Partículas víricas VSV-VIH que carecen de la funcionalidad transcriptasa inversa y aplicaciones terapéuticas de las mismas.

Partículas víricas VSV-VIH que carecen de la funcionalidad transcriptasa inversa y aplicaciones terapéuticas de las mismas.

La presente invención se refiere al desarrollo de viriones no replicativos que tienen una mutación en la secuencia que codifica la proteína RT y que comprenden un genoma de un virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) y vehiculizados por la proteína G de un virus de la estomatitis vesicular (VSV). Dichos viriones son útiles en medicina, concretamente para su uso en la generación de vacunas y más concretamente para el tratamiento del SIDA. Además la presente invención se refiere a un método para obtener una vacuna personalizada.

Partículas víricas VSV-VIH que carecen de la funcionalidad transcriptasa inversa y aplicaciones terapéuticas de las mismas

Campo de la invención

La presente invención se refiere a inmunógenos de VIH que carecen de una proteína transcriptasa inversa funcional y vehiculizados por la proteína G de un virus de estomatitis vesicular (VSV). La invención también se refiere a sus usos preventivos y terapéuticos y a métodos para obtener células inmunes activadas usando dichos inmunógenos.

Antecedentes de la invención

Se estima que más de 60 millones de personas en el mundo se han infectado con el virus de la inmunodeficiencia humana desde 1982. Casi la mitad de estos individuos infectados han muerto del síndrome de inmunodeficiencia adquirido (SIDA) resultante en el mismo intervalo de tiempo. Aunque la propagación del virus parece haber alcanzado una meseta últimamente, se describieron 2,5 millones de nuevas infecciones por VIH en 2007. El VIH aún es un problema de salud pública principal. Véase, UNAIDS, 2008 Report on the Global AIDS Epidemic. En los Estados Unidos y Europa Occidental la morbilidad y mortalidad debido a la infección por VIH han disminuido de forma espectacular tras la introducción de terapias antirretrovirales de gran actividad (TARGA).

A pesar de su alta eficacia para controlar la replicación vírica y para restablecer la inmunidad contra infecciones oportunistas, TARGA es incapaz de erradicar el virus y recuperar las respuestas específicas contra VIH en personas infectadas por VIH. De hecho, tras la retirada de TARGA se produce en todos los casos un aumento rápido de la carga vírica. Véase, Carcelain G, et al., J. Viral. 2001, 75(1):234-41. Esto implica que una vez iniciado la TARGA debe proseguirse de por vida, lo que es problemático por los graves efectos secundarios de diversa índole que puede comportar, como las alteraciones metabólicas y el riesgo cardiovascular que conlleva.

Actualmente el arsenal terapéutico contra la infección por VIH es muy completo y hay perspectivas de que seguirá creciendo de forma importante en los próximos años. Esta situación contrasta con los limitados avances obtenidos en el desarrollo de una vacuna

preventiva o terapéutica. Este hecho se debe, entre otras razones, a la diversidad genética, la rápida velocidad de replicación y la elevada frecuencia de mutación inherentes al VIH, la dificultad de inducción de anticuerpos neutralizantes, la falta de un modelo animal adecuado, el conocimiento limitado de la respuesta inmune capaz de generar protección frente a la infección por VIH y las diferentes vías de transmisión del virus. Véase, Autran B, etal., Nat Rev Immunol 2003, 3(6):503-8 y Kaufmann S, etal., Nat Med. 2005, 11(4 Supl):S33-44).

Un futuro objetivo para el diseño de vacunas consiste en aumentar su eficacia posibilitando su accesibilidad al mayor número de células presentadoras de antígeno (CPA) posibles y conseguir concentraciones locales altas requeridas para inducir potentes respuestas inmunológicas. Al facilitarse que los compuestos vacunales penetren adecuadamente en los sitios de inmunización ricos en CPA, así como la migración específica y la activación de las CPA, se incrementaría la eficacia de las nuevas vacunas en la inducción de respuestas inmAunes protectoras. Las vacunas podrían ser eficientes para inducir respuestas inmunes fuertes y protectoras frente a patógenos si penetran adecuadamente y activan las células dendríticas (CD) que desempeñan un papel único como inductoras de respuestas específicas de antígeno. En el caso de la infección por VIH, la depuración del virus depende de la generación de anticuerpos pero también de la inducción de células efectoras y memoria T CD4+ y CD8+. Diversos estudios que profundizan en las respuestas inmunes de memoria, se han centrado en la importancia de constituir un conjunto funcional de células memoria T CD8+ para controlar la infección vírica y que precisa una función adecuada de las CPA y de respuestas de células T CD4+.

No hay en la actualidad ninguna vacuna preventiva o terapéutica aprobada para su utilización en VIH. Ninguna de las vacunas terapéuticas utilizadas ha mostrado eficacia a largo plazo respecto al control de la replicación vírica, el aumento de linfocitos CD4 o en la progresión a SIDA en estudios aleatorizados. Tradicionalmente se han utilizado vacunas de virus vivos atenuados para la prevención de infecciones víricas como por ejemplo, el sarampión, la parotiditis o la rubéola. Estas vacunas son altamente inmunogénicas porque imitan la infección natural tanto en la respuesta celular como humoral, e inducen una inmunidad de por vida después de una o dos dosis. En contraste, las vacunas que utilizan organismos muertos o subunidades no imitan la infección y la administración de estas vacunas induce solo una respuesta humoral, se requieren recuerdos periódicos para mantener los anticuerpos en las concentraciones adecuadas y además se utilizan adyuvantes como las sales de aluminio para incrementar estas respuestas que a veces son muy pobres. Véase, McMichael A, et al., Nat Med. 2003, 9:874-80.

