Polipéptidos y polinucleótidos, y usos de los mismos como una diana farmacológica para producir fármacos y agentes biológicos.

Una composición farmacéutica que comprende al menos un polipéptido de ectodominio de C1ORF32 seleccionado entre el grupo que consiste en:

i. un polipéptido de ectodominio de C1ORF32 que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEC ID Nº: 299;

ii. un polipéptido de ectodominio de C1ORF32 que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEC ID Nº: 147;

iii. un polipéptido de ectodominio de C1ORF32 que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEC ID Nº: 148;

iv. un polipéptido variante de ectodominio de C1ORF32 que posee una identidad de secuencia de al menos un 95 % con las secuencias de aminoácidos en la SEC ID Nº: 299, SEC ID Nº: 147 o SEC ID Nº: 148;

y un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Polipéptidos y polinucleótidos, y usos de los mismos como una diana farmacológica para producir fármacos y agentes biológicos Solicitudes relacionadas La presente invención reivindica el beneficio de prioridad de e incorpora por referencia en sus totalidades los documentos de solicitud provisional de Estados Unidos con Números de Serie: 60/969.865; 60/969.799; 60/969.780, 60/969.806, 60/969.769, y 60/969.788, todos presentados el 4 de septiembre de 2007.

Campo de la invención La presente invención se refiere al descubrimiento de ciertas proteínas que se expresan de forma diferencial en tejidos específicos y a su uso como dianas terapéuticas y de diagnóstico. De forma más específica, la invención se refiere a una proteína C1ORF32 y sus variantes, que son expresadas de forma diferencial por algunos cánceres, y por lo tanto son dianas adecuadas para inmunoterapia, terapia para el cáncer, y desarrollo de fármacos. La presente invención también se refiere al descubrimiento de dominios extracelulares de C1ORF32 y sus variantes que son dianas adecuadas para inmunoterapia, terapia para el cáncer, y desarrollo de fármacos.

Además, dado que se cree que las proteínas de la presente invención, en base a su estructura de tipo B7, desempeñan un papel en la coestimulación inmune, la invención también se refiere al uso de estas proteínas, o a fármacos que modulan estas proteínas (agonistas y antagonistas) , como moduladores inmunes y para inmunoterapia, especialmente para el tratamiento de cáncer y trastornos relacionados con el sistema inmune tales como cánceres y trastornos autoinmunes. Además, la invención se refiere de forma más específica a anticuerpos terapéuticos y de diagnóstico y a terapias y procedimientos de diagnóstico que usan los mismos anticuerpos y fragmentos de anticuerpos que se unen de forma específica a las proteínas de la invención o a una porción soluble o secretada de las mismas, especialmente al ectodominio.

Antecedentes de la invención Los antígenos tumorales se posicionan idealmente como biomarcadores y dianas de fármacos, y desempeñan un papel crítico en el desarrollo de nuevas estrategias para agentes de inmunoterapia activa y pasiva, que se usan como terapias independientes o junto con terapias convencionales para el cáncer. Los antígenos tumorales se pueden clasificar como antígenos específicos de tumores (TSA) donde los antígenos se expresan únicamente en las células tumorales y no en los tejidos normales, o antígenos asociados a tumores (TAA) donde los antígenos se sobreexpresan en células tumorales pero sin embargo también están presentes a bajos niveles en los tejidos normales.

Los TAA y los TSA se validan como dianas para terapia pasiva (anticuerpos) así como para inmunoterapia activa usando estrategias para vencer la tolerancia inmune y estimular el sistema inmune. Los epítopos antigénicos que son las dianas de estos enfoques terapéuticos están presentes en la superficie celular, sobreexpresados en células tumorales en comparación con las células no tumorales, y son dianas de anticuerpos que bloquean la actividad funcional, inhiben la proliferación celular, o inducen la muerte celular.

