Nuevo antibiótico que contiene un anticuerpo de simulación, método de preparación y aplicación del mismo.

Antibiótico que comprende un mimético de anticuerpo y una colicina,

o que comprende un mimético de anticuerpo y un dominio formador de canal de una colicina, estando el mimético de anticuerpo unido covalentemente al extremo carboxilo del polipéptido de la colicina o el dominio formador de canal de la colicina, en el que la colicina se selecciona del grupo que consiste en colicina E1, la, lb, A, B, N; en el que dicho mimético de anticuerpo se produce fusionando dos regiones determinantes de complementariedad (CDR), VHCDR1 y VLCDR3 a través de una región de entramado relacionada VHFR2 de una inmunoglobulina; en el que el mimético de anticuerpo reconoce específicamente porinas bacterianas.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CN2010/077351.

Solicitante: Protein Design Lab, Ltd.

Nacionalidad solicitante: China.

Dirección: East 1000 Meters Qianshajian, Sujiatuo, Haidian District Beijing 100095 CHINA.

Inventor/es: QIU,XIAOQING.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K38/16 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › Péptidos que tienen más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados.
  • A61K47/48 A61K […] › A61K 47/00 Preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos utilizados, p. ej. portadores, aditivos inertes. › estando el ingrediente no activo químicamente unido al ingrediente activo, p. ej. conjugados polímero-medicamento.
  • A61P31/04 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.A61P 31/00 Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos, quimioterápicos. › Agentes antibacterianos.
  • C07K19/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Péptidos híbridos (Inmoglobulinas híbridas compuestas   solamente de inmoglobulinas C07K 16/46).
  • C12N15/62 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
  • C12N15/63 C12N 15/00 […] › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
  • C12P21/02 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › que tienen una secuencia conocida de varios aminoácidos, p. ej. glutation.

PDF original: ES-2538840_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Nuevo antibiótico que contiene un anticuerpo de simulación, método de preparación y aplicación del mismo Campo de la invención

La presente invención pertenece al campo de la biología y la medicina, y especialmente se refiere a un antibiótico novedoso que comprende un mimético de anticuerpo, a sus métodos de preparación y a usos del mismo.

Técnica relacionada

Desde que empezaron a usarse la penicilina y otros antibióticos en 1944, Diplococcus meningitides, y otras bacterias patógenas potencialmente mortales tales como Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa y Neisseria meningitidis han adquirido resistencia farmacológica. Según informes relativos publicados por el Centro de Control de Enfermedades (CDC) de los Estados Unidos en los últimos años, sería probable que estos antibióticos perdieran su eficacia completamente en 1 ó 2 años.

Los presentes antibióticos destruyen bacterias patógenas restringiendo la síntesis de pared celular, restringiendo o interfiriendo con la ruta de síntesis y metabolismo de proteínas y ácido nucleico de la bacteria. Sin embargo, estos métodos de antibiosis es más probable que conduzcan a resistencia farmacológica que resulta de la mutación bacteriana. Por tanto, los científicos se han dedicado a desarrollar antibióticos novedosos. Una de las direcciones comparativamente prometedoras es imitar el mecanismo de interdestrucción entre cepas heterólogas homogéneas para desarrollar antibióticos novedosos. En la naturaleza, varias toxinas bacterianas pueden formar directamente canales iónicos en la citomembrana bacteriana para destruir bacterias. La muestra típica es una clase de toxina bacteriana secretada por E. coli, colicina. Una de las ellas es colicina la, descubierta en 1952 por Jacob. Tras esfuerzos de generaciones, en 1996 se dio a conocer la estructura espacial transmembrana de la colicina la cuando se abren canales iónicos así como cuando se cierran en la película bimolecular lipídica artificial (Qiu et al, Major transmembrane movement associated with Colicin la channel gating. J. Gen. Physiology, 17: 313-328 (1996)). Esta teoría establecida puso la base para diseñar y preparar antibióticos novedosos a nivel molecular.

Tal como se mencionó anteriormente, la colicina es una clase ideal de modelo de antibiótico de canal iónico, pero la colicina silvestre sólo puede actuar sobre cepas heterólogas homogéneas. Debe cambiarse el direccionamiento de la colicina para que pueda actuar sobre otras bacterias patógenas. La porina, una clase de proteína de poro que existe en la membrana externa de las bacterias, las mitocondrias o los cloroplastos, permite que pasen a su través moléculas más grandes. La porina también tiene una inmunogenicidad superior, y puede inducir expresión a alto nivel de anticuerpo monoclonal en células huésped. Debe ser una dirección de desarrollo ideal para la investigación de anticuerpos, si puede diseñarse un mimético de anticuerpo con una mejor capacidad de reconocimiento para cambiar el direccionamiento de la colicina, usando el anticuerpo específico para porinas en la membrana externa de bacterias como el tipo previo del mimético de anticuerpo.

