Soluciones enzimáticas estables y método de fabricación.

Composición líquida que comprende un constituyente enzimático,

un constituyente de ácido fenil borónico o un derivado del mismo, y un constituyente de sal disuelto en la cual el constituyente de sal comprende un anión que es cloruro, sulfato, nitrato o acetato, y el constituyente de sal está presente en una cantidad de 0,5 a 10 % en peso de la composición total.

Soluciones enzimáticas estables y método de fabricación.

Campo de la invención 5

La presente divulgación se refiere a una composición líquida que comprende o incluye una enzima, un inhibidor y un potenciador del inhibidor.

Antecedentes 10

Se conocen muy bien los problemas de estabilidad de almacenamiento en líquidos que contienen enzimas como por ejemplo detergentes líquidos que contienen enzimas. Esto es especialmente cierto en detergentes líquidos que contienen proteasas.

El estado de la técnica se ha ocupado extensivamente de la mejora de la estabilidad de almacenamiento, añadiendo por ejemplo un inhibidor de proteasa.

Se sabe que el ácido bórico y los ácidos borónicos inhiben reversiblemente las enzimas proteolíticas. Se proporciona una discusión de la inhibición de una serina proteasa, subtilisina, por parte del ácido borónico en Molecular 20 & Cellular Biochemistr y 51, 1983, pp. 5-32.

Los ácidos borónicos tienen capacidades muy diferentes como inhibidores de subtilisina. Los ácidos borónicos que contienen solo grupos alquilo como por ejemplo metilo, butilo o 2-ciclohexiletilo son inhibidores pobres siendo el ácido metilboronico el inhibidor más pobre, mientras que los ácidos borónicos con grupos aromáticos como por ejemplo 25 fenilo, 4-metoxifenilo o 3, 5-diclorofenilo son buenos inhibidores y el ácido 3, 5-diclorofenilboronico es un inhibidor particularmente eficaz (ver Keller et al, Biochem. Biophys. Res. Com. 176, 1991, pp. 401-405) .

También se sabe que los ácidos aril borónicos que tienen una sustitución en la posición 3 en relación al boro son inhibidores de proteasa reversibles. En WO 92/19707, se describe el ácido acetamidofenilo borónico como un inhibidor 30 de enzimas proteolíticas.

Además, EP 0 832 174 describe los derivados de ácido fenil borónico sustituidos en la posición para con un >C=O adyacente al ácido fenil borónico que poseen buenas capacidades como estabilizadores enzimáticos en líquidos.

WO 2004/009752 A divulga composiciones líquidas de detergentes alcalinos que incluyen un ácido aril borónico, una proteasa y sales de ácido fórmico similares a sales, EDTA 4Na, surfactantes aniónicos, sulfonato de xileno de sodio. El pH de las composiciones del documento es de 8, 5 a 11.

Todavía se puede mejorar la formulación, fabricación y envase de enzima de las composiciones líquidas de 40 enzimas que incluyen enzimas sensibles para proporcionar composiciones de detergente que no pierden actividad enzimática durante el transporte y el almacenamiento.

Resumen de la invención 45

Un objetivo de la presente invención es proporcionar una composición enzimática líquida con estabilidad enzimática mejorada. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un método para la fabricación de la composición enzimática líquida.

Se ha descubierto que añadiendo un potenciador del inhibidor como por ejemplo una sal soluble a una 50 composición enzimática líquida que incluye una enzima y un inhibidor como por ejemplo un ácido fenil borónico o un derivado de

ácido fenil borónico se mejora significativamente el efecto de los inhibidores y por lo tanto se mejora la estabilidad de almacenamiento de la enzima con respecto a la actividad enzimática. 55

La presente invención proporciona una composición enzimática líquida que incluye un constituyente enzimático, un constituyente de ácido fenil borónico o un derivado del mismo y un constituyente disuelto, en la cual el constituyente de sal comprende un anión que es cloruro, sulfato, nitrato o acetato, y el constituyente de sal está presente en una cantidad de 0, 5 a 10% en peso de la composición total. 60

La presente invención se refiere además a la fabricación de la composición enzimática líquida y a su uso.

Se lograron los objetivos de la presente invención a través de la provisión de una composición líquida que incluye un constituyente enzimático, un constituyente de ácido fenil borónico o un derivado del mismo, y un constituyente de sal 65 disuelto. En formas de realización, el constituyente enzimático es una proteasa como por ejemplo una serina proteasa.

El constituyente de sal puede incluir cationes como por ejemplo Cu, Ca, Mg, Zn, Na, K, NH4 y combinaciones de los mismos. En formas de realización, el constituyente de sal puede incluir cationes seleccionados del grupo que está compuesto por Mg, Zn, NH4 y combinaciones de los mismos.

En una forma de realización específica se seleccionan los cationes del grupo que está compuesto por Cu, Ca, 5 Mg, Zn, Na, K, NH4 y se seleccionan los aniones del grupo que está compuesto por cloruro, sulfato, nitrato.

En algunas formas de realización, el pH de la composición líquida es de 7 a 10, 5 y en otras formas de realización, el pH de la composición líquida es de 8 a 9, 5.

También se logran los objetivos de la presente divulgación a través de la provisión de una composición detergente, como por ejemplo una composición detergente para ropa o una composición lavavajillas.