Existe un número creciente de antígenos asociados a tumores frente a los que se han sometido a ensayo anticuerpos monoclonales o están en uso como tratamiento para el cáncer. La identificación y caracterización molecular de nuevos antígenos tumorales expresados por tumores malignos humanos es un campo activo en la inmunología tumoral. Se han usado varios enfoques para identificar antígenos asociados a tumores como candidatos a diana para inmunoterapia, incluyendo enfoques bioinformáticos de alto rendimiento, basados en genómica y proteómica. La identificación de nuevos TAA o TSA expande el espectro de dianas de antígenos tumorales disponible para el reconocimiento inmune y proporciona nuevas moléculas diana para el desarrollo de agentes terapéuticos para inmunoterapia pasiva, incluyendo anticuerpos monoclonales, tanto sin modificar como armados. Tales nuevos antígenos también pueden indicar el camino de vacunas terapéuticas más eficaces para inmunoterapia activa o adoptiva.

La vacunación para el cáncer implica la administración de antígenos tumorales y se usa para vencer la tolerancia inmune e inducir la respuesta activa de linfocitos T frente al tumor. La terapia de vacunación incluye el uso de ADN desnudo, péptidos, proteínas recombinantes, y terapia celular completa, donde se usan las propias células tumorales del paciente como la fuente de la vacuna. Con la identificación de antígenos tumorales específicos, las vacunaciones se realizan más a menudo mediante terapia celular dendrítica, en la que las células dendríticas se cargan con la proteína o péptido pertinente, o se transfectan con ADN o ARN vectorial.

Las principales aplicaciones de los anticuerpos anti-TAA para el tratamiento del cáncer son terapias con anticuerpos desnudos, terapias con anticuerpos conjugados con fármacos, y terapias de fusión con inmunidad celular. Desde su descubrimiento, los anticuerpos se conciben como "fórmulas mágicas" que podrían suministrar agentes tóxicos, tales como fármacos, toxinas, enzimas y radioisótopos, de forma específica al sitio afectado y dejando sin afectar los tejidos normales no diana. De hecho, los anticuerpos, y en particular los fragmentos de anticuerpo, pueden funcionar

como vehículos de sustancias citotóxicas tales como radioisótopos, fármacos y toxinas. La inmunoterapia con tales inmunoconjugados es más eficaz que con los anticuerpos desnudos.

A diferencia del éxito abrumador de los anticuerpos desnudos (tales como Rituxan y Campath) y conjugados (tales como Bexxar y Zevalin) en el tratamiento de tumores malignos hematológicos, solo se han conseguido éxitos modestos en la inmunoterapia de tumores sólidos. Una de las limitaciones principales en la aplicación satisfactoria de la inmunoterapia a tumores sólidos es el gran tamaño molecular de la inmunoglobulina intacta que da como resultado una semivida en suero prolongada pero una mala penetración y captación tumoral. De hecho, solo una muy pequeña cantidad del anticuerpo administrado (tan baja como un 0, 01 %) alcanza el tumor. Además de su tamaño, los anticuerpos encuentran otros impedimentos antes de alcanzar sus antígenos diana expresados sobre la superficie celular de los tumores sólidos. Algunas de las barreras incluyen un bajo flujo sanguíneo en los tumores grandes, permeabilidad del endotelio vascular, elevada presión del fluido intersticial del estroma tumoral, y expresión antigénica heterogénea.

Con el advenimiento de la ingeniería de anticuerpos, se han generado fragmentos de anticuerpo de bajo peso molecular que exhiben una penetración tumoral mejorada. Tales fragmentos de anticuerpo se conjugan a menudo con moléculas citotóxicas específicas y se diseñan para suministrarlas selectivamente a las células cancerígenas. Aún así, los tumores sólidos continúan siendo un desafío formidable para terapia, incluso con fragmentos de anticuerpo inmunoconjugados.

La nueva ola de estrategias de optimización implica el uso de modificadores biológicos para modular los impedimentos planteados por los tumores sólidos. Por lo tanto, en combinación con los anticuerpos o sus fragmentos de anticuerpo conjugados, se están usando diversos agentes para mejorar el flujo sanguíneo tumoral, aumentar la permeabilidad vascular, disminuir la presión del fluido intersticial tumoral mediante la modulación de las células de estroma y los componentes de la matriz extracelular, regular positivamente la expresión de los antígenos diana y mejorar la penetración y retención del agente terapéutico.

La inmunoterapia con anticuerpos representa una oportunidad fascinante para combinar con las modalidades convencionales, tales como quimioterapia, así como las combinaciones con diversos agentes biológicos para obtener una actividad sinérgica. De hecho, los mAb sin conjugar son más eficaces cuando se usan en combinación con otros agentes terapéuticos, incluyendo otros anticuerpos.

