Nuevos compuestos de flavonol, una fracción/extracto bioactivo de Ulmus wallichiana y sus compuestos para la prevención o tratamiento de trastornos relacionados con la salud de los huesos.

Un compuesto de flavonol de fórmula general 1 en la que R1 es OH y R2 es OH o H.**Fórmula**

Nuevos compuestos de flavonol, una fracción/extracto bioactivo de Ulmus Wallichiana y sus compuestos para la prevención o tratamiento de trastornos relacionados con la salud de los huesos

Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo de una composición farmacéutica que proporciona nuevos compuestos de flavonol, nuevos extractos vegetales, sus fracciones y compuestos puros aislados de fuentes naturales que son útiles para la prevención y/o tratamiento de diversas indicaciones médicas asociadas a los síndromes o trastornos o enfermedades dependientes o independientes de estrógenos, preferentemente en la prevención o tratamiento de síndromes o trastornos o enfermedades dependientes o independientes de estrógenos causadas en seres humanos y animales, y la obtención de masa ósea máxima (PBM) durante el crecimiento y salud del esqueleto en seres humanos y animales. En particular, la presente invención se refiere además a procedimientos para la preparación de extractos biológicamente activos, fracciones y aislamiento de compuestos puros, a partir de la planta Ulmus wallichiana de la familia de Ulmáceas, sus sales y composiciones farmacéuticamente aceptables son el aspecto principal de la presente invención.

Antecedentes de la invención

La osteoporosis, que se ha definido como un "estado de baja masa ósea" es uno de los principales problemas de envejecimiento de la sociedad. La osteoporosis es un trastorno metabólico caracterizado por un deterioro microarquitéctónico del tejido óseo que conduce a una mayor fragilidad ósea y un aumento consiguiente del riesgo de fractura en los miembros de edad avanzada de la población. Las fracturas por osteoporosis ocurren de la manera más común en la columna vertebral, cadera, radio distal y costillas. El riesgo es elevado en mujeres en comparación con hombres y aumenta de forma aguda a partir de la edad de 50 años. Los factores de predisposición a la osteoporosis incluyen antecedentes familiares, factores genéticos, factores hormonales, nutrición inapropiada e ingesta de determinados medicamentos, inmovilidad y enfermedades. La calidad de vida se ve seriamente afectada en las personas con osteoporosis grave. Se sabe que afecta a > 50 % de las mujeres y 30 % de los hombres con más de 50 años En mujeres, existe una tasa acelerada de pérdida ósea de forma inmediata y durante un número variable de años tras la menopausia.

Existe un nexo bien reconocido entre la prevalencia de la obtención de PBM y osteoporosis entre las mujeres del Sur de Asia (S. Adami, Osteoporosis Int., 1:S27-30, 1994). PBM se define como el nivel más elevado de masa ósea que se puede lograr como resultado de un crecimiento normal. La adolescencia es el período más crítico de la vida para la salud ósea ya que más de la mitad de PBM se acumula durante los años de adolescencia. Durante estos años de edad temprana, la formación ósea es mayor que la resorción ósea y la masa ósea aumenta. PBM obtenida en la edad adulta temprana es un determinante importante de la fragilidad del esqueleto al menos hasta la edad de 70 años (L. A. Soyka, W. P. Farifield. A. Klibanski, J Clin Endocrinol Meta, 11:3951-3963, 2000). Tras la obtención de PMB, la resorción es más rápida que la formación y la masa ósea disminuye. Aunque la pérdida de masa ósea gradual es normal con el envejecimiento, aquellas personas que no logran un PBM óptimo y las que presentan una pérdida de masa ósea acelerada tienen el riego más elevado de osteoporosis. Además, un PBM bajo predispone a un mayor riesgo de fractura por fragilidad.

Por tanto, debido a que las personas con elevado PBM a la edad joven son susceptibles de tener una masa ósea elevada en la edad avanzada, los agentes que aumentan PBM durante el desarrollo del esqueleto constituyen un objetivo deseable para la prevención de la osteoporosis. PBM tiene lugar varios años después de completarse el crecimiento lineal ya que la acumulación mineral ósea continúa después de este momento, aunque el tiempo preciso para obtener PBM no resulta concreto y varía entre los distintos puntos del esqueleto. La densidad de masa ósea por área (BMD) en el fémur alcanza un máximo a la edad de 20 años, mientras que la masa total del esqueleto tiene lugar 6-10 años después, bastante después de la interrupción de la acción anabólica de la hormona del crecimiento (GH).