También se pueden alcanzar los objetivos de la presente invención a través de la provisión de un proceso para la fabricación de una composición líquida que incluye las fases de: a) proporcionar un líquido; b) añadir una sal 15 hidrosoluble al líquido de a) ; c) añadir a a) una enzima y un ácido fenil borónico o un derivado del mismo, simultáneamente con b) o tras añadirlos a b) ; d) y mezclar la composición líquida. En formas de realización, el proceso también puede incluir la fase de ajuste del pH de 7 para 9, 5, o de 8 para 9.

También se logran los objetivos de la presente invención a través de la limpieza de un objeto con composiciones 20 de acuerdo con la presente divulgación.

También se logran los objetivos de la presente invención utilizando un constituyente de sal para potenciar o mejorar el efecto inhibidor de un ácido fenil borónico o un derivado del mismo en una composición enzimática líquida.

Definiciones

Como se utiliza en el presente documento el término "% HR" se refiere a la humedad relativa del aire. 100% HR es aire saturado con humedad de agua a una temperatura fija y el % HR refleja el porcentaje de saturación de humedad del aire. 30

El término "humedad constante" (que en el contexto de la invención a veces se abrevia como HC) de un compuesto o sustancia se refiere al % de HR del aire atmosférico en equilibrio con una solución acuosa saturada del compuesto en contacto con la fase sólida del compuesto, todos confinados en un espacio cerrado a una determinada temperatura. Esta definición está de acuerdo con "Handbook of chemistr y and physics" CRC Press, Inc., Cleveland, 35 USA, 58th edition, p E46, 1977-1978. Por consiguiente HC20 º C = 50% para un compuesto significa que el aire con 50% de humedad estará en equilibrio con una solución acuosa saturada del compuesto a 20º C. Por consiguiente, el término humedad constante es una medida de las propiedades higroscópicas de un compuesto.

El término "pH" de un compuesto en el contexto de la invención debe entenderse como el pH de una solución 40 acuosa 10% p/p del compuesto.

Descripción detallada de las formas de realización preferidas

La presente divulgación se refiere a composiciones enzimáticas líquidas que incluyen uno o varios constituyentes 45 enzimáticos, uno o varios inhibidores y uno o varios potenciadores del inhibidor. Se ha descubierto que la sal funciona como un potenciador del inhibidor en las composiciones enzimáticas líquidas si el inhibidor es ácido fenilo borónico o un derivado.

Sin desear ligarse a cualquier teoría de la presente divulgación se cree que el efecto inhibidor de los derivados de 50 ácido fenil borónico es afectado negativamente por una combinación de pH alcalino y contenido de agua elevado (actividad acuosa) en composiciones detergente. A pH alcalino el ácido fenil borónico se carga a través de su reacción antibase aumentando la solubilidad del agua. Además, esto disminuye la afinidad de la molécula hacia el sitio fotolítico que tiene propensión para inhibir. El equilibrio (1) se desplaza hacia la proteasa no inhibida (derecha) :

(1) EZ[I] ï" EZ + I

EZ es una proteasa, I es el inhibidor y EZ[I] es el complejo inactivado.

Al reducir la solubilidad del inhibidor en la matriz del detergente el equilibrio (1) se desplazará hacia el complejo de proteasa inhibido (izquierda) - reduciendo la probabilidad de que el inhibidor precipite fuera de la solución.

El anillo bencénico es altamente hidrofóbico - y por lo tanto se cree que la... [Seguir leyendo]

1. Composición líquida que comprende un constituyente enzimático, un constituyente de ácido fenil borónico o un derivado del mismo, y un constituyente de sal disuelto en la cual el constituyente de sal comprende un anión que es cloruro, sulfato, nitrato o acetato, y el constituyente de sal está presente en una cantidad de 0, 5 a 10 % en peso de la 5 composición total.

2. Composición líquida de la reivindicación 1, en la cual el constituyente enzimático es una proteasa.

3. Composición líquida de la reivindicación 2, en la cual la proteasa es una serina proteasa. 10

4. Composición líquida de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la cual el ácido fenil borónico o el derivado del mismo es

en el cual R es seleccionado del grupo que está compuesto por hidrógeno, hidroxi, C1-C6 alquilo, C1-C6 alquilo sustituido, C1-C6 alquenilo y C1-C6 alquenilo sustituido.

5. Composición líquida de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la cual el constituyente de sal comprende uno o más cationes, en la que el uno o más cationes comprenden Ca, Mg, Zn, Na, K o NH4 y combinaciones de los 20 mismos.

6. Composición líquida de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la cual el constituyente de sal comprende uno o varios cationes seleccionados del grupo que está compuesto por Ca, Mg, Zn, Na, K, NH4 y combinaciones de los mismos. 25

7. Composición líquida de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la cual el constituyente de sal comprende uno o varios cationes seleccionados del grupo que está compuesto por Zn, Mg, NH4 y combinaciones de los mismos.

8. Proceso para la fabricación de la composición líquida de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que incluye las 30 fases de:

a) proporcionar un líquido;

b) añadir la sal hidrosoluble al líquido de a) ;

c) añadir a a) una enzima y un ácido fenil borónico o un derivado del mismo, simultáneamente con b) o tras añadirlos a 35 b) ; y d) mezclar la composición líquida.

9. Uso de la composición de las reivindicaciones 1 a 7, para limpiar un objeto.

10. Uso de una sal para potenciar el efecto inhibidor de un ácido fenil borónico o un derivado del mismo en una composición enzimática líquida en la cual la sal comprende un anión que es cloruro, sulfato, nitrato o acetato y la sal está presente en una cantidad de 0, 5 a 10 % en peso de la composición total.