Algunas de estas estrategias de vacunas tradicionales no se pueden emplear para prevenir la infección por VIH o de forma terapéutica debido a problemas de seguridad o porque su eficacia ha sido nula cuando se han utilizado. Véase, Mwau M, et al., J Gene Med. 2003; 5:3-10 y Moss R et al., Vaccine 2000; 18:1081-87. Por ejemplo, las vacunas vivas atenuadas están prohibidas en seres humanos, ya que en experimentos con animales el virus de la inmunodeficiencia del simio (VIS) altamente atenuado que protegía a macacos adultos de infección por VIH producía SIDA en macacos neonatos, y algunos macacos adultos desarrollaron SIDA posteriormente. Además, el grado de atenuación se correlacionó de forma inversa con la inmunogenicidad. Véase, Wyand et al., Nat Med. 1997; 3:32-36. Por otro lado, las vacunas de virus muertos no han mostrado resultados positivos en ensayos clínicos. Véase, Moss R, et al., Vaccine 2000; 18:1081-87.

Por tanto, existe una necesidad antigua y continua en la técnica para inmunógenos de VIH para la preparación de vacunas más seguras y eficaces, particularmente vacunas terapéuticas autólogas de VIH.

Compendio de la invención

La presente invención se refiere a inmunógenos de VIH que carecen de una proteína transcriptasa inversa funcional y vehiculizados por la proteína G de un virus de estomatitis vesicular (VSV) capaces de generar una respuesta inmune.

En un primer aspecto, la invención se refiere a un virión no replicativo que comprende el genoma de un virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) que contiene una mutación en el gen pol, en donde dicha mutación causa que el virus producido únicamente de dicho genoma sea un virus no replicativo; y en donde dicho virión comprende además una glicoproteína G de la envuelta de un virus de estomatitis vesicular (VSV).

En otro aspecto, la invención se refiere a un método para obtener una célula inmune activada que comprende las etapas:

a) poner en contacto una célula inmune con un virión no replicativo de la invención,

b) mantener la mezcla obtenida en la etapa a) en condiciones adecuadas para la infección de dichas células inmunes por el virión y para que se procesen los antígenos procedentes del virión no replicativo, y

c) opcionalmente, recuperar las células inmunes activadas.

En otro aspecto, la invención se refiere a un método in vitro para la obtención de una vacuna frente a VIH personalizada para un sujeto infectado con VIH, en donde dicha vacuna comprende células inmunes activadas, que comprende:

a) poner en contacto in vitro células inmunes con un virión no replicativo de la invención, en donde el genoma de VIH del virión comprende además una mutación en al menos un gen seleccionado del grupo que consiste en los genes gag, nef, tat, rev, vif, vpu y vpr o en la secuencia que codifica la proteína proteasa en gen pol, en donde dicha mutación comprende la deleción completa o parcial de dicho gen; y en donde el genoma del VIH del virión comprende además una secuencia homóloga a la de la región delecionada mediante de la mutación en al menos un gen seleccionado del grupo que consiste en los genes gag, nef, tat, rev, vif, vpu y vpr o en la secuencia que codifica la proteína proteasa en gen pol, originario de un segundo genoma de VIH, en donde el genoma de dicho segundo VIH es diferente del genoma de VIH que contiene la región delecionada y en el que el genoma de dicho segundo VIH se origina de un VIH de dicho sujeto infectado con un VIH;

b) mantener la mezcla obtenida en la etapa a) en condiciones adecuadas para la infección de dichas células... [Seguir leyendo]

1. Un virión no replicativo que comprende un genoma de un virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) que contiene una mutación en el gen pol, en donde dicha mutación 5 ocasiona que el virus producido únicamente a partir de dicho genoma sea un virus no

replicativo; y en donde dicho virión comprende además una glicoproteína G de la envuelta de un virus de la estomatitis vesicular (VSV), en donde dicha mutación en el gen pol es una deleción completa o parcial de la secuencia que codifica la proteína RT.

10 2. Un virión como en la reivindicación 1, en donde dicha deleción completa o parcial de la

secuencia que codifica la proteína RT corresponde a la deleción en dicha secuencia que codifica la proteína RT en la construcción pNL4-3 ART depositada con el número de acceso DSM 25917.

15 3. Un método para obtener una célula inmune activada que comprende los pasos:

a) poner en contacto una célula inmune con un virión no replicativo como en las reivindicaciones 1 a 2,

b) mantener la mezcla obtenida en el paso a) en condiciones adecuadas para infectar dicha célula inmune con el virión y para procesar los antígenos originarios del virión no replicativo, y

c) opcionalmente, recuperar las células inmunes activadas.

4. El método como en la reivindicación 3, en donde dicha célula inmune se selecciona de un 25 linfocito, una célula mononuclear de sangre periférica y una célula dendrítica derivada de

monocitos.

5. Una célula obtenible según el método como en las reivindicaciones 3 a 4.

30 6. Una composición inmunogénica o una vacuna que comprende un virión no replicativo

como en las reivindicaciones 1 o 2 o una célula como en la reivindicación 5, junto con un soporte farmacéuticamente aceptable.

7. Uso de un virión no replicativo como en las reivindicaciones 1 o 2, una célula como en la 35 reivindicación 5, o una composición inmunogénica según la reivindicación 6 para la

preparación de un medicamento para la prevención o tratamiento de una infección por VIH o una enfermedad asociada con una infección por VIH.

Una composición que comprende:

(i) un polinucleótido que comprende un genoma del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) que contiene una mutación en el gen pol, en donde dicha mutación origina que el virus producido únicamente de dicho genoma sea un virus no replicativo, en donde dicha mutación en el gen pol da lugar a una proteína RT no funcional; y

(ii) un polinucleótido que codifica la glicoproteína G de la envuelta de un virus de la estomatitis vesicular (VSV).