La mayoría de los agentes farmacológicos disponibles para los trastornos de pérdida ósea incluyen calcio, vitamina D y sus análogos, calcitonina, bisfosfonatos, raloxifeno, terapia de sustitución hormonal (HRT), etc, que actúa disminuyendo la tasa de resorción ósea, ralentizando de este modo la tasa de pérdida ósea. La administración programada de dichos agentes anti-resorción evita la pérdida ósea.

La terapia de sustitución hormonal, aunque eficaz en la prevención de la pérdida ósea tras ovarioectomía o menopausia en mujeres se asocia a un riesgo elevado de hiperplasia de endometrio y cáncer [Grady, D. Gebretsadik, T. Ernestwr, V. Petitti, D. Gynecol. 85, 304-313 (1995), Beresford S. A. Weiss, N. S. Voight, L. F. McKnight, B. Lancet 349, 458-461 (1997)], cáncer de mama [Riggs, L. Hartmann, L. C. J. Med. 348, 619-629 (2003)] y enfermedades trombo-embólicas [Delmas, P. D. Lancet 359, 2018-2026 (2002)].

El efecto secundario de la terapia de calcio es del desarrollo de cálculos renales. La principal desventaja del uso de calcitonina es su elevado coste. Tras el tratamiento con calcitonina, algunos individuos pueden desarrollar taquifilaxis.

Los bisfosfonatos tienen una escasa absorción y pueden provocar irritación gastrointestinal, diarrea y estreñimiento. Se ha informado de que raloxifeno aumenta la incidencia de sofocos, trombosis de venas interiores, embolia pulmonar y calambres en las piernas [Clemett, D.; Spencer, C. M. Drugs 60, 380-409 (2000)].

El documento CN 101 058 594 A se refiere a un extracto procedente de Sarcandra glabra para la prevención de insuficiente hepática.

El documento US 2003/109462 se refiere a derivados de naringenina y el uso de estos derivados como componentes activos en composiciones insecticidas.

MARAIS C. ET AL.: "(S)- and (R)-Eirodictyol-6-C-sz-D-glucopyranosid, novel keys to the fermentation of rooibos (Aspalathus linearis)" PHYTOCHEMISTRY, PERGAMON PRESS, GB, vol. 55, n° 1, 1 de septiembre de 2000 (2000- 09-01), páginas 43-49, XP004291558 ISSN: 0331-9422 describe la fermentación de rooibos (Aspalathus linearis), donde las hojas y tallo procesados de Aspalathus linearis contienen un par diastereomérico de las flavonas, (S)- y (R)-eriodictiol-6-C-(3-D-glucopiranosido, que también se forma por medio de delación oxidativa de la dihidrochalcona, as-palatina, en condiciones que se parecen al procedimiento de fermentación.

El documento US 2008/003300 se refiere a un método para el tratamiento de una enfermedad ósea y la prevención de enfermedades óseas, incluyendo pérdida ósea provocada por osteoporosis, restitución ósea de fracturas y osteomalacia, usando un flavonoide de anillo-B y al menos un flavano en una mezcla con un sistema de calcio/fosfato que contiene uno o más iones seleccionados entre el grupo que consiste en iones de magnesio, cinc y fluoruro.

WANG, XIN-LUAN ET AL.: "Effects of eleven flavonoids from the osteoprotective fraction of Drynaria fortunei (Kunze)

J. SM. on ostegoblastic proliferation using an osteoblast-like cell-line" CHEMICAL 6 PHARMACEUTICAL BULLETIN, 56(1), 46-51 CODEN; ISSN: 009-2363, 2008, XP002531858 se refiere a Drynaria fortunei (KUNZE) J. SM. (DFE), una de las medicinas chinas tradicionales usadas con mayor frecuencia prescrita para el tratamiento de osteoporosis en China. Se diseño un estudio para investigar los constituyentes osteoprotectores de Drynaria fortunei. Once flavonoides procedentes de rizomas de D. fortune mostraron actividad sobre la proliferación de células UMR106.

El documento EP-A-1 514 540 se refiere a agentes para el fortalecimiento de tejidos que contienen calcio, en el que los agentes pueden escogerse entre, por ejemplo, flavonas, flavonoles y flavanonas.

