Purificaciones de elagitaninos.

Un método para la producción de una composición de elagitaninos,

comprendiendo el método:

preparar una solución acuosa que contenga elagitaninos de cáscaras y arilos de granada;

transferir los elagitaninos de la solución acuosa sobre una superficie de un material de resina adsorbente de estireno-divinil-benceno reticulado polimérico;

eluir los elagitaninos de la superficie de la resina con un eluyente que es un alcanol que contiene de 1 a 4 átomos de carbono en una solución de elagitaninos eluyente; y

separar el eluyente de la solución de elagitaninos eluyente para producir la composición de elagitaninos, en donde la composición de elagitaninos comprende punicalagina a una concentración de al menos el 10 % en una base de peso/peso.

Purificaciones de elagitaninos

Introducccion

La investigación médica indica que el zumo de fruta de la granada (Punica granatum L.) presenta fuertes propiedades antioxidantes atribuibles a la presencia de determinados polifenoles vegetales, o taninos. Los taninos hidrolizables presentes en el zumo de granada, incluyendo isómeros de punicalagina, se han identificado como compuestos activos responsables de proteger al colesterol de lipoproteína de baja densidad de la oxidación in vivo, una etapa clave en la patogénesis de la ateroesclerosis.

La adicción de antioxidantes es un método conocido para aumentar la vida útil de los productos alimenticios. Los antioxidantes naturales también pueden desempeñar un papel importante en la prevención de la carcinogénesis. Los antioxidantes dietéticos pueden ser eficaces contra el daño peroxidativo en los sistemas vivos. Estudios actuales realizados sobre los taninos de la granada también incluyen la inhibición de las enzimas COX-1 y COX-2; la actividad antiaterosclerótica; la inhibición del factor de transcripción nuclear NF-B; la represión de la expresión del glutatión y efectos anti adhesión y similares.

A la luz de las prometedoras pruebas médicas, la popularidad de la fruta y del zumo de la granada está aumentando rápidamente a escala nacional. Así mismo, también aumentan las ventas comerciales de la fruta y zumo de la granada, incentivando a su vez aumentos en la producción hortícola y un crecimiento significativo en la industria del procesamiento del zumo comercial. Un subproducto de alto volumen, resultante del proceso de extracción del zumo de granada a gran escala, es la cáscara residual, que comprende la corteza, la médula y las membranas de la fruta.

El alto contenido de humedad del residuo hace que su eliminación sea costosa y limite la viabilidad de usos alternativos. Sin embargo, los mismos subproductos, que ofrecen un proceso de extracción y purificación rápido, rentable y de alto rendimiento, tienen la posibilidad de proporcionar una fuente asequible y abundante de un producto refinado rico en elagitaninos hidrolizables, incluyendo la punicalagina.

La punicalagina, que es el tanino predominante en el zumo de granada comercial y que está presente a niveles significativos (> 2 g/l) , se extrajo debido a sus propiedades hidrófilas cuando los frutos se presionan hidrostáticamente. Este compuesto es responsable de la alta actividad antioxidante de este zumo, aunque se sabe poco acerca de la biodisponibilidad y del metabolismo de la punicalagina o de otros elagitaninos de los alimentos.

Los métodos anteriores para aislar elagitaninos de la granada incluyen métodos lentos de cromatografía en columna (C-18, poliamidas, celulosa, Sephadex LH-20 Lipófila) y/o de cromatografía líquida preparativa de alto rendimiento (HPLC) . En vista del interés comercial de estos compuestos, resulta ser de gran interés el desarrollar métodos económicos de purificación a alto rendimiento.

Mayer et al, Liebigs Ann. Chem., 1977, páginas 1976-1986, describen la punicalagina y la punicalina, dos taninos de la piel de la granada. Tanaka et al, Phytochem-istr y , vol. 24, no. 9, 1985, páginas 2075-2078, describen la punicafolina, un elagitanino de las hojas de Punica granatum. Adicionalmente, en los ejemplos adjuntos se indica una técnica anterior.

Resumen de la invencion La invención se refiere a composiciones de elagitaninos purificados y biológicamente activos, que incluyen punicalagina, así como métodos para producir dichas composiciones. Los taninos se separan a partir de productos naturales mediante un método de extracción y purificación usando un absorbente polimérico sólido.

La presente invención proporciona un método para producir una composición de elagitaninos, comprendiendo el método: preparar una solución acuosa que contenga elagitaninos de las cáscaras y arilos de la granada; transferir los elagitaninos de la solución acuosa sobre una superficie de un material de resina adsorbente de estireno-divinilbenceno reticulado polimérico; eluir los elagitaninos de la superficie de la resina con un eluyente que es un alcanol 55 que contiene de 1 a 4 átomos de carbono en una solución de elagitaninos eluyente; y separar el eluyente de la solución de elagitaninos eluyente para producir la composición de elagitaninos, en el que la composición de elagitaninos comprende la punicalagina a una concentración de al menos el 10 % en una base de peso/peso. Un alcanol preferido para su uso en el método es el etanol.

La superficie de la resina puede ser una estructura macro reticular con una fase polimérica continua y una fase porosa continua. La superficie de la resina puede ser partículas que tengan un tamaño entre 100 a 200 micras. Las partículas de resina pueden estar en forma de una columna.

El método de la invención, la solución acuosa que contienen los elagitaninos puede obtenerse mediante el método 65 de: romper la cáscara de granada y separar la pulpa; y extraer los elagitaninos de la pulpa en una solución acuosa. El método de la invención puede comprender adicionalmente la etapa de lavar los elagitaninos con un tampón

acuoso después de transferirlos y antes de eluirlos de la superficie de la resina.

