Nueva inmunoterapia contra tumores neuronales y cerebrales.

Péptido seleccionado del grupo siguiente

a) Péptido consistente en la secuencia de aminoácidos conforme a SEQ ID N.

º 3, y

b) Péptido acorde con a), en el que uno o dos de los residuos de aminoácidos están alterados de modo que

el aminoácido A de la posición 1 es sustituido por I, L, F, K, M, Y o V,

el aminoácido I de la posición 2 es sustituido por M, o L,

el aminoácido I de la posición 3 es sustituido por A, Y, F, P, M, S o R,

el aminoácido D de la posición 4 es sustituido por E, G, P o T,

el aminoácido G de la posición 5 es sustituido por I, K, Y, N, F o V,

el aminoácido V de la posición 6 es sustituido por I, L o T,

el aminoácido E de la posición 7 es sustituido por A, Y o H,

el aminoácido S de la posición 8 es sustituido por K o E, y

el aminoácido V de la posición 9 es sustituido por L,

en que dicho péptido mantiene la capacidad para unirse a una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad humano (MHC) de clase I, y en que dicho péptido es capaz de estimular los linfocitos T CD8.

Nueva ¡nmunoterapia contra tumores neuronales y cerebrales

La presente invención se refiere a péptidos, ácidos nucleicos y células destinados a la utilización en métodos inmunoterapéuticos. En particular, la presente invención se refiere a la ¡nmunoterapia contra el cáncer. La presente invención se refiere asimismo a epítopos peptídicos para linfocitos T citotóxicos (CTL) asociados a tumores, solos o en combinación con otros péptidos asociados a tumores que pueden servir como principios activos farmacéuticos en composiciones vacunales destinadas a estimular respuestas inmunitarias antitumorales. La presente invención se refiere a secuencias peptídicas derivadas de moléculas HLA de clase I de células tumorales humanas que pueden ser utilizadas en composiciones vacunales para desencadenar respuestas inmunitarias antitumorales.

Antecedentes de ¡a invención

Los gliomas son tumores cerebrales originados en las células gliales del sistema nervioso. Las células gliales, llamadas por lo común neuroglia o simplemente glía, son células no neuronales que proporcionan soporte y nutrición, mantienen la homeostasia, forman la mielina e intervienen en la transmisión de señales en el sistema nervioso. Los dos tipos más importantes de glioma son el astrocitoma y el oligodendroglioma, llamados así por el tipo de célula glial que los origina, esto es, astrocitos y oligodendrocitos. En el grupo de los astrocitomas se encuentra el glioblastoma multiforme (denominado en lo sucesivo glioblastoma) que es el tumor cerebral maligno más frecuente en adultos pues supone alrededor del 40% de los tumores cerebrales malignos y alrededor del 50% de los gliomas (CBTRUS, 2006). El glioblastoma invade con agresividad el sistema nervioso central y entre todos los gliomas es el que ostenta el nivel más alto de malignidad (grado IV). Pese a los avances en el tratamiento logrados merced a las mejoras en las técnicas de neuroimagen, la microcirugía y las opciones terapéuticas como la temozolomida o la radiación, el glioblastoma sigue siendo incurable (Macdonald, 2001; Burton and Prados, 2000; Prados and Levin, 2000). La tasa de letalidad de este tumor cerebral es muy alta: la esperanza de vida media oscila entre 9 y 12 meses desde el diagnóstico. La tasa de supervivencia a 5 años entre 1986 y 1990 era del 8,0%. Hasta la fecha, la supervivencia cinco años después del tratamiento agresivo que incluye la resección macroscópica del tumor sigue siendo inferior al 10% (Burton and Prados, 2000; Nieder et al., 2000; Napolitano et al., 1999; Dazzi et al., 2000). A tenor de lo anterior queda patente la necesidad de nuevos métodos terapéuticos eficaces.

El grado de ¡ndiferenciación de las células tumorales del glioblastoma es el más elevado de todos los tumores cerebrales, lo que explica su alto potencial de migración y proliferación y su elevada invasividad y, por ende, su pronóstico funesto. Los glioblastomas provocan la muerte por el crecimiento rápido, agresivo e infiltrante que demuestran en el cerebro. El crecimiento infiltrante es el responsable del carácter inoperable de estos tumores. Los glioblastomas también son relativamente resistentes a la radioterapia y la quimioterapia, por lo que la recurrencia postratamiento es elevada. Además, la respuesta inmunitaria contra las células neoplásicas resulta claramente ineficaz a la hora de lograr su erradicación total después de la resección y la radioterapia (Roth and Weller, 1999; Dix et al., 1999; Sablotzki et al., 2000).