Los factores relativos a la obtención de PBM incluyen factores congénitos, dieta, hormonales, actividad física, estilo de vida, fármacos y enfermedades. Una intervención terapéutica destinada a aumentar PBM se ha limitado únicamente al control de los factores tales como estado de estrógenos, ingesta de calcio en la dieta y actividad física. Parece que la ingesta de calcio es relevante hasta la denominada ingesta umbral (1000 mg/día), aunque no parece que asignaciones superiores ofrecen ventajas adicionales. El ejercicio afecta únicamente a las regiones del esqueleto bajo tensión mecánica. La administración de estrógenos es realista... [Seguir leyendo]

1.- Un compuesto de flavonol de fórmula general 1 en la que R1 es OH y R2 es OH o H.

OH

OH O

K058: Ri=R2=OH

K10tt Ri=OH, R>=H

Fórmula General 1

2. Un compuesto según la reivindicación 1 aislado a partir de Ulmus wallichiana.

3. Un compuesto según la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de trastornos óseos.

4. Un extracto/fracción bioactiva de Ulmus wallichiana útil para la gestión o prevención o tratamiento de trastornos óseos en el que dicho extracto/fracción comprende compuestos marcadores de fórmula general 2,

en la que los compuestos marcadores K012, K058, K068, K100 varían de 6,7-12 %, 1,7-4,5 %, 0,6-1,2 %, 1,7-4,5 % respectivamente en extracto alcohólico.

5. Un extracto bioactivo según la reivindicación 4 en el que el extracto se obtiene a partir de extracción alcohólica de Ulmus wallichiana que comprende los compuestos marcadores K012 (6,7-9 %), K058 (3,3-4,5 %), K068 (0,6-0,7 %), K100 (1,7-2,6 %).

6. Una fracción bioactiva según la reivindicación 4 en la que la fracción soluble en acetona obtlenida a partir del extracto alcohólico comprende los compuestos marcadores K012 (7,9-12 %), K058 (1,7-3,0 %), K068 (0,7-1,2 %) y K100 (2,5-4,5%).

7. Una fracción bioactiva según la reivindicación 4, en la que la fracción alcohólica/fracción soluble en acetona tiene una acción de conservación ósea en condiciones de deficiencia de estrógenos.

8. Una fracción bioactiva según la reivindicación 4, en la que la fracción alcohólica mejora la obtención de PBM aumentando las células osteoprogenitoras en la médula ósea.

OH

OH O

K058: R1=R2=OH K012: Ri=R2=OH. 2,3 doble enlace K068: R,=R2=H K100: R^OH, R2=H

Fórmula General 2

9. Una fracción bioactiva según la reivindicación 4, en la que el extracto/fracción bioactiva se obtiene a partir de partes de plantas seleccionadas entre corteza de tallo, ramitas de Ulmus wallichiana.

10. Un compuesto de fórmula general 1 según la reivindicación 1 y un extracto/fracción bioactiva o sus compuestos marcadores según la reivindicación 4, obtenido a partir de Ulmus wallichiana, individualmente o en forma de una de sus combinaciones, para su uso en la gestión o prevención o tratamiento de un trastorno óseo.

11. El extracto/fracción bioactiva para su uso según la reivindicación 10, en el que la dosis eficaz del extracto alcohólico varía entre 500-750 mg/kg y la fracción soluble en acetona varía entre 25 mg/kg y 100 mg/kg.

K068: R1=R2=H K100: R^OH, R2=H

Formula General 2

12. Los compuestos para su uso según la reivindicación 10, en los que los compuestos de fórmula 2, K012, K058, K068, K100 exhiben de 70 a 100 % de aumento de actividad de ALP en comparación con el control (vehículo) en osteoblastos de bóveda craneal tratados a una concentración que varía de 0,1 nM a 1,0 pM.

13. Los compuestos para su uso según la reivindicación 10, en los que los compuestos de fórmula 2 aumentan la deposición de calcio naciente de 10 a 25 % en osteoblastos tratados con K012, K058, K068 y K100, en comparación con el control (vehículo).

14. Los compuestos para su uso según la reivindicación 10, en los que los compuestos de fórmula 2 mejoran la mlnerallzación de BMC, lo cual se requiere para su acción osteogénlca en el crecimiento y mantenimiento del esqueleto.

15. Los compuestos para su uso según la reivindicación 10, en los que los compuestos de fórmula 2 se usan en combinación en proporciones que varían entre 0,25-1,0 (K068): 1,0-5,0 (K100): 2,5-7,5 (K058): 5,0-12,5 (K012).

16. Los compuestos para su uso según la reivindicación 10, en los que los compuestos de fórmula 2, K012, K058, favorecen la proliferación, diferenciación y mineralización de osteoblastos.

