF1 (Dea, et al., Current Knowledge on the Structural Proteins of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome (Prrs) Virus: Comparison of the North American and European Isolates; 145 (4) Archives of Virology, 659 - 688 (2000)). Se cree que las proteínas codificadas por la replicasa son los inmunógenos clave en otras familias de virus (Leitner et al., DAN and RNA-Based Vaccines: Principies, Progress and Prospects; 18 Vaccine 765 - 777 (2000)). Cuando una célula es infectada por el PRRSV, la actividad de la replicasa vírica puede proporcionar un potente efecto coadyuvante ya que los antígenos asociados a la replicasa son expresados durante la infección de la célula. Los antígenos asociados a la replicasa pueden servir como "señales de peligro" generadas en las células transfectadas e inducir fuertes respuestas inmunitarias en el hospedador (es decir,

IFN, HSP, apoptosis). Por lo tanto, las "señales de peligro" asociadas a la repllcasa podrían ser un factor clave en por qué el PRRS MLV puede Inducir una protección, mientras que el PRRS no replicante (es decir, el antfgeno ¡nactivado del PRRS KV) no confiere protección tras una exposición.

El ORF1 tiene aproximadamente 12.000 nucleótidos de longitud, lo que dificulta la transfecclón y la expresión adecuada en una célula eucarlota. Por lo tanto, el ORF1 se dividió secuenclalmente y arbitrariamente en secciones menores mediante el uso de una Inmunización con bibliotecas de expresión (ELI) como herramienta para determinar los inmunógenos protectores de varios patógenos. La ELI corta el genoma de un patógeno en particular en pequeños fragmentos que se clonan en un vector de vacuna de ADN y a continuación se administra a un hospedador para determinar si algún fragmento es capaz de inducir una respuesta inmunitaria (Johnston and Barry; Genetic to Genomic Vaccination; 15 (8) Vaccine, 808 - 809 (1997)). Preferiblemente, la respuesta inmunitaria es protectora. La invención se fundamenta en la hipótesis de que las respuestas inmunitarias del hospedador frente a las proteínas generadas por el ORF1 son esencialmente para la protección frente a la exposición al PRRSV. Es relativamente fácil poner las regiones que codifican para los ORF del PRRSV 2 - 7 en un vector de vacuna de ADN, dado que estos ORF tienen entre 317 - 720 nucleótidos de longitud. Como se ha mencionado anteriormente, el tamaño de la región del ORF1 del PRRSV es de aproximadamente 12.000 nucleótidos de longitud. La colocación de una región de este tamaño en un vector de vacuna de ADN no sería susceptible de una transfección y posterior expresión en una célula eucariota. Consecuentemente, era esencial romper la región del ORF1 en secciones más pequeñas para asegurar mejor una expresión adecuada de todas las áreas del ORF 1. La inmunización por bibliotecas de expresión (ELI) se ha empleado como una herramienta para determinar los inmunógenos protectores de varios patógenos. La ELI emplea el corte del genoma de un patógeno en particular en fragmentos pequeños. Estos fragmentos pequeños son clonados a continuación en un vector de vacuna de ADN y después administrados al hospedador para determinar si algún fragmento es capaz de inducir una respuesta inmunitaria protectora. En el presente documento, la técnica de ELJ se ha modificado para el desarrollo de una vacuna de ADN del PRRSV que está formada secuencialmente por la región codificante del ORF 1 del genoma del PRRSV. Este método se ha denominado SELI (inmunización secuencial con bibliotecas de expresión). Esto contrasta con Barfoed et al., (DNA Vaccination of Pigs with Open Reading Frame 1 - 7 of PRRS Virus; 22 Vaccine, 3628 - 3641 (2004)) que usaba la totalidad de la región ORF1 como una vacuna de ADN.

Las vacunas de la presente invención comprenden porciones del ORF1 del PRRSV solas, seleccionándose dichas porciones del grupo que consiste en los ID. SEC. N° 2 - 6, 9 y combinaciones de los mismos, junto con otras porciones del ORF1 del PRRSV, y junto con otras composiciones eficaces para generar una respuesta inmunitaria frente a una infección por el PRRSV, incluyendo otras vacunas del PRRSV. Las porciones del ORF1 útiles para los fines de la presente invención tienen un tamaño suficiente para provocar una respuesta inmunitaria en un animal que recibe la vacuna.

La(s) porción(es) seleccionada(s) puede(n) ser clonada(s) en un vector de expresión adecuado. Algunos ejemplos de vectores adecuados incluyen vectores de adenovirus, vectores de Shigella, pVC1650 (Valentis, Inc., Burlingame, California), WRG720 (W. R. Grace, Nueva York, Nueva... [Seguir leyendo]

1. Una vacuna capaz de inducir una respuesta inmunitaria frente al PRRSV que comprende:

una primera porción del ADN del ORF1 del PRRSV, seleccionándose dicha porción del grupo que consiste en los ID. SEC. N° 2 - 6, 9, y combinaciones de los mismos; y un transportador farmacológico adecuado.

2. La vacuna de la reivindicación 1, que comprende adlclonalmente una segunda porción del ADN del PRRSV seleccionada del el grupo que consiste en al menos 21 nucleótidos contiguos de un ORF del PRRSV distinto al ORF1, al menos 21 nucleótidos contiguos del ORF1 del PRRSV, y combinaciones de los mismos.

3. La vacuna de la reivindicación 1, que comprende adlclonalmente un ingrediente seleccionado del grupo que consiste en coadyuvantes, excipientes, y combinaciones de los mismos.

4. El uso de una primera porción de ADN del ORF1 del PRRSV, seleccionándose dicha porción del grupo que consiste en los ID. SEC. N° 2 - 6, 9, y combinaciones de los mismos, para la elaboración de una composición para la inducción de una respuesta Inmunitaria frente al PRRSV en un animal susceptible a una infección por el PRRSV, en el que dicha composición va a ser administrada a dicho animal.

5. El uso de la reivindicación 4, en el que se proporciona una segunda administración de dicha composición.

6. El uso de la reivindicación 5, comprendiendo adlclonalmente dicha composición una segunda porción de ADN seleccionada del grupo que consiste en al menos 21 nucleótidos contiguos de un ORF del PRRSV distinto al ORF1, al menos 21 nucleótidos contiguos del ORF1, y combinaciones de los mismos.

7. El uso de la reivindicación 5, comprendiendo adicionalmente dicha composición un ingrediente seleccionado del grupo que consiste en coadyuvantes, excipientes, y combinaciones de los mismos.

8. Un vector que comprende al menos una porción del ADN del ORF1 del PRRSV, seleccionándose dicha porción del grupo que consiste en los ID. SEC. N° 2 - 6, 9, y combinaciones de los mismos.

9. El vector de la reivindicación 8, siendo dicho vector un plásmido.

10. El vector de la reivindicación 8, comprendiendo adicionalmente dicho vector una segunda porción del ADN del PRRSV seleccionada del grupo que consiste en al menos 21 nucleótidos contiguos de un ORF del PRRSV distinto al ORF1, al menos 21 nucleótidos contiguos del ORF1, y combinaciones de los mismos.

11. Una célula que contiene un plásmido de acuerdo con la reivindicación 9.

12. La célula de la reivindicación 11, comprendiendo adicionalmente dicho plásmido una segunda porción del ADN del PRRSV seleccionada del grupo que consiste en al menos 21 nucleótidos contiguos de un ORF del PRRSV distinto al ORF1, al menos 21 nucleótidos contiguos del ORF1, y combinaciones de los mismos.