Muthukkaruppan et al., Immunol. Lett. 33 (1992), págs. 21-6 dan a conocer anticuerpos monoclonales contra porinas de Salmonella y estudian sus posibles efectos protectores contra la infección por Salmonella.

El documento WO 27/83175 da a conocer un polipéptido que comprende un anticuerpo o mimético de anticuerpo y una porina, en el que el anticuerpo es específico para la glicoproteína de la envuelta gp35/22 del virus de Epstein-Barr, y su uso en cáncer asociado a virus. El documento WO 27/83175 es aparentemente del mismo inventor que la presente solicitud.

Sumario de la invención

Para superar los defectos técnicos anteriores y compensar una deficiencia en la técnica, la presente invención proporciona un anticuerpo novedoso. Su capacidad antibacteriana es mil veces más potente que antibióticos regulares. Debido a su mecanismo de acción único, las bacterias patógenas apenas pueden adquirir resistencia farmacológica como resultado de mutación. Y el antibiótico no dañará células humanas normales cuando destruye bacterias patógenas.

Realizaciones de la invención son

1. Un antibiótico que comprende un mimético de anticuerpo y una colicina, o que comprende un mimético de anticuerpo y un dominio formador de canal de una colicina, estando el mimético de anticuerpo unido covalentemente al extremo carboxilo del polipéptido de la colicina o el dominio formador de canal de la colicina, en el que la colicina se selecciona del grupo que consiste en colicina E1, la, Ib, A, B, N; en el que dicho mimético de anticuerpo se produce fusionando dos regiones determinantes de complementariedad (CDR), VhCDRi y Vi_CDR3 a través de una región de entramado relacionada (VhFR2) de una inmunoglobulina; en el que la inmunoglobulina reconoce específicamente porinas bacterianas.

2. El antibiótico según la realización 1, en el que la bacteria es Neisseria meningitides, la porina es PorA en la membrana externa de células de Neisseria meningitidis.

3. El antibiótico según la realización 2, en el que la inmunoglobulina consiste en un polipéptido de SEQ ID NO: 21 y un polipéptido de SEQ ID NO: 22 unidos covalentemente.

4. El antibiótico según la realización 1 o la realización 2 o la realización 3, en el que la colicina es la.

5. Una molécula peptídica que comprende un mimético de anticuerpo y una colicina, o que comprende un mimético de anticuerpo y un dominio formador de canal de una colicina, estando el mimético de anticuerpo unido covalentemente al extremo carboxilo del polipéptido de la colicina o el dominio formador de canal de la colicina, en el que la colicina se selecciona del grupo que consiste en colicina E1, la, Ib, A, B, N; en el que dicho mimético de anticuerpo se produce fusionando dos regiones determinantes de complementariedad (CDR), VhCDRi y Vi_CDR3 a través de una región de entramado relacionada (VHFR2) de una inmunoglobulina; en el que la inmunoglobulina reconoce específicamente porinas bacterianas.

6. Una de las moléculas peptídicas de fusión según la realización 5, exponiéndose su secuencia de aminoácidos en SEQ ID NO. 6.

7. Una molécula de ácido nucleico que codifica para una molécula peptídica de fusión presentada en la realización 5 o la realización 6.

8. La molécula de ácido nucleico según la realización 7, exponiéndose su secuencia de nucleótidos en SEQ ID NO.

9. Un plásmido recombinante que contiene una molécula de ácido nucleico según las realizaciones 7 u 8.

1. Un método de preparación de uno cualquiera de los antibióticos presentados en las realizaciones 1-4, transfectándose uno de los plásmidos recombinantes de la realización 9 en un sistema de expresión, y preparándose y purificándose el antibiótico del polipéptido expresado.

11. El antibiótico según una cualquiera de las realizaciones 1-4 para su uso en la preparación de un medicamento antibacteriano.

12. El antibiótico para su uso según la realización 11, en el que el medicamento antibacteriano se usa para destruir Neisseria meningitidis, Enterococcus faecalis resistente a vancomicina, Staphylococcus aureus resistente a meticilina o Pseudomonas aeruginosa resistente a múltiples fármacos.