17. Los compuestos para su uso según la reivindicación 10, en los que los compuestos de fórmula 2, K068 y K100 favorecen la diferenciación y mineralización de osteoblastos y tienen una actividad anti-adipogénica en estirpe celular 3T3 L1.

18. Los compuestos para su uso según la reivindicación 10, en los que los compuestos de fórmula 1, K058 ejerce acción osteogénica por medio de la sobre-regulación de la síntesis de diversos genes seleccionados entre el grupo COL-1, Cbfa-1, ALP, OCN, BMP-2 que favorecen las funciones de osteoblastos e inhiben la función de osteoclastos.

19. Los compuestos según la reivindicación 10, en los que los compuestos de fórmula 1, K058 estimulan la incorporación de BrdU de cultivos semi-confluyentes de osteoblastos de bóveda craneal de 25 a 75 % a una concentración que varía de 10 nM a 1,0 pM.

20. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de extracto/fracción bioactiva según la reivindicación 4, opcionalmente junto con uno o más aditivos, vehículos y diluyentes farmacéuticamente aceptables.

21. Una composición según la reivindicación 20, en la que la composición comprende: un compuesto seleccionado entre un grupo que consiste en K058 o K100 representado por medio de la fórmula general 1 individualmente, opcionalmente junto con uno o más aditivos, vehículos y diluyentes farmacéuticamente aceptables.

22. Una composición farmacéutica según la reivindicación 20, en la que los diluyentes usados están seleccionados entre un grupo que consiste en almidón, lactosa y fosfato de dicalcio.

23. Una composición farmacéutica según la reivindicación 20, en la que el aditivo farmacéuticamente aceptable en forma de lubricante está seleccionado entre un grupo que comprende talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o esteorotos, polletllen glicoles sólidos, lauril sulfato de sodio o cualquier otro ingrediente de naturaleza similar solo o en una combinación apropiada.

24. Una composición farmacéutica según la reivindicación 20, en la que es administrada una dosis de dicha composición a una dosis unitaria de 500 a 750 mg/kg de peso corporal para el extracto alcohólico y de 25 a 100 mg/kg de peso corporal para la fracción soluble en acetona.

25. Una composición farmacéutica según la reivindicación 20, en la que un extracto alcohólico (C002) procede de Ulmus wallichiana que tiene acción de conservación ósea en condiciones de deficiencia de estrógenos, que no tiene acción antagonista de estrógenos a nivel uterino, mejora la obtención de PBM aumentando las células osteoprogenltoras en médula ósea en ratas hembras en desarrollo.

26. Un procedimiento de preparación del extracto/fracclón y los compuestos de fórmula 1 de Ulmus wallichiana, en el que el procedimiento comprende:

(a) proporcionar la planta Ulmus wallichiana,

(b) pulverizar el material de la planta,

(c) extraer el material vegetal en forma de polvo con disolvente prótlco a temperatura ambiente,

(d) filtrar el extracto,

(e) concentrar el extracto a presión reducida,

(f) triturar el extracto con hexano para retirar los constituyentes no polares,

(g) secar el residuo a vacío para obtener un polvo que fluye libremente para proporcionar el extracto deseado,

(h) disolver el extracto obtenido en la etapa (g) en agua,

(i) precipitar el extracto acuoso por medio de adición de n-butanol,

(j) filtrar el precipitado blanco para obtener el compuesto K058,

(k) cristalizar el compuesto de la etapa (j) con la mezcla de metanol y acetato de etilo,

(l) filtrar el compuesto cristalizado,

(m) secar el compuesto para obtener K058 en forma de polvo blanco que fluye libremente,

(n) concentrar el filtrado obtenido en la etapa (I) y triturar con acetona para obtener una fracción soluble en acetona,

(o) aislar los compuestos K012, K068, K100 a partir de la fracción soluble en acetona de la etapa (n) por medio de métodos cromatográficos convencionales.

27. Un procedimiento según la reivindicación 26, en el que el alcohol usado para la extracción está seleccionado entre el grupo que consiste en metanol, etanol, propanol o una combinación apropiada de los mismos.

28. Un procedimiento según la reivindicación 26, en el que los disolventes usados para la trituración están seleccionados entre acetona, etil metil cetona, diclorometano, cloroformo, acetato de etilo, metanol o una combinación apropiada de los mismos.

29. Un compuesto de fórmula general K012 o K068 para su uso en el tratamiento de trastornos óseos.

K012: R1 = R2=OH ,2,3 doble enlace K068: R1 = R2=H

30. Un compuesto para su uso según la reivindicación 29, en el que el compuesto estimula la diferenciación de osteoblastos.