El glioblastoma se clasifica en primario (de novo) y secundario dependiendo de las diferencias en el mecanismo génico de la transformación maligna que experimentan los astrocitos ¡ndiferenciados o las células precursoras gliales. El glioblastoma secundario afecta a personas jóvenes menores de 45 años. A lo largo de 4 o 5 años, en promedio, el glioblastoma secundario evoluciona de un astrocitoma de bajo grado a un astrocitoma indiferenciado. Por el contrario, el glioblastoma primario afecta sobre todo a personas más mayores, con una media de edad de 55 años. Por norma general, el glioblastoma primario aparece como un glioblastoma fulminante caracterizado por la progresión del tumor en 3 meses desde el estado sin anomalías clínicas ni patológicas (Pathology and Genetics of the Nervous Systems. 29-39 (IARC Press, Lyon, Francia, 2000)).

El glioblastoma migra a lo largo de los nervios mielinizados y se disemina ampliamente por el sistema nervioso central. En la mayoría de casos el tratamiento quirúrgico sólo consigue un efecto terapéutico limitado (Neurol. Med. Chir. (Tokio) 34, 91-94, 1994; Neurol. Med. Chir. (Tokio) 33, 425-458, 1993; Neuropathology 17, 186-188, 1997) (Macdonald, 2001; Prados and Levin, 2000).

Las células del glioma maligno eluden la detección del sistema ¡nmunitario del anfitrión mediante la producción de agentes ¡nmunodepresores que alteran la proliferación de los linfocitos T y la producción por parte de estos de la citocina ¡nmunoestimulante IL-2 (Dix et al., 1999).

Las neoplasias intracraneales pueden surgir en cualquiera de las estructuras o tipos celulares del SNC: encéfalo, meninges, glándula pituitaria, cráneo, e incluso tejido embrionario residual. La incidencia anual total de tumores cerebrales primarios en Estados Unidos es de 14 casos por 100. 000. Los tumores cerebrales primarios más frecuentes son los meningiomas, que representan el 27% de los tumores cerebrales primarios, y los glioblastomas, que suponen otro 23% (los glioblastomas suponen el 40% de los tumores cerebrales malignos en los adultos). Muchos de esos tumores son agresivos y presentan un alto grado. En la población pediátrica los tumores cerebrales primarios son los tumores sólidos más frecuentes y la segunda causa de muerte por cáncer después de la leucemia.

A día de hoy prosigue la búsqueda de un tratamiento eficaz contra el glioblastoma. Para combatir tales células neoplásicas se está estudiando la ¡nmunoterapia, o el tratamiento basado en el reclutamiento del sistema

¡nmunitario. Los primeros resultados alentadores se obtuvieron en estudios ¡nmunoterapéuticos en humanos, en el curso de los cuales se pudieron generar respuestas de CTL específicas de antígeno que prolongaron la mediana del tiempo de supervivencia respecto al tratamiento estándar con una toxicidad mínima (Heimberger et al., 2006).

La presente solicitud pretende resolver un problema ofreciendo una nueva opción terapéutica eficaz y segura contra los tumores cerebrales que además mejora el bienestar de los pacientes porque prescinde del uso de agentes quimioterapéuticos o de otro tipo que pueden causar efectos secundarlos graves.

Breve descripción de! principio de ¡a invención

Todos los términos utilizados en la presente memoria se definen del modo indicado a continuación a menos que se indique lo contrario.

El término «péptido» designa aquí una serle de residuos de aminoácidos conectados entre sí típicamente mediante enlaces peptídicos entre los grupos amlno-alfa y carbonllo de los aminoácidos adyacentes. Los péptldos tienen normalmente 9 aminoácidos de longitud, pero pueden tener de 8 a 14 aminoácidos de longitud.

El término «oligopéptido» designa aquí una serle de residuos de aminoácidos conectados entre sí típicamente mediante enlaces peptídicos entre los grupos amlno-alfa y carbonllo de los aminoácidos adyacentes. La longitud del ollgopéptldo no es crucial en la Invención, siempre que se mantenga el epítopo o epítopos adecuados. Los ollgopéptldos suelen tener una longitud Inferior a unos 30 aminoácidos y mayor de 14, aproximadamente.

El término «polipéptido» designa una serle de residuos de aminoácidos conectados entre sí típicamente por enlaces peptídicos entre los grupos amlno-alfa y carbonllo de los aminoácidos adyacentes. La longitud del polipéptido no es crucial en la Invención, siempre que se mantengan los epítopos adecuados. En contraste con los términos «péptido» y «ollgopéptldo», el término «polipéptido» se refiere a moléculas proteicas de más de unos 30 residuos de longitud.