Un antibiótico novedoso que comprende un mimético de anticuerpo y una colicina, o que comprende un mimético de anticuerpo y un dominio formador de canal de una colicina, estando el mimético de anticuerpo unido covalentemente al extremo carboxilo del polipéptido de la colicina o el dominio formador de canal de la colicina, en el que la colicina se selecciona de un grupo que consiste en colicina E1, la, Ib, A, B, N; en el que dicho mimético de anticuerpo se produce fusionando dos regiones determinantes de complementariedad (CDR), VhCDRi y V1.CDR3 a través de una región de entramado relacionada (VHFR2) de una inmunoglobulina; en el que la Inmunoglobulina reconoce específicamente porinas bacterianas.

En el que la bacteria es Neisseria meningitides, la porlna es PorA en la membrana externa de células de Neisseria meningitidis.

En el que la inmunoglobulina consiste en dos polipéptidos unidos covalentemente con número de registro de PUBMED 2MPA_H (SEQ ID NO: 21) y número de registro de PUBMED 2MPA_L (SEQ ID NO: 22).

En el que la colicina es la.

Una molécula peptídica, que comprende un mimético de anticuerpo y una colicina, o que comprende un mimético de anticuerpo y un dominio formador de canal de una colicina, estando el mimético de anticuerpo unido covalentemente al extremo carboxilo del... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

Antibiótico que comprende un mimético de anticuerpo y una colicina, o que comprende un mimético de anticuerpo y un dominio formador de canal de una colicina, estando el mimético de anticuerpo unido cova lente mente al extremo carboxilo del polipéptido de la colicina o el dominio formador de canal de la colicina, en el que la colicina se selecciona del grupo que consiste en colicina E1, la, Ib, A, B, N; en el que dicho mimético de anticuerpo se produce fusionando dos reglones determinantes de complementariedad (CDR), VhCDRi y Vi_CDR3 a través de una región de entramado relacionada VhFR2 de una ¡nmunoglobullna; en el que el mimético de anticuerpo reconoce específicamente porinas bacterianas.

Antibiótico según la reivindicación 1, en el que la bacteria es Neisseria meningitides, la porlna es PorA en la membrana externa de células de Neisseria meningitidis.

Antibiótico según la reivindicación 2, en el que la ¡nmunoglobullna consiste en un polipéptido de SEQ ID NO: 21 y un polipéptido de SEQ ID NO: 22 unidos covalentemente.

Antibiótico según la reivindicación 1 o la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en el que la colicina es la.

Molécula peptldica que comprende un mimético de anticuerpo y una colicina, o que comprende un mimético de anticuerpo y un dominio formador de canal de una colicina, estando el mimético de anticuerpo unido covalentemente al extremo carboxilo del polipéptido de la colicina o el dominio formador de canal de la colicina, en el que la colicina se selecciona del grupo que consiste en colicina E1, la, Ib, A, B, N; en el que dicho mimético de anticuerpo se produce fusionando dos regiones determinantes de complementariedad (CDR), VhCDRi y V1.CDR3 a través de una región de entramado relacionada (VhFR2) de una ¡nmunoglobulina; en el que la ¡nmunoglobulina reconoce específicamente porinas bacterianas.

Una de las moléculas peptldicas de fusión según la reivindicación 5, exponiéndose su secuencia de aminoácidos en SEQ ID NO. 6.

Molécula de ácido nucleico que codifica para una molécula peptldica de fusión según la reivindicación 5 o la reivindicación 6.

Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 7, exponiéndose su secuencia de nucleótidos en SEQ ID

NO. 5.

Plásmido recombinante que contiene una molécula de ácido nucleico según las reivindicaciones 7 u 8.

Método de preparación de uno cualquiera de los antibióticos reivindicados en las reivindicaciones 1-4, transfectándose uno de los plásmidos recombinantes según la reivindicación 9 en un sistema de expresión, y separándose y purificándose el antibiótico del polipéptido expresado.

Antibiótico según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para uso en la preparación de un medicamento anti bacteriano.

Antibiótico para su uso según la reivindicación 11, en el que el medicamento antibacteriano se usa para destruir Neisseria meningitidis, Enterococcus faecalis resistente a vancomicina, Staphylococcus aureus resistente a meticilina o Pseudomonas aeruginosa resistente a múltiples fármacos.


 

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