Otro componente de la respuesta del sistema inmune a la inmunoterapia es la respuesta celular, específicamente la respuesta de linfocitos T y activación de linfocitos T citotóxicos (CTL) . La eficacia del sistema inmune en la mediación de la regresión tumoral depende de la inducción de las respuestas de los linfocitos T específicas a antígeno a través de la vigilancia inmune fisiológica, precedida de vacunación, o seguida de transferencia adoptiva de linfocitos T. Aunque se ha identificado una diversidad de antígenos asociados a tumores y se han sometido a ensayo numerosas estrategias inmunoterapéuticas, son poco frecuentes las... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende al menos un polipéptido de ectodominio de C1ORF32 seleccionado entre el grupo que consiste en:

i. un polipéptido de ectodominio de C1ORF32 que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEC ID Nº: 299;

ii. un polipéptido de ectodominio de C1ORF32 que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEC ID Nº: 147;

iii. un polipéptido de ectodominio de C1ORF32 que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEC ID Nº: 148;

iv. un polipéptido variante de ectodominio de C1ORF32 que posee una identidad de secuencia de al menos un 95 % con las secuencias de aminoácidos en la SEC ID Nº: 299, SEC ID Nº: 147 o SEC ID Nº: 148;

y un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

2. La composición de la reivindicación 1, en la que dicho polipéptido consiste en la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 147, SEC ID Nº: 148 o SEC ID Nº: 299.

3. Un polinucleótido aislado que codifica el polipéptido de las reivindicaciones 1 o 2.

4. Un vector de expresión que contiene al menos una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación

3.

5. Una célula recombinante que comprende un vector de expresión o un virus que contiene una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 3, en el que la célula expresa constitutiva o induciblemente el polipéptido codificado por el segmento de ADN.

6. Un procedimiento de producción de un polipéptido de ectodominio de C1ORF32, o fragmento o conjugado del mismo, que comprende el cultivo de la célula recombinante de acuerdo con la reivindicación 5, en condiciones mediante las cuales la célula expresa el polipéptido codificado por el segmento de ADN o ácido nucleico y la recuperación de dicho polipéptido.

7. Un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que comprende un sitio de unión a antígeno que se une específicamente a un polipéptido seleccionado entre el grupo que consiste en:

i) un polipéptido de ectodominio de C1ORF32 que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEC ID Nº: 299; ii) un polipéptido de ectodominio de C1ORF32 que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEC ID Nº: 147; iii) un polipéptido de ectodominio de G1ORF32 que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEC ID Nº: 148.

8. El anticuerpo o fragmento de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el anticuerpo es un anticuerpo completamente humano, anticuerpo quimérico, anticuerpo humanizado o primatizado; fragmento Fab, Fab’, F (ab’) 2, F (ab’) , F (ab) , Fv o scFv y unidad mínima de reconocimiento.

9. El anticuerpo o fragmento de acuerdo con la reivindicación 7 u 8, en el que el anticuerpo se acopla a un resto seleccionado entre: una enzima, una toxina, un agente terapéutico, un agente quimioterapéutico, o un marcador detectable; y en el que el marcador detectable es un radioisótopo, un quelante de metal, una enzima, un compuesto fluorescente, un compuesto bioluminiscente o un compuesto quimioluminiscente.

10. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 7-9.

11. Una proteína de fusión que comprende el polipéptido de ectodominio de C1ORF32 aislado soluble unido a una secuencia de proteína que no es C1ORF32.

12. Una proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 11, en la que la secuencia de proteína que no es C1ORF32 es al menos una parte de una molécula de inmunoglobulina.

13. La proteína de fusión de acuerdo con la reivindicación 11 o 12, en la que el polipéptido de ectodominio de C1ORF32 es seleccionado entre un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 147, SEC ID Nº: 148 o SEC ID Nº: 299.

14. La proteína de fusión de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 11 a 13, en la que la proteína de fusión comprende un fragmento de Fc.

15. La proteína de fusión de acuerdo con al menos una de las reivindicaciones 11 a 14, que tiene la secuencia presentada en la SEC ID Nº: 105.