Un péptido, ollgopéptldo, proteína o pollnucleótldo que codifica dicha molécula es «inmunogénico» (y, por lo tanto, un «¡nmunógeno» en la presente invención), si es capaz de inducir una respuesta inmunitaria. En el caso de la presente Invención, la ¡nmunogenicidad se define más específicamente como la capacidad para desatar una respuesta por parte de los CTL. Por lo tanto, un «¡nmunógeno» sería una molécula capaz de inducir una respuesta Inmunitaria y, en el caso de la presente invención, una molécula capaz de inducir una respuesta de los CTL.

Un «epítopo» de linfocito T es una molécula peptídica corta que se une a una... [Seguir leyendo]

1. Péptido seleccionado del grupo siguiente

a) Péptido consistente en la secuencia de aminoácidos conforme a SEQ ID N. ° 3, y

b) Péptido acorde con a), en el que uno o dos de los residuos de aminoácidos están alterados de modo que

el aminoácido A de la posición 1 es sustituido por I, L, F, K, M, Y o V, el aminoácido I de la posición 2 es sustituido por M, o L, el aminoácido I de la posición 3 es sustituido por A, Y, F, P, M, S o R, el aminoácido D de la posición 4 es sustituido por E, G, P o T, el aminoácido G de la posición 5 es sustituido por I, K, Y, N, F o V, el aminoácido V de la posición 6 es sustituido por I, L o T, el aminoácido E de la posición 7 es sustituido por A, Y o Fi, el aminoácido S de la posición 8 es sustituido por K o E, y el aminoácido V de la posición 9 es sustituido por L,

en que dicho péptido mantiene la capacidad para unirse a una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad humano (MHC) de clase I, y en que dicho péptido es capaz de estimular los linfocitos T CD8.

2. Péptido conforme a la reivindicación 1, en que dicho péptido incluye enlaces no peptídicos entre aminoácidos del mismo.

3. Péptido acorde con la reivindicación 1 o 2, en que dicho péptido forma parte de una proteína de fusión que comprende aminoácidos N-terminales de la cadena invariable (l¡) asociada al antígeno HLA-DR.

4. Ácido nucleico, que codifica un péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 a 3, o un vector de expresión que expresa dicho ácido nucleico.

5. Péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, el ácido nucleico o el vector de expresión acorde con la reivindicación 4 para la utilización en medicina.

6. Célula hospedadora que no es una célula madre embrionaria humana, que comprende el ácido nucleico o el vector de expresión de conformidad con la reivindicación 4.

7. La célula hospedadora acorde con la reivindicación 6, en dicha célula hospedadora es una célula dendrítica o célula presentadora de antígeno.

8. Método /n v/fro para producir linfocitos T citotóxicos (CTL) activados, el cual comprende la puesta en contacto en condiciones /n v/fro de CTL con moléculas MHC de clase loll humanas cargadas con antígeno expresadas en la superficie de una célula presentadora de antígeno o un constructo artificial que imite a una célula presentadora de antígeno durante un periodo de tiempo suficiente para activar dichos CTL de una manera específica de antígeno, siendo dicho antígeno un péptido conforme a la reivindicación 1.

9. Péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, el ácido nucleico o el vector de expresión acorde con la reivindicación 4, o la célula acorde con la reivindicación 6 o 7 para el uso en el tratamiento del cáncer cerebral.

10. Vacuna que comprende el péptido acorde con cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2 para el uso en el tratamiento del cáncer cerebral.

11. La vacuna acorde con la reivindicación 10 para el uso acorde con la reivindicación 10, en que dicho cáncer se selecciona entre astrocitoma, astrocitoma pilocítico, tumor neuroepitelial disembrioplástico, oligodendrogliomas, ependimoma, glioblastoma multiforme, gliomas mixtos, oligoastrocitomas, meduloblastoma, retinoblastoma, neuroblastoma, germinoma, teratoma, gangliogliomas, gangliocitoma, gangliocitoma central, tumores neuroectodérmicos primitivos (PNET), meduloblastoma, meduloepitelioma, neuroblastoma, retinoblastoma, ependimoblastoma, tumores del parénquima pineal, pineocitoma, pineoblastoma, tumores de células ependimales, tumores del plexo coroldeo, tumores neuroepltellales de origen incierto, gliomatosis cerebri, astroblastoma y glioblastoma.

12. Uso de un péptido acorde con la reivindicación 1 o 2 para generar y desarrollar anticuerpos específicos contra el complejo MHC/péptido.