En otro aspecto, la invención proporciona una composición que comprende una composición de elagitaninos de granada preparada de acuerdo con el método de la invención en el que la composición incluye elagitaninos a una 5 concentración de al menos aproximadamente el 30 %.

La composición puede comprender un extracto de taninos totales de granada (TTG) . La composición puede comprender punicalagina a una concentración de al menos el 20 % en peso del peso total de la composición. La composición puede comprender elagitaninos seleccionados del grupo que consiste en ácido elágico, glucósidos de ácido elágico, punicalina, punicalagina y combinaciones de los mismos. El ácido elágico y los glucósidos de ácido elágico pueden estar presentes en una concentración de al menos aproximadamente el 5 % en peso del peso total de la composición.

La composición puede comprender antocianinas y antocianidinas a una concentración de al menos 15 aproximadamente el 5 % en peso del peso total de la composición.

Los extractos que comprenden estos compuestos y los extractos que comprenden taninos totales de granada, son útiles para varias aplicaciones, incluyendo usos farmacéuticos, nutracéuticos, cosméticos y alimenticios.

La presente invención proporciona adicionalmente el uso de composiciones de la invención en una formulación farmacéutica, fitocéutica, nutracéutica o cosmética.

En el presente documento se describe una columna adsorbente polimérica rápida que se usa para purificar taninos de granada de un extracto acuoso, cuyo extracto procede de una fuente de elagitaninos tal como varios extractos 25 vegetales, incluyendo Punica granatum L, y similares. Los taninos se adsorben a las columnas, y después de limpiar, evacuar por gravedad y aspirar al vacío el líquido de la columna, los taninos adsorbidos se eluyen del sólido adsorbente y el disolvente se retira al vacío para producir un polvo de taninos totales altamente concentrado que comprende un alto porcentaje (por ejemplo, 80 %) de anómeros de punicalagina así como un porcentaje significativo de ácido elágico. Pueden realizarse etapas adicionales de cromatografía para proporcionar composiciones altamente purificadas de punicalagina.

La presente invención también proporciona un método para producir una mezcla que comprende elagitaninos de granada, como se expone en las reivindicaciones. El material de partida puede ser fresco, o congelado y descongelado rápidamente. Después el material se rompe y los elagitaninos se extraen de la pulpa en una solución acuosa.

Los extractos obtenidos de este modo pueden utilizarse en la preparación de tintes, cosméticos y otras fórmulas terapéuticas, tales como bioconservantes de alimentos, en la industria nutraceutica y similares. Las composiciones también encuentran uso como una fuente de derivados de ácido elágico, incluyendo elagitaninos hidrolizables, para su uso en estudios biológicos in vitro e in vivo. Se dice que los compuestos así aislados tienen actividades antioxidantes, anticancerosas, antineurodegenerativas, antidiabéticas y antiinflamatorias. Los compuestos encuentran también uso en el tratamiento de individuos con obesidad y sobrepeso, para reducir la grasa corporal no deseada.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1A: cromatograma de HPLC de taninos totales de granada (TTG) purificados de la cáscara de la fruta. Los picos se identifican por comparación de sus... [Seguir leyendo]

1. Un método para la producción de una composición de elagitaninos, comprendiendo el método:

preparar una solución acuosa que contenga elagitaninos de cáscaras y arilos de granada; transferir los elagitaninos de la solución acuosa sobre una superficie de un material de resina adsorbente de estireno-divinil-benceno reticulado polimérico; eluir los elagitaninos de la superficie de la resina con un eluyente que es un alcanol que contiene de 1 a 4 átomos de carbono en una solución de elagitaninos eluyente; y separar el eluyente de la solución de elagitaninos eluyente para producir la composición de elagitaninos, en donde la composición de elagitaninos comprende punicalagina a una concentración de al menos el 10 % en una base de peso/peso.

2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la superficie de la resina es una estructura macrorreticular con una fase polimérica continua y una fase porosa continua.

3. El método de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 en el que la superficie de la resina es de partículas que tienen un tamaño entre 100 a 200 micras. 20

4. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicha solución acuosa contiene los elagitaninos y se obtiene por el método de:

romper las cáscaras de la granada y separar la pulpa; y 25 extraer los elagitaninos de la pulpa en una solución acuosa.

5. El método de acuerdo con la reivindicación 1 en el que el alcanol es etanol.

6. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que las partículas de resina están en 30 forma de una columna.

7. El método de acuerdo con una cualquiera reivindicaciones 1 a 6, que comprende adicionalmente la etapa de lavar los elagitaninos con un tampón acuoso, después de transferirlos y antes de la elución de la superficie de la resina.

8. Una composición que comprende una composición de elagitaninos de granada preparada de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la composición incluye elagitaninos a una concentración de al menos aproximadamente el 30 %.

9. Una composición de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende un extracto de taninos totales de granada 40 (TTG) .

10. La composición de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende punicalagina a una concentración de al menos 20 % en peso del peso total de la composición.

11. La composición de acuerdo con las reivindicaciones 8, 9 o 10, en la que dichos elagitaninos se seleccionan del grupo que consiste en ácido elágico, glucósidos de ácido elágico, punicalina, punicalagina.

12. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, que comprende ácido elágico y glucósidos de ácido elágico a una concentración de al menos aproximadamente el 5 % en peso del peso total de la 50 composición.

13. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12 que comprende adicionalmente antocianinas y antocianidinas a una concentración de al menos aproximadamente el 5 % en peso del peso total de la composición.

14. Uso de cualquiera de las composiciones de las reivindicaciones 8 a 13 en una formulación farmacéutica, fitocéutica, nutracéutica o cosmética.