Procedimiento de purificación del ácido quenodesoxicólico.

Un procedimiento de purificación del compuesto de fórmula I, que comprende las etapas de:

1) pre-tratamiento de la bilis porcina disolviendo sólido de bilis porcina derivado de la bilis porcina, que contiene la mezcla de los ácidos quenodesoxicólicos de las Fórmulas I-IV,**Fórmula**

y que tiene un contenido del 35-55 % en peso de ácido quenodesoxicólico, en un disolvente orgánico que contiene sal, en el que el disolvente orgánico es acetato de etilo o acetona, y la sal es al menos una seleccionada del grupo que consiste en cloruro sódico, sulfato magnésico anhidro y sulfato sódico anhidro;

2) esterificación de una mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de fórmulas I a IV añadiendo alcohol C1-4 al resto obtenido a partir de la etapa (1);

3) acetilación de la mezcla de ésteres de los ácidos quenodesoxicólicos de fórmulas I a IV añadiendo ácido acético anhidro y una base débil seleccionada de acetato sódico anhidro o piridina al resto obtenido a partir de la etapa (2);

4) añadir un disolvente orgánico no polar seleccionado de hexano, heptano, octano o isooctano al resto obtenido a partir de la etapa (3) y agitar a reflujo hasta que todo el resto se disuelva, y posteriormente cristalizar y retirar los ésteres acetilados de los ácidos quenodesoxicólicos de fórmulas III a IV, y una parte del éster acetilado del ácido quenodesoxicólico de fórmula II;

5) añadir alcohol C1-4 al resto obtenido a partir de la etapa (4) y cristalizar el compuesto de fórmula V**Fórmula**

durante 2~3 horas al intervalo de temperatura de 20 ~ 25 ºC; y

6) desprotección del compuesto de fórmula V obtenido a partir de la etapa (5) añadiendo agua y una base seleccionada de hidróxido sódico o hidróxido potásico al compuesto de fórmula V, y cristalización del compuesto de fórmula I en presencia de agua añadiendo un ácido seleccionado de ácido clorhídrico o ácido sulfúrico.

Procedimiento de purificación del ácido quenodesoxicólico Campo técnico

La presente invención se refiere a un procedimiento para purificar ácido quenodesoxicólico (ácido 3a,7a-dihidroxi- 5p-cólico). En particular, la presente invención se refiere a un procedimiento para purificar ácido quenodesoxicólico a partir de una mezcla de ácido quenodesoxicólico de baja calidad contenido en el sólido de bilis porcina, con gran rendimiento y pureza.

Técnica antecedente

El ácido quenodesoxicólico está contenido generalmente en la bilis de vacas, cerdos, osos o aves de corral tales como pollos o gallinas, así como en la bilis de seres humanos. El ácido quenodesoxicólico se usa como material de partida para la preparación de ácido ursodesoxicólico, que es eficaz para aliviar enfermedades del sistema biliar, hiperlipidemia, colelitiasis y enfermedades crónicas del hígado, y un procedimiento típico para preparar ácido ursodesoxicólico conocido en la técnica es como sigue.

Un procedimiento típico para preparar ácido quenodesoxicólico comprende las etapas de: esterificar el ácido cólico (ácido 3a,7a,12a-trihidroxicólico) con metilo; proteger el grupo hldroxi de las posiciones 3a y 7a acedándolas con ácido acético anhidro; oxidar el grupo hidroxl de la posición 12a a un grupo carbonllo usando ácido crómico y a continuación retirar el grupo carbonilo por la reacción de reducción de Wolff-klchner; hidrolizar y desproteger el producto obtenido para producir ácido quenodesoxicólico. El procedimiento anterior requiere que la reacción de reducción de Wolff-kichner se mantenga a una temperatura alta de más de 2 °C, y el suministro de material sin procesar puede interrumpirse por encefalopatía espongiforme bovina, etc.

La bilis de las aves de corral contiene ácido quenodesoxicólico, ácido litocólico y una pequeña cantidad de ácido cólico. De esta manera, el procedimiento para separar el ácido quenodesoxicólico a partir de las aves de corral se conoce bien en la técnica, pero no es económicamente razonable debido a la disminución de suministro de material sin procesar y al bajo rendimiento [véase, Wlndhaus et al, I Physiol. Chem., 14, 177~185 (1924)].

La Patente de Estados Unidos N° 4.186.143 desvela un procedimiento para separar y purificar puramente ácido quenodesoxicólico a partir de una mezcla de ácido quenodesoxicólico derivado de bilis porcina natural. Este procedimiento comprende las etapas principales de: pre-tratamiento para retirar el ácido 3a-hidroxi-6-oxo-5p-cólico por saponificación de la bilis; esterificación del ácido biliar; acetilación del éster de ácido biliar; retirada del producto intermedio usando un disolvente orgánico no polar; cristalización del éster acetilado de fórmula I; desprotección; y producción del compuesto de fórmula I usando la cristalización en un disolvente orgánico. Sin embargo, esta patente no describe el contenido de HPLC para el éster acetilado de fórmula I, y la pureza del producto final es muy baja ya que el poder rotatorio específico es [ajo25 + 13,8° (c=1, CHCI3), y el punto de fusión es 119-121 °C [STD: [a]D2^ + 15,2° (c=1, CHCI3), punto de fusión 127-129 °C. Además, la cristalización para purificar el producto final requiere un tiempo muy largo (es decir, 16-48 horas), y el procedimiento entero es complejo como ocho (8) etapas. De esta manera, cuando se purifica el compuesto de fórmula I usando el procedimiento anterior, el rendimiento del producto final se hace bajo, y el tiempo de reacción es tan largo como 12 días. Por lo tanto, el procedimiento no es económicamente razonable.

En particular, cuando el procedimiento anterior se aplica al sólido de bilis porcina que tiene un contenido del 35-55 % en peso de ácido quenodesoxicólico usado en la presente invención, la agitación y el filtrado son difíciles ya que el compuesto deseado precipita y se coagula junto con las impurezas.

Para superar los problemas anteriores, el objeto de la presente invención es proporcionar un nuevo procedimiento para purificar el compuesto de fórmulas I y II con pureza y rendimiento altos, reduciendo el tiempo requerido para todo el procedimiento.

El documento EP 386 538 se refiere a un procedimiento de purificación de ácido ursodesoxicólico (ácido 3-a-7-p- dihidroxicólico), y la etapa de desprotección se lleva a cabo con éster de metilo 3-a-7-p-dihidrocolánico.

El documento US 3 919 266 desvela la desprotección del éster de metilo de ácido 3-a-7-a-dihidroxi-5-p-colánico añadiendo KOH metanólico, acidificando con HCI acuoso y a continuación extrayendo el ácido 3-a-7-a-dihidroxi-5-p- colánico con éter de etilo y cristalizando el producto a partir de acetato de etilo caliente.

El documento WO 27/69814 describe un procedimiento alternativo para la purificación del ácido quenodesoxicólico.

Divulgación de la invención

La presente invención proporciona un procedimiento para purificar el compuesto de fórmula I, que comprende las etapas de: 1) pre-tratamiento de la bilis porcina disolviendo el sólido de bilis porcina derivado de la bilis porcina, que

contiene la mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas l-IV,

[Fórmula I] [Formulan]

y que tiene un contenido del 35-55 % en peso de ácido quenodesoxicólico, en un disolvente orgánico que contiene 5 sal, en el que el disolvente orgánico es acetato de etilo o acetona, y la sal es al menos una seleccionada del grupo que consiste en cloruro sódico, sulfato magnésico anhidro y sulfato sódico anhidro; 2) esterificación de una mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de fórmulas I a IV añadiendo un alcohol Ci_4 al resto obtenido a partir de la etapa (1);

3) acetilación de la mezcla de ésteres de los ácidos quenodesoxicólicos de fórmulas I a IV añadiendo ácido acético anhidro y una base débil seleccionada de acetato sódico anhidro o plrldina al resto obtenido a partir de la etapa (2);

4) añadir un disolvente orgánico no polar seleccionado de hexano, heptano, octano o ¡sooctano al resto obtenido a

partir de la etapa (3) y agitar a reflujo hasta que todo el resto se disuelva, y posteriormente cristalizar y retirar los ésteres acetllados de los ácidos quenodesoxicólicos de fórmulas III a IV, y una parte del éster acetllado del ácido quenodesoxicólico de fórmula II; 5) añadir un alcohol C1.4 al resto obtenido a partir de la etapa (4) y cristalizar el compuesto de fórmula V

[Fórmula V]

durante 2~3 horas en un intervalo de temperatura de 2 ~ 25 °C; y 6) desprotección del compuesto de fórmula V obtenido a partir de la etapa (5) añadiendo agua y una base seleccionada de hidróxido sódico o hidróxido potásico al compuesto de fórmula V, y cristalización del compuesto de fórmula I en presencia de agua añadiendo un ácido seleccionado de ácido clorhídrico o ácido sulfúrico.

Descripción detallada de la invención

En la presente memoria descriptiva, la frase "sólido de bilis porcina" representa un sólido derivado de bilis porcina, y contiene la mezcla de los ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas l-IV.

[Fórmula I]

en las que, el compuesto de fórmula I representa ácido quenodesoxlcóllco (ácido 3oc,7oc-d¡h¡drox¡-5p-cól¡co, AQDC); el compuesto de fórmula II representa ácido hlodesoxlcóllco (ácido 3a,6a-dlhldrox¡-5p-cól¡co, AHDC); el compuesto de fórmula III representa ácido hlocóllco (ácido 3a,6a,7oc-tr¡h¡drox¡-5p-cól¡co, AHC); y el compuesto de fórmula IV representa ácido 3a-hldroxl-6-oxo-5p-cól¡co (ceto).

En lo sucesivo en el presente documento, cada etapa para purificar ácido quenodesoxlcóllco de acuerdo con la 1 presente Invención se ejemplificará con detalle.

Etapa 1: Pre-tratamlento del sólido de bilis porcina

Para usar el sólido de bilis porcina que tiene un contenido del 35-55 % en peso de ácido quenodesoxicólico en la etapa de purificación, todo el sólido de bilis porcina se agita y se disuelve en un disolvente orgánico a reflujo. A continuación, la mezcla se enfría a temperatura ambiente, y se agita más durante 1-2 horas. A continuación, los 15 materiales insolubles se retiran de la mezcla usando papel de filtro, preferentemente papel de filtro y tierra de diatomeas. El disolvente orgánico se retira a presión reducida para obtener restos (por ejemplo, AQDC, AHDC AHC y ceto), que se usan en la siguiente etapa. La sal usada en la presente etapa puede seleccionarse opclonalmente siempre que no afecte a los compuestos en el reactivo. Preferentemente, la sal es al menos una seleccionada del grupo que consiste en cloruro sódico, sulfato magnésico... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de purificación del compuesto de fórmula I, que comprende las etapas de:

1) pre-tratamiento de la bilis porcina disolviendo sólido de bilis porcina derivado de la bilis porcina, que contiene la mezcla de los ácidos quenodesoxicólicos de las Fórmulas l-IV,

[Fórmula I]

y que tiene un contenido del 35-55% en peso de ácido quenodesoxicólico, en un disolvente orgánico que

contiene sal, en el que el disolvente orgánico es acetato de etilo o acetona, y la sal es al menos una seleccionada del grupo que consiste en cloruro sódico, sulfato magnésico anhidro y sulfato sódico anhidro;

2) esterlflcaclón de una mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de fórmulas I a IV añadiendo alcohol C1.4 al resto obtenido a partir de la etapa (1);

3) acetllaclón de la mezcla de ésteres de los ácidos quenodesoxicólicos de fórmulas I a IV añadiendo ácido

acético anhidro y una base débil seleccionada de acetato sódico anhidro o piridina al resto obtenido a partir de la etapa (2);

4) añadir un disolvente orgánico no polar seleccionado de hexano, heptano, octano o ¡sooctano al resto obtenido a partir de la etapa (3) y agitar a reflujo hasta que todo el resto se disuelva, y posteriormente cristalizar y retirar

los ésteres acetllados de los ácidos quenodesoxicólicos de fórmulas III a IV, y una parte del éster acetllado del

ácido quenodesoxicólico de fórmula II;

5) añadir alcohol C1-4 al resto obtenido a partir de la etapa (4) y cristalizar el compuesto de fórmula V

durante 2~3 horas al intervalo de temperatura de 2 ~ 25 °C; y

6) desprotección del compuesto de fórmula V obtenido a partir de la etapa (5) añadiendo agua y una base seleccionada de hidróxido sódico o hidróxido potásico al compuesto de fórmula V, y cristalización del compuesto de fórmula I en presencia de agua añadiendo un ácido seleccionado de ácido clorhídrico o ácido sulfúrico.

2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la cantidad de sal es del 5-1 % en peso, en base al peso total del disolvente orgánico.

3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la etapa (5) comprende adicionalmente la recristalización del compuesto de fórmula V en alcohol C1-4, dentro del intervalo de temperatura de ~ 15 °C después de la etapa de cristalización, y la pureza del compuesto recristalizado de fórmula V es del 99 % o mayor.

4. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la cantidad de alcohol usada en la etapa (5) ,5 ~ 3 veces la cantidad de resto obtenido a partir de la etapa (4).

5. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el pH de la desprotección en la etapa (6) es 4 o menor.

6. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la cristalización en presencia de agua en la etapa (6) se lleva a cabo en el intervalo de temperatura de 35 ~